肖卫民
- 作品数：11 被引量：1H指数：1
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- 鼠抗人转铁蛋白抗体轻链与重链可变区基因库的制备
- 2001年
- 以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到cDNA合成所需的浓度后,反转录制备出cDNA,在合成的cDNA中加入轻、重链引物,扩增制备出小鼠抗人转铁蛋白抗体的轻、重链可变区基因库。
- 李兆隆郭红玲常彩琴涂政肖卫民王明鑫王俭
- 关键词：基因工程抗体小鼠脾脏总RNA提取
- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 制备抗人转铁蛋白单链抗体。方法 拼装好并带有酶切位点粘性末端的鼠抗人转铁蛋白的单链抗体基因经凝胶电泳定量后,同载体pCANTAB 5E连接,以其转化E.coli TG1细胞,经辅助噬菌体M13K07挽救构建噬菌体抗体表面呈现文库、抗原包被固相材料富集选择阳性重组噬菌体克隆（Panning）。感染能产生可溶抗体片段的大肠杆菌菌株E.coli HB2151,制备可溶抗体,以Anti-E末端抗体进行Western blot、ELISA检验和分子量测定。结果 人转铁蛋白的单链抗体基因成功表达。结论 用基因工程抗体技术制备抗体是可行的。
- 李兆隆郭红玲常彩琴肖卫民涂政王明鑫王俭
- 关键词：噬菌体抗体库基因表达单链抗体基因法医物证
- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因序列测定及分析——人转铁蛋白基因工程抗体研制（6）
- ＜正＞从携带人转铁蛋白单链抗体基因载体转化的大肠杆菌菌株中提取质粒,经电泳分析及筛选、纯化出线状质粒DNA,定量后以载体上人转铁蛋白单链抗体基因插入子两边的已知DNA序列经合成后作为引物进行测序扩增凝胶电泳,将得到的人转...
- 李兆隆郭红玲常彩琴涂政肖卫民王明鑫王俭
- 文献传递
- 鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因的制备——人转铁蛋白基因工程抗体研制（3）
- ＜正＞将以人转铁蛋白成功免疫的小鼠脾脏取出,以异硫氰酸胍和酚的混合溶液匀浆脾脏组织,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo （dT）纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA
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- 文献传递
- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建
- 2001年
- 目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验。方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化。结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因。结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来。对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体。
- 李兆隆郭红玲常彩琴涂政肖卫民王明鑫王俭
- 关键词：扩增单链抗体SCFV法医学
- 人转铁蛋白基因工程抗体的制备
- 本摘要报告世界上首例人转铁蛋白基因工程抗体的研制工作。人转铁蛋白经Blue Sepharose CL-6B色谱、DEAE-Sepharose Fast Flow色谱、Phenyl Sepharose色谱和Sephacry...
- 李兆隆郭红玲常彩琴肖卫民
- 关键词：转铁蛋白基因工程抗体
- 人转铁蛋白的分离纯化
- 本文报道一个分离人转铁蛋白的方法,并就有关的问题进行分析探讨。Blue Sepharose CL-6B 亲和色谱除去人血浆中的白蛋白,又经两次 DEAE-Sepharose Fast Flow 及各一次 Phenyl S...
- 李兆隆郭红玲常彩琴肖卫民涂政王明鑫
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- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体的基因表达及鉴定
- ＜正＞拼装好并带有酶切基因座粘性末端的鼠抗人转铁蛋白的单链抗体基因经凝胶电泳定量后,同载体 pCANTAB 5E连接,以其转化E．coli TG1细胞,经辅助噬菌体M13K07挽救构建噬菌抗体表面呈现文库、抗原包被固相材...
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- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建——人转铁蛋白基因工程抗体研制（4）
- ＜正＞扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同一能柔性折叠的短连接肽的基因引物一起进行扩增拼装连接,而后在含限切酶基因座的引物指导下扩增引入限
- 李兆隆郭红玲常彩琴涂政肖卫民王明王俭
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- 鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的表达——人转铁蛋白基因工程抗体的研制（5）
- 拼接好并带有酶切基因座粘性末端的鼠抗人转铁蛋白的单链抗体基因经凝胶电泳定量后,同载体pCANTAB 5E连接,以其转化E.coli TG1细胞。经辅助噬菌体M1 3K07挽救构建噬菌体抗体表面呈现文库、抗原包被固相材料富...
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