贾启恒
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫增强作用被引量：4
- 2013年
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫增强作用。首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因,并将其插入到pcDNA3.1载体上,分别构建该基因的两个分泌型真核表达载体,即非融合表达载体pcDNA-cGMCSF和与Myc-His融合的表达载体pcDNA-cGMCSF/MH。用pcDNA-cGMCSF/MH载体转染HEK293T细胞以确定GM-CSF基因能否在真核细胞中进行分泌表达。然后用本室构建的VP2基因表达载体单免疫小鼠,用VP2表达载体与pcDNA-cGMCSF共免疫小鼠(pcDNA3.1空载体作为阴性对照)。免疫后用ELISA方法检测不同时间小鼠血清的抗体水平。用MTT法检测小鼠免疫后35d时淋巴细胞的增殖活性,同时用ELISA试剂盒检测小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。结果表明,本试验构建的表达载体能够介导重组GM-CSF在真核细胞中进行分泌表达。免疫实验表明,利用GM-CSF基因与VP2基因共免疫小鼠,抗体的水平明显高于VP2基因单免疫组(P<0.01)。共免疫组小鼠淋巴细胞的刺激指数和γ干扰素的表达水平均明显高于单免疫组(P<0.05)。由此可见,GM-CSF表达载体可明显提高CPV VP2DNA疫苗的免疫应答水平。
- 贾启恒温洁霞王利月林洪羽张峰王璐孙岩李秀锦仲飞
- 关键词：GM-CSF犬细小病毒
- 犬白细胞介素-7基因对犬细小病毒DNA疫苗的免疫增强作用被引量：6
- 2012年
- 【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,分别构建成与Myc/His标签融合和非融合的cIL-7真核分泌型表达载体pcDNA-cIL7/MH和pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将pcDNA-cIL7/MH质粒转染HEK 293T细胞使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的表达载体能否介导cIL-7基因在真核细胞中进行分泌表达。用已构建的VP2表达载体pcDNA-CD5-VP2与pcDNA-cIL7载体共免疫小鼠,并设pcDNA-CD5-VP2单免疫小鼠和pcDNA-cIL7单免疫小鼠作为对照。免疫后通过ELISA方法检测抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验和ELISA方法分别检测免疫后35 d小鼠脾脏淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素的表达水平。【结果】本试验扩增的cIL-7基因序列与GenBank中犬的序列完全一致。构建的表达载体能够介导cIL-7基因在HEK293T细胞中进行分泌表达。动物免疫试验结果显示,cIL-7与VP2共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价分别极显著和显著高于VP2单免疫组(P<0.01和P<0.05);共免疫组小鼠淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平也显著高于VP2单免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-7基因可增强小鼠对VP2 DNA疫苗的免疫应答反应。
- 孙岩仲飞李秀锦王幸兴王璐贾启恒韩冬梅李振张峰潘红丽
- 关键词：细小病毒VP2基因DNA疫苗
- 犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：1
- 2012年
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2 DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用。首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因。
- 贾启恒仲飞李秀锦王幸兴张峰韩冬梅
- 关键词：VP2DNA疫苗免疫增强作用免疫应答反应基因表达载体
- 犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2 DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基...
- 贾启恒仲飞李秀锦王幸兴张峰韩冬梅
- 文献传递
- 犬GM-CSF对犬细小病毒VP2 DNA疫苗免疫增强作用的研究
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是由T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等分泌产生的,是重要的造血生长因子和免疫调节因子,能促进前体细胞的存活、增殖、分化,促进粒细胞和单核/巨噬细胞分化与形成集落。...
- 贾启恒
- 关键词：GM-CSF免疫佐剂犬细小病毒
- 文献传递
- 猪PRRSV受体唾液酸黏附素多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 唾液酸黏附素(sialoadhesin,Sn)是猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的主要受体,研究该受体在PRRSV感染过程中的作用依赖于特异的抗体。为制备Sn的抗体,首先依据通过DNAstar软件分析的抗原指数,确定编码114个氨基酸的Sn抗原表位基因(Sn114),然后依据大肠杆菌偏爱的密码子对该基因进行密码子优化,并由人工合成该基因。将合成的基因克隆到pET-32a(+)质粒中构建成与硫氧还蛋白(Trx)和6×His融合的Sn114基因原核表达载体,将表达载体转化BL21(DE3)大肠杆菌,在IPTG的诱导下使其表达。利用Ni-NTA琼脂糖分离纯化表达的Sn114融合蛋白,再用Sn114融合蛋白免疫家兔,通过ELISA方法检测免疫后家兔血清的抗体滴度,并通过Westernblot和细胞结合试验检测抗体的特异性。结果表明,本试验构建的Sn114表达载体能够介导Sn114融合基因在大肠杆菌中进行高效表达,表达量为63mg/L;用纯化后的Sn114蛋白免疫家兔,免疫后34d抗体滴度为1∶10 240。抗体特异性检测结果表明,所制备的Sn抗体能与猪肺泡巨噬细胞的Sn抗原进行特异性免疫反应。
- 李振仲飞李秀锦王幸兴韩冬梅张峰潘红丽王璐孙岩贾启恒
- 关键词：密码子优化多克隆抗体PRRSV
