罗森
- 作品数：14 被引量：16H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- A型肉毒毒素轻链的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：4
- 2015年
- 目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,IPTG诱导目的蛋白高效表达,表达产物经Ni螯合亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论:构建了重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,原核表达获得高水平可溶性重组Bo NT/A LC,纯化得到纯度较高的蛋白质,重组Bo NT/A LC的酶活略高于A型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于Bo NT/A LC抑制剂高通量体外检测方法研究。
- 罗森齐芬芳宫路路刘昊李涛王慧
- 关键词：原核表达
- 底物蛋白SNVP及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种梭菌属神经毒素底物蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的梭菌属神经毒素底物蛋白是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的...
- 王慧李涛罗森王琴房华丽韩燃
- 文献传递
- B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。
- 罗森陈芳红李涛王慧
- 关键词：肉毒毒素原核表达
- EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价
- 2013年
- 目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。
- 房华丽王琴罗森高翔屠伟田仁茂刘雄李涛王慧
- 关键词：肠道病毒71型柯萨奇B3病毒融合蛋白
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EspA和EspB蛋白的重组表达及其免疫效果
- 2013年
- 目的:通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7的EspA和EspB蛋白,并分析它们的免疫保护性。方法:采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增espA和espB基因,连接至pET-22b(+)载体上,转化至宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量,免疫小鼠分析其免疫保护性。结果:重组espA和espB基因片段的测序结果与GenBank中的相应基因序列完全一致,一致性均为100%;得到了纯度为95%以上的重组EspA和EspB蛋白,免疫小鼠所得到的抗体效价均为106。结论:重组EspA和EspB蛋白获得了可溶性表达,表达的蛋白具有良好的免疫保护性,为进一步制备疫苗奠定了基础。
- 韩燃李涛王琴房华丽罗森郭峰李崭王德慧李文平王慧
- 关键词：重组蛋白免疫效果
- 突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。
- 罗森王琴房华丽王德慧李崭李涛王慧
- 关键词：底物原核表达
- 肉毒毒素内肽酶活性体外分析方法的建立及其初步应用
- 肉毒毒素是世界上已知毒性最强的物质,肉毒中毒事件时有发生,主要以食物污染等方式出现。目前主要使用肉毒毒素马血清对肉毒中毒进行治疗,易产生免疫反应副作用,同时对进入神经细胞内的毒素效果很差。因此研发可进入神经细胞的小分子抑...
- 罗森
- 关键词：肉毒毒素体外分析
- 文献传递
- 云南中老边境蚊科昆虫群落的研究被引量：2
- 2011年
- 为调查和了解云南省西双版纳中老边境蚊虫多样性状况，应用灯诱法和采集幼虫法对西双版纳州中老边境上5个村落和周边方圆4km原始森林内的蚊虫的优势种组成、蚊虫群落结构的集中性指数、多样性指数和均匀度指数进行分析。结果显示，在居民区共采获蚊虫8762只，共8属33种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属Aedes、库蚊属Culex、按蚊属Anopheles、曼蚊属Mansonia、柯蚊属Coquilleuidia、阿蚊属Armigere$、蓝带蚊属Uanotaenia和小蚊属Mimomyia，其中优势种蚊虫为三带喙库蚊、中华按蚊和微小按蚊。在非居民区共采获蚊虫535只，共9属46种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属Aedes、库蚊属Culex、按蚊属Anopheles、巨蚊属Toxorhynchite~、领蚊属Heizmannia、局限蚊属Topomyia、钩蚊属Malaya、杵蚊属n如抛rDi如s和蓝带蚊属Uanotaenln，其中优势种蚊虫为白纹伊蚊。结果表明，居民区和非居民区其生物群落内种群结构稳定，均匀度较好。
- 王刚郑重罗森董言德赵彤言
- 关键词：蚊虫群落
- 人β防御素1～4抑菌及盐敏感性研究被引量：4
- 2013年
- 目的对人β防御素(hBD)1～4的抑菌及盐敏感性进行测定并分析其二级结构对抑菌及盐敏感性的影响。方法圆二色谱预测hBD 1～4的二级结构,应用抑菌实验来测定抑菌效力,提高溶液中的NaCl浓度来进行盐敏感性分析。结果获得了4种hBD的圆二色谱谱图并进行分析。实验发现hBD-1抑菌活力低,抑菌谱窄,hBD-2、hBD-4抑菌活力好于hBD-1,抑菌谱也更广,但是对盐耐受力差,而hBD-3在这4种防御素中拥有最强的抑菌活性及耐盐效力。结论 4种hBD具有不同的抑菌活性和盐敏感性。防御素的理化性质与二级结构共同决定了抑菌活力及其盐敏感性。
- 郭峰李涛韩燃房华丽罗森王琴高剑峰王慧
- 关键词：抑菌活性盐敏感性圆二色谱抗菌谱
- 肠出血性大肠杆菌毒力相关基因突变株的构建
- 2012年
- 目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、espB、espD,构建3株突变株。方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增基因两翼的同源序列;将PCR产物插入pEASY-T1载体并测序,将测序正确的上、下游同源序列分步酶切,构建于pUC19-kan质粒上,经PCR获得两端同源序列中间嵌合卡那霉素抗性基因标记的线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术,敲除espA、espB、espD基因,之后转入pCP20质粒以去除抗性标记,最后测定突变株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、es pB、espD,获得3株突变株,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:为进一步研究espA、espB、espD基因在肠出血性大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用奠定了基础。
- 姜楠王琴李涛侯晓军肖乐房华丽罗森王慧
- 关键词：RED重组系统
