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内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响被引量：2: 2012年; 目的探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响。方法制备糖尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子(GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达。分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达。结果糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P<0.001)。经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P<0.05)。结论糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高。体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufm1的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程。; 刘卉芳张惠洁刘晓燕胡其娴马晓文胡小磊陈凤玲; 关键词：内质网应激巨噬细胞

过表达mimecan对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用初探: 2014年; 目的应用反转录病毒载体技术构建稳定过表达mimecan的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),并观察过表达mimecan后HUVEC增殖及凋亡的变化。方法应用反转录病毒载体构建稳定过表达mimecan的HUVEC细胞株,real-time PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白水平的表达。应用CCK-8方法检测过表达mimecan后HUVEC增殖的变化,应用AnnexinⅤ-PE染色观察过表达mimecan后HUVEC凋亡的变化。结果构建了稳定过表达mimecan的HUVEC细胞株。过表达mimecan后,HUVEC增殖能力降低,凋亡率增加。结论过表达mimecan抑制HUVEC的增殖,促进其凋亡。; 王晶沈琼娜张惠洁胡小磊陈凤玲; 关键词：人脐静脉内皮细胞过表达增殖凋亡

人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定: 2012年; 目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中。经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199。其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性。此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体。结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KI-AA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础。; 刘卉芳刘晓燕张惠洁胡小磊胡其娴马晓文陈凤玲; 关键词：GST融合蛋白多克隆抗体

妊娠糖尿病的药物治疗进展被引量：13: 2011年; 妊娠糖尿病的发病率逐年升高，其与妊娠期不良反应及母婴预后相关。目前对于妊娠糖尿病的治疗存在争议。因考虑其安全性，胰岛素治疗仍然是妊娠糖尿病药物治疗首选。最近的研究显示，超短效胰岛素类似物（赖脯胰岛素、门冬胰岛素）及口服降糖药物，主要是格列本脲及二甲双胍，同样安全、有效。但仍旧缺乏长效胰岛素类似物安全性的证据。; 张惠洁陈凤玲; 关键词：妊娠糖尿病胰岛素类似物口服降糖药物

人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达被引量：1: 2012年; 目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor,OIF)慢病毒载体,并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell,HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG,并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中,构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清,感染HASMC,48 h后加入嘌呤霉素4 d,即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株,采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC,经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体,并获得稳定过表达该基因的HASMC。; 张惠洁刘卉芳张晓娜陈凤玲; 关键词：慢病毒载体过表达

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张惠洁