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多年生黑麦草高频再生体系的建立及PEPC基因的遗传转化研究: 李蔚; 关键词：多年生黑麦草胚性愈伤组织植株再生抗旱

Cloning of Cotton Delta-12 Oleate Desaturase Gene FAD2-1 and Construction of Its ihpRNA and amiRNA Interference Vectors被引量：1: 2012年; Delta-12 oleate desaturase gene （FAD2-1） which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cotton delta-12 oleate desat- urase gene GhFAD2-1 containing an open reading frame of 1 158 bp was cloned for constructing RNAi vector. A 515 bp long specific fragment of this gene was se- lected for constructing ihpRNA vector under the control of a seed-specific promoter NAPIN, named pFGC1008-NAPIN-FAD2-1; meanwhile miRNA gene-silencing vector pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1 targeting GhFAD2-1 was also constructed.; 赵立群李红岺李仁李蔚华金平郭仰东

多年生黑麦草高频再生体系的建立及农杆菌介导PEPC基因的转化被引量：3: 2012年; 以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)成熟种子作为外植体,建立其高频再生体系,通过农杆菌介导法将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因转入,为多年生黑麦草的抗逆转基因工作奠定基础。结果表明:种子充分灭菌后在附加6.0mg·L-1 2,4-D的培养基中诱导愈伤组织,诱导率可达61.33%。愈伤组织在2,4-D浓度减半的培养基上继代培养长势良好,分化培养基为MS培养基附加1.0mg·L-16-BA,分化率最高达到61.33%,在1/2MS+0.5mg·L-1 NAA培养基中进行生根培养,生根率达100%。以该再生体系为基础,将获得的愈伤组织作为外植体进行遗传转化,经筛选培养后得到再生植株,通过PCR及实时荧光定量(Real-Time)PCR验证表明PEPC基因已成功转入,转化率为8.67%。试验结果将为多年生黑麦草抗性品种的研究奠定基础。; 李蔚张娜李仁赵冰郭仰东; 关键词：多年生黑麦草胚性愈伤组织

用于构建干扰载体的质粒及其构建方法和应用: 本发明公开了一种用于构建干扰载体的质粒及其构建方法和应用。本发明提供了在质粒pFGC1008的Stu I和Asc I酶切位点之间插入序列表的序列1所示的DNA得到的质粒pFGC-NAP。在质粒pFGC-NAP的多克隆位点...; 郭仰东温常龙赵立群杨鹏刘莉莎王玉珏程琳李蔚李仁郑禾; 文献传递

草地羊茅花药组织培养的方法及其专用培养基: 本发明公开了一种草地羊茅花药组织培养的方法及其专用培养基。本发明提供的草地羊茅的分化培养基是在MS基本培养液中添加如下物质得到的固体培养基：激动素、NAA、碳源和凝胶剂；其中激动素的终浓度是1.5-2.5mg/L，NAA...; 郭仰东赵冰李蔚

棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建被引量：2: 2011年; 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。; 赵立群李仁李蔚谭小力杨佑明华金平郭仰东; 关键词：高油酸

禾本科牧草和草坪草转基因育种研究进展被引量：3: 2011年; 禾本科牧草与草坪草在可持续农业发展、城市绿化、生态保护等方面起着至关重要的作用。近年来,随着生物技术的发展,国内外转基因牧草及草坪草育种研究也取得了明显进展。本文结合笔者多年的科研实践,总结了近年来禾本科牧草及草坪草在遗转转化体系优化上的研究结果,并对利用转基因技术提高其抗病、抗虫、抗除草剂等生物胁迫,以及抗旱、耐盐等非生物胁迫方面的研究进行了综述。同时,分析了禾本科牧草与草坪草转基因研究在安全性和稳定性上存在的问题,并对其今后的研究进行了展望。; 郭仰东李蔚李仁吴新新赵冰毛培胜; 关键词：禾本科牧草草坪草转基因育种

用于构建干扰载体的质粒及其构建方法和应用: 本发明公开了一种用于构建干扰载体的质粒及其构建方法和应用。本发明提供了在质粒pFGC1008的Stu I和Asc I酶切位点之间插入序列表的序列1所示的DNA得到的质粒pFGC-NAP。在质粒pFGC-NAP的多克隆位点...; 郭仰东赵立群杨鹏刘莉莎温常龙王玉珏程琳李蔚李仁

草地羊茅花药组织培养的方法及其专用培养基: 本发明公开了一种草地羊茅花药组织培养的方法及其专用培养基。本发明提供的草地羊茅的分化培养基是在MS基本培养液中添加如下物质得到的固体培养基：激动素、NAA、碳源和凝胶剂；其中激动素的终浓度是1.5-2.5mg/L，NAA...; 郭仰东赵冰李蔚郑禾; 文献传递

番茄水通道蛋白基因SlAQP的克隆与序列分析被引量：17: 2012年; 【目的】通过分析克隆得到的番茄水通道蛋白SlAQP基因的cDNA全长序列特征、编码蛋白的细胞定位及其在番茄材料Mirco Tom中经干旱胁迫后的表达模式,为进一步研究番茄在逆境下的抗逆机制及加快番茄抗逆育种积累资料。【方法】采用RACE技术克隆番茄水通道蛋白基因的cDNA全长,结合生物信息学软件分析该基因的编码蛋白特性;利用基因枪转化法将SlAQP基因与GFP融合的瞬时表达载体(SlAQP::GFP)转入洋葱表皮细胞,对该基因进行亚细胞定位;利用Real time-PCR分析该基因在番茄品种Mirco Tom中经干旱胁迫下的表达机制。【结果】SlAQP基因(GenBank登录号:HQ433337)cDNA全长为1 107 bp,编码区含852 bp,共编码283个氨基酸。生物信息学软件分析表明,SlAQP基因含有6个跨膜区,2个NPA单元,其氨基酸残基与MIP家族蛋白保守区序列完全一致,且该基因氨基酸序列与其它物种PIP类质膜型水通道蛋白氨基酸序列具有很高的同源性。11个物种间的聚类分析表明,SlAQP基因编码的蛋白与马铃薯质膜型水通道蛋白遗传距离最近。细胞定位结果确认SlAQP基因编码蛋白在细胞质膜上发挥生物学作用。Southern杂交结果显示,SlAQP基因在番茄基因组DNA中呈单拷贝。Real time-PCR分析结果证实,干旱胁迫下该基因表达量总体呈下降趋势。【结论】对番茄水通道蛋白SlAQP基因在干旱胁迫后的表达模式分析,预示该基因表达受逆境条件的影响,为今后进一步探讨其在干旱胁迫中发挥的作用提供了重要信息。; 李仁吴新新李蔚杨荣超赵永钦温常龙赵冰郭仰东; 关键词：番茄水通道蛋白细胞定位 REAL

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李蔚

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