杨越飞
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 诱导小鼠成纤维细胞为多能干细胞的研究
- 诱导多能干细胞是当今的研究热点之一,该项技术在生物医学、细胞工程、组织工程和转基因动物生产等领域具有广泛的应用前景。本研究在克隆获得Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc基因的基础上,构建逆转录病毒载体pMXs-Sox...
- 杨越飞
- 关键词：逆转录病毒载体体细胞重编程诱导多能干细胞成纤维细胞碱性磷酸酶活性
- 文献传递
- 绵羊Klf4基因逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2011年
- Klf4作为诱导产生多能性干细胞的基因之一,在体细胞的重编程过程中发挥着重要的作用。为构建绵羊Klf4基因逆转录病毒载体,参照本实验室已克隆出的绵羊Klf4基因编码区(GenBank登录号GQ280389)设计引物,将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到逆转录病毒载体pMXs的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,和包装质粒pVSV-G联合转染293GP细胞获得重组逆转录病毒。通过绵羊胎儿成纤维细胞检测病毒侵染能力,并使用RT-PCR和SDS-PAGE方法检测在包装细胞和被侵染的成纤维细胞中Klf4基因的转录和表达。本试验成功获得具有侵染能力可以表达绵羊Klf4转录因子的重组逆转录病毒,为今后进一步开展以此为基础的绵羊体细胞诱导重编程研究奠定了基础。
- 王春生杨越飞宁方勇薛超朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊逆转录病毒载体
- 绵羊Klf4编码区的克隆、序列分析与原核表达被引量：6
- 2011年
- 参照GenBank上牛和猪的Klf4 cDNA序列设计特异引物,采用RT-PCR方法从怀孕60d的胎绵羊皮肤总RNA中扩增绵羊Klf4基因编码区序列,利用生物学软件对其进行序列分析;将该编码区连接到原核表达载体pET-30b(+)上并转化BL21大肠杆菌,在IPTG诱导下进行表达。经测序,绵羊Klf4基因编码区序列包括终止密码子在内的1 434bp,编码477个氨基酸,已在GenBank上登录(登录号GQ280389),与牛、猪、马、人、猕猴、黑猩猩、鼠等物种相比,绵羊Klf4基因CDS区的核苷酸序列相应序列同源性分别为98.26%、93.81%、93.24%、90.24%、90.13%、90.37%和87.25%,其氨基酸序列同源性分别为99.58%、97.94%、96.02%、94.14%、93.51%、92.08%和92.66%;生物软件分析显示,绵羊Klf 4含有细胞核定位模体和锌指结构域。利用克隆获得的绵羊Klf4 cDNA所构建的表达载体pET-30-Klf4,经IPTG诱导在BL21大肠杆菌中成功表达相对分子质量约为57 000的融合蛋白His-Klf4。
- 杨越飞王春生李昊罗芳渠俊杰朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊KLF4克隆原核表达
