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一起札如病毒所致成年人急性胃肠炎暴发的分子流行病学研究被引量：12: 2012年; 目的了解一起成年人急性胃肠炎暴发流行的病原学。方法采用国家标准方法对样本进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、副溶血弧菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、空肠弯曲菌及单核细胞增生李斯特菌10种致病菌进行检测。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诺如病毒和札如病毒核酸,对阳性PCR产物进行核苷酸序列测定,并进行基因系统进化分析。结果 7份粪便样本中4份为札如病毒核酸阳性。4株札如病毒与GⅠ.2型参考株核苷酸序列同源性在94.7%～98.4%之间。基因进化分析显示,札如病毒深圳株与Sapovirus Hu/Oshima1/2009/JP、Houston/90(U95644)、Parkville/94/U73124在同一进化树遗传分支,属于GⅠ.2型。结论此起成年人急性胃肠炎暴发是由札如病毒GⅠ.2型感染所致。; 何雅青卓菲张海龙杨贵清杨洪文风兰黄薇夏伟罗敏武伟华刘建平姚相杰冼慧霞; 关键词：札如病毒急性胃肠炎暴发系统进化分析

深圳市腹泻患者星状病毒感染的分子流行病学特征被引量：10: 2013年; 目的了解深圳地区感染性腹泻中星状病毒的感染情况，并研究其分子流行病学特点。方法采集深圳市2010年1月至2011年12月2083例疑似腹泻患者粪便标本，同时采集30例健康人粪便标本作为对照，采用荧光RT-PCR检测星状病毒核酸；然后使用特异性引物，对星状病毒核酸阳性标本进一步采用RT—PCR方法扩增星状病毒的ORF2区域，对PCR扩增产物经纯化、测序后进行序列分析，同时对病例的流行病学资料进行统计分析。结果星状病毒检出率为1．39％（29／2083）；其中6月龄以下、6～11月龄、12—35月龄和36月龄以上患者检出率分别为2．96％（5／169）、1．48％（8／707）、2．48％（3／121）和1．20％（13／1086）；星状病毒在冬季检出率较高，春季次之，夏季和秋季则较少发生。对ORF2区域进行基因测序和分析显示，深圳地区星状病毒以HAstV．1为主要流行株，HAstV-2、HAstV-5亦有检出，其他型别则未检出。其中HAstV-1又可分为3个亚组，分别与GenBank上的德国株（AY720892）、印度株（AB551380）和巴西株（AY846638）有较高的亲缘关系，其核苷酸同源性分别为98．3％-99．1％、96．0％～100％和98．0％～100％。结论星状病毒是深圳地区病毒性腹泻的重要病原之一，HAstV-1是深圳地区星状病毒的主要流行株，应加强对星状病毒腹泻的监冽。; 张海龙杨洪罗敏唐屹君姚相杰冼慧霞阳帆何雅青李苑张克春; 关键词：星状病毒分子流行病学

2009年深圳地区肠道病毒71型毒株VP4基因进化分析被引量：1: 2013年; 目的对深圳地区手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）肠道病毒71型分离株（enterovirus71，EV71）的VP4基因遗传进化进行分析。方法2009年采集深圳市儿童医院就诊的HFMD患者的粪便标本491份，选取其中8份经细胞培养鉴定为阳性的EV71毒株用RT-PCR扩增VP4基因，利用MEGA4．0软件进行遗传进化分析。结果2009年深圳地区8株EV71VP4基因全长207bp，编码69个氨基酸；8株EV71VP4基因核苷酸同源性为94．2％-98．1％，与深圳2001至2004年分离的17株EV71毒株核苷酸同源性在89．9％～98．1％，与GenBank中其他EV71病毒株VP4的核苷酸同源性为79．2％-100％；其中与亚洲流行株阜阳株（EU703812）核苷酸的同源性最高（100％），其次是C4代表株及2004年深圳株（AY895144）为94．2％～97．1％。除了印度株和其中1株EV71的VP4编码的氨基酸在第54位（ACA）不同之外，其余7株EV71VP4编码的氨基酸序列之间以及与GenBank报道的其他序列同源性达100％。8株EV71VP4基因核苷酸与c4代表株相比有17处不同，除1处以外其余全在简并密码位点上；轻重症病例毒株之间VP4基因序列未见明显改变。进化树显示8株EV71均属于C4基因亚型。结论2009年深圳市流行的EV71属于C4基因亚型，流行的EV71VP4基因非常保守，不属于变异区段，绝大部分核苷酸的变异属无义突变，VP4基因编码的氨基酸变异几乎为0。; 冼慧霞陈龙阳帆罗敏吴春利杨洪张海龙姚相杰何雅青; 关键词：肠道病毒属种系发生

2010年至2012年深圳市手足口病分子流行病学研究被引量：13: 2014年; 目的了解2010年至2012年深圳市手足口病病原构成、分子特征和流行病学规律,为制订防制措施提供科学依据.方法收集2010年至2012年深圳市手足口病疑似患者粪便或肛拭子标本1 523份,实时荧光定量PCR和反转录半套式PCR （RT-snPCR）法进行VP1基因系统进化分析,数据分析行x2检验.结果手足口病发病以2岁以下儿童居多,其次为2～3岁组;宝安和龙岗区患者数最多;各年龄组性别比较差异有统计学意义（x2=12.365,P=0.030）.2010年至2012年1 523例手足口病患者病原学分析,肠道病毒阳性1 148例,占75.4％,包括肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒（Cox）A组和B组、埃可病毒等28种病原;居前4位分别为EV71 （57.1％）、CoxA6（18.5％）、CoxA16 （14.0％）和CoxA10（3.7％）,以A组人肠道病毒（HEV-A）最为普遍（96.2％）.深圳市CoxA6毒株与2008年芬兰、2010年法国和2011年日本毒株亲缘性较近,CoxA10与2007年斯洛伐克、2008年西班牙毒株同源性最高.结论 2010年至2012年深圳市手足口病病原谱以HEV-A组的EV71、CoxA6、CoxA16和CoxA10为主,CoxA6是继EV71之后的第2位主要病原体,深圳市CoxA6毒株可能起源于欧洲和日本.位于深圳北部的宝安区和龙岗区是手足口病的主要分布地区;＜2岁是手足口病高发年龄段.; 冼慧霞陈龙罗敏姚相杰杨洪贺连华张海龙何雅青; 关键词：手足口病流行病学研究

深圳市手足口病重症感染性克隆的构建和分析: 2012年; 目的构建肠道病毒71型(EV71)的感染性克隆,为EV71致病机理的研究和药物的开发建立技术平台。方法选取临床手足口重症儿童粪便样品,经荧光定量PCR检测为阳性,RT-PCR方法扩增出EV71全基因组,通过TA克隆的方法连接到TOPO-XL-PCR载体中,应用T7聚合酶系统将线性化的EV71DNA序列体外转录成RNA,转染人横纹肌肉瘤细胞系RD-A细胞,病毒传代并观察病变,通过间接免疫荧光实验进一步鉴定,获得的感染性克隆进行全基因组测序和序列比对分析。结果 RT-PCR可以获得EV71全长约7.5kb的DNA片段,体外转录并转染后3～5d可观察到典型的肠道病毒致细胞病变,免疫荧光可看到特异标记,序列比对为C4a亚型的EV71病毒。结论构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,在分子生物学水平上有利于深入研究EV71的致病机制和毒力基因、患者抗体的中和特性、疫苗和药物的效力评估与开发等。; 罗敏陈惠玲杨洪张海龙冼慧霞张仁利; 关键词：手足口病重症感染性克隆

2010年广东省深圳市首例手足口病死亡病例的病原学研究: 2012年; 目的对广东省深圳市2010年首例临床诊断为手足口病死亡患儿的粪便和咽拭子标本进行病原体型别鉴定,从而追踪其病原的可能来源。方法先用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法检测病毒核酸,再用细胞培养方法从粪便和咽拭子标本中分离病毒,并将分离到的毒株提取核酸后,用普通RT-PCR方法分别扩增肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)的VP1区全长基因并进行序列测定,序列测定结果与不同国家和地区的肠道病毒株A、B、C基因型代表株进行同源性比较和进化树分析。结果该病例的2份标本均为EV71核酸阳性,Cox A16核酸阴性;毒株基因经过核苷酸和氨基酸同源性分析,确定该病例病原体为EV71 C4亚型。结论 2010年深圳市首例手足口病死亡病例的病原体为EV71的C4亚型。; 杨洪何娇明何雅青张海龙冼慧霞罗敏廖玉学牟瑾李媛; 关键词：手足口病肠道病毒病原学系统进化树

2010—2011年深圳市宝安区诺如病毒的分子特征分析被引量：13: 2013年; 目的了解深圳市宝安区诺如病毒腹泻的分子流行病学特点。方法采集深圳市宝安区2010年1月至2011年12月486例疑似病毒性腹泻患者粪便标本，使用商品化的GⅡ型诺如病毒荧光PCR试剂盒检测GⅡ型诺如病毒核酸。随机挑选若干GⅡ型诺如病毒阳性标本，用GⅡ型诺如病毒特异性引物COG2F／G2-SKR进行RT—PCR扩增，其他所有阴性标本用GI型诺如病毒特异性引物GI—SKF／GI—SKR进行RT—PCR扩增。阳性产物回收纯化并测序，用ClustalW和MEGA5．0生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析。结果48份随机挑选的GⅡ型诺如病毒阳性标本中检mGⅡ．4／2006b型36株，GⅡ．4／2008型3株，GⅡ．5型9株；无诺如病毒GⅠ型检出。结论GⅡ型是2010年1月至2011年12月深圳市宝安区诺如病毒的主要型别，其中GⅡ．4／2006b是最重要的流行株。; 张海龙李苑姚相杰冼慧霞杨洪罗敏何雅青; 关键词：腹泻诺如病毒分子流行病学进化树

2011年广东省深圳市病毒性腹泻监测的病原学研究: 目的:了解广东省深圳市感染性病毒性腹泻的感染情况。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)对2叭1年深圳市1158例疑似腹泻患者粪便标本同时进行轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和肠道腺病毒等四种常见腹...; 张海龙何雅青张仁利杨洪姚相杰罗敏冼慧霞; 文献传递

2010年深圳市手足口病的病原学检测分析被引量：4: 2012年; 目的:了解深圳市2010年手足口病的病原学情况,为手足口病的控制和治疗提供实验室依据。方法:采集手足口病病例粪便标本,提取标本中的病毒核酸,采用RT-PCR方法,检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸。结果:2010年共检测1238例手足口病例,其中重症病例122例。所有病例中,EV71阳性率为43.29%,CA16阳性率为11.14%;重症病例中,EV71阳性率75.4%,CA16阳性率仅1.63%;死亡病例均为EV71阳性。5月份病例数最多;城乡结合部为重症病例高发区。3岁以下儿童为手足口病重症高发年龄段。结论:EV71和CA16是引起深圳市手足口病的主要病原体,其中EV71是引起重症病例的最主要原因,必须加强对EV71引起的手足口病病例的监测和治疗。; 杨小柯冼慧霞张倩张海龙姚相杰何雅青罗敏杨洪; 关键词：手足口病病原学

深圳市首例基孔肯雅病毒的形态学及分子遗传特征分析被引量：1: 2012年; 目的对深圳市首发基孔肯雅病毒(CHIKV)进行分离、增殖培养、浓缩、形态学观察及构建系统发生树分析,为后续基因组信息解析、蛋白组分析、单克隆抗体制备及疫苗研发等应用性研究提供实验基础。方法利用C6/36细胞从病人血清中分离CHIKV,采用BHK-21细胞对CHIKV进行大量的增殖培养,经7%PEG8000浓缩,超薄切片和负染观察CHIKV显微结构;对分离得到的CHIKV株进行全基因组测序和构建系统发生树,结合流行病学资料对其分子遗传特征进行分析。结果 CHIKV被成功分离并浓缩;在透射电镜下观察CHIKV的直径约为70nm,圆形有包膜,表面有纤突;CHIKV(SZ-20101028)基因组长为12377bp,属于E1-A226突变株;该病毒是最近10年来在印度洋岛屿爆发流行的新亚型,与流行病学调查资料相吻合。结论以现有的条件建立了一种稳定、快速培养浓缩CHIKV的方法,并初步对CHIKV进行了形态观察和溯源性分析。; 许少坚罗敏张倩阳帆刘涛黄达娜吴春利胡章立柯昌文张仁利; 关键词：基孔肯雅病毒超薄切片系统发生树

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罗敏

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