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张云龙: 作品数：24 被引量：54H指数：4; 供职机构：东华大学化学化工与生物工程学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学文化科学医药卫生化学工程更多>>

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人体鼠双微体2C端结构域ZF&RING重组蛋白的表达、纯化及单体结构研究: 2016年; 目的:通过在大肠杆菌SUMO系统中对鼠双微体2(MDM2)C端结构域ZF&RING(aa.300-491)进行构建并进行表达,酶切和纯化,从而得到MDM2蛋白C端结构域的单体结构,为其后续的晶体研究及MDM2非p53依赖途径的研究提供途径。方法:利用大肠杆菌SUMO表达系统对zf&ring基因进行重组构建。构建成功的表达载体经诱导表达优化后,通过Ni-NTA进行亲和层析纯化,并利用SDS-PAGE及Western blot鉴定分析。纯化后的融合蛋白经ULP1酶切得到目的蛋白ZF&RING,并通过Hi Trap Q FF离子交换层析检验和去除杂质DNA。最后通过分子筛检验其蛋白结构。结果:构建了SUMO-ZF&RING重组载体。重组载体在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化并酶切后的目的蛋白ZF&RING以单体形式存在。结论:通过原核表达、纯化、酶切及层析发鉴定,成功获得高稳定、高纯度且为单体结构的MDM2 C端结构域ZF&RING蛋白,为后续关于MDM2,尤其是其非p53依赖途径的结构学和功能学提供了思路和途径。; 孟希陈婷张云龙黄旋刘晋源陆昌瑞; 关键词：C端结构域蛋白表达纯化

噬菌体phi29末端酶gp16蛋白C端结构域在溶液中的构象分析被引量：1: 2019年; 噬菌体phi29是一种双链DNA病毒,它的增殖和成熟过程需要将较大的子代DNA包装入一个空间极其有限的新生病毒衣壳中,这一步骤由其转运马达完成.转运马达具有三个部分:头颈连接器蛋白(the connector)、pRNA和ATP水解酶蛋白(gp16).在结构预测中发现gp16蛋白的C端结构域可能与pRNA或DNA结合,但尚未有相关文献可以证明这种相互作用,因此其结构的解析成为研究其功能的关键.本文利用大肠杆菌SUMO表达系统,对噬菌体phi29 gp16蛋白的C端结构域进行重组构建并诱导表达后,通过Ni-NTA亲和层析纯化,再用分子排阻色谱获得高纯度的目的蛋白质单体,纯度达到95%左右.最后用X射线小角散射技术(small angle X-ray scattering)对其构象进行分析,收集小角散射数据,当目的蛋白的浓度为1.3 g/L、所得到的目的蛋白的三维结构与同源蛋白FtsK的晶体结构高度拟合,且通过CRYSOL软件反推计算的曲线与实验曲线高度重合.通过原核表达、纯化及结构分析,成功获得了该结构域在溶液中的状态信息.这一研究不仅为后续关于该结构域的功能研究奠定基础,也为病毒感染的诊断和治疗提供新思路.; 武飞飞蔡汝洁陈婷张云龙陆昌瑞; 关键词：C端结构域

“生物分离工程”课程思政教育融合探索被引量：12: 2020年; 课程思政是新时期高校教育的新要求。将思政教育与专业教育融合,实现在专业课程教学的同时加强价值导向与引领,提升学生学习的内在动力,激发学生的创新精神。在工科专业课程教学中如何实现思政教育与学科内容的融合是实现课程思政目标的关键。以“生物分离工程”课程教学为例,探讨专业课程教学中思政内容的选择及融合,对于工科专业教学的课程思政建设具有重要意义。; 陈婷张云龙曹张军张兴群; 关键词：生物分离工程教学改革

鼠源胰岛素降解酶的原核表达及活性检测被引量：1: 2021年; 胰岛素降解酶是维持体内糖代谢平衡和蛋白质稳态的关键蛋白质,也是2型糖尿病及阿尔茨海默病临床药物的重要靶点。本研究构建了野生型鼠源胰岛素降解酶的大肠杆菌ppSUMO表达系统,并完成了鼠源胰岛素降解酶的表达纯化及功能测定。采用ppSUMO表达系统得到的融合蛋白具有组蛋白标签和ULP1酶切位点,通过ULP1酶对亲和纯化得到的融合蛋白进行酶切,可以获得无标签胰岛素降解酶。另外,根据胰岛素降解酶的理化性质(如等电点、相对分子质量),采用离子交换层析和凝胶过滤层析两种纯化方法,可完成蛋白质的纯化。纯化所获得的野生型胰岛素降解酶通过特异性的荧光底物Mca-RPPGFSAFK(Dnp)进行活性检测。本方法获得的野生型胰岛素降解酶的纯度约为90%,对已知抑制剂杨梅素具有很好的抑制响应。以上结果提示,该表达系统获取的胰岛素降解酶具有较好的纯度和活性,为日后胰岛素降解酶的结构与功能研究及体外临床药物研发奠定了实验基础。; 彭彦皓肖树陈丽姚昱祺张云龙陆昌瑞陈婷; 关键词：蛋白质纯化杨梅素

具有可见光活性的氮掺杂TiO_2光催化剂的制备及光催化性能被引量：4: 2010年; 采用浓氨水处理Ti(SO4)2溶液,然后经过滤、干燥、煅烧制备了一种氮掺杂TiO2光催化剂TiO2-XNX,其最佳煅烧温度为400℃。对该光催化剂的XRD谱图进行分析,结果表明,TiO2-XNX的晶型为锐钛矿相。紫外—可见吸收光谱表明,该光催化剂在可见光区具有明显的吸收。甲基橙溶液的降解实验结果表明,制备的TiO2-XNX光催化剂具有可见光(波长λ>400nm)活性。; 许士洪苏晓锋张云龙李登新上官文峰; 关键词：光催化剂可见光

大腹圆蛛Fosmid文库的构建及MaSp基因筛选方法的探讨被引量：3: 2010年; 介绍了构建大腹圆蛛Fosmid基因组文库及牵引丝蛋白(MaSp)基因克隆筛选的全过程.采用改良CTAB法提取大片段基因组DNA,通过自主构建的电洗脱核酸回收装置分离回收30～40kbDNA片段,经补平磷酸化、与pCC2FOS载体连接、体外包装和转染EPI300TM-T1R,首次构建了无偏向性的大腹圆蛛Fosmid文库,其滴度为4.5×105cfu/mL,覆盖基因组倍数为10.以α-32P标记寡核苷酸探针对文库进行初步筛选,获得含MaSp基因的12个阳性克隆.该文库符合Fosmid文库的品质要求,为进一步筛选并研究大腹圆蛛MaSp基因序列奠定了基础.; 张云龙陈格飞陈国亮林森珠张蒙恩孟清; 关键词：大腹圆蛛 FOSMID文库

SAM-V核糖开关RNA体外转录体系优化: 2016年; 为了提高RNA体外转录效率,选取SAM-V核糖开关晶体结构模板对RNA体外转录体系进行优化。结果表明:目的RNA相对百分含量在反应时间和Mg2+添加浓度分别为8h和85m M/L时达到最高值,优化体系较标准体系目的RNA相对百分含量提高了一倍。我们的工作为下一步准备SAMV核糖开关晶体打下了基础。; 郭鑫行蔡汝洁陈婷张云龙陆昌瑞; 关键词：RNA 核糖开关体外转录

高校普及化学科学素养的窗口——浅析“化学与社会文明”课程的建设被引量：2: 2013年; 化学作为一门中心学科,在人类进步的历程中起着重要的推动作用,尤其是在先进科技不断涌现的现代,化学已渗透到几乎所有的学科领域和社会的各个层面。"化学与社会文明"课程作为普及化学科学素养的窗口,有利于高等院校培养复合型人才。东华大学开设该课程已逾十载,文章回顾和总结教学中的收获和启迪。; 张云龙杨常玲杨雪霞杜鹃邢彦军赵曙辉; 关键词：化学科学素养课程建设

人胰岛素MIP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化: 2016年; MIP即人胰岛素B27赖氨酸去三肽胰岛素(B27K-DTr I)的前体。B27K-DTr I是一种新型单体速效胰岛素类似物,其单体性质好,生物活性高,是潜在的速效人胰岛素药物。将构建好的重组质粒pp SUMO-MIP转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。对MIP融合蛋白的诱导表达时间进行一系列的优化,结果表明:重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中最优的表达条件为TB培养基、0.1 m M IPTG,15℃诱导过夜。通过表达条件的优化,每升菌液可获得30.1 mg的融合蛋白粗品。为进一步制备单体胰岛素B27K-DTr I打下了基础。; 黄旋陈婷张云龙陆昌瑞; 关键词：速效胰岛素

人肿瘤抑制因子Folliculin(FLCN)蛋白的原核表达纯化: 2019年; 肿瘤抑制因子Folliculin(FLCN)的突变或缺失会引起常染色体显性遗传病——BHD综合征,但其诱发机制不清,因而认知FLCN的结构和功能非常必要。本文利用优化pGEX-6p-1-GST-FLCN重组质粒构建了大肠杆菌原核表达系统,诱导表达GST-FLCN融合蛋白,再通过GST介质亲和层析和分子筛纯化,最后通过Xa因子蛋白酶切除GST标签,收集获取了高纯度(90%左右)的FLCN蛋白,为FLCN的结构与功能分子奠定了基础。; 申一凡黄凯悦任亚哲陈婷陆昌瑞施宇张云龙; 关键词：FOLLICULIN 蛋白表达纯化肿瘤抑制因子

张云龙

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