郝俊伟
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划博士科研启动基金更多>>
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- 牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C_(24)V株E_0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达被引量：2
- 2014年
- E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化,在卡介苗中表达E0基因,检测到了E0蛋白的抗原活性,为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。
- 张云郝俊伟刘红娜王文玉杨宇航时坤李健明杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻E0基因密码子重组卡介苗
- 牛病毒性腹泻病毒E2截短基因重组卡介苗安全性和最佳免疫剂量的研究被引量：1
- 2014年
- 将6组BVDV-E2截短基因重组卡介苗用生理盐水稀释,分别进行革兰染色和伊红美蓝平板检测,6组重组卡介苗均无杂菌污染。再对6周龄～8周龄雄性豚鼠进行免疫接种,每只腹腔注射1mL（5×106 cfu/只）,免疫接种豚鼠无任何症状,精神、食欲、排便及发育等均不受影响,且无死亡,说明重组病毒对试验豚鼠是安全的。使用BVDV抗体检测试剂盒对60头健康牛的母源抗体含量进行检测,不含母源抗体占85.00%。取重组卡介苗中的一组,用生理盐水稀释,使重组卡介苗达到105、106、107、108、109 cfu/mL共5组,每组不含母源抗体的牛3头,免疫接种前对每头牛进行尾颈静脉采血,析出血清,用BVDV抗体检测试剂盒测牛血清中抗体水平。采完血后对牛进行皮下免疫接种,4周后,采取血液,检测牛血清中抗体水平。通过免疫接种后的检测结果可知,重组疫苗对牛最佳免疫剂量为108 cfu/mL,为进一步进行重组疫苗回归本动物的免疫效果研究提供了可靠依据。
- 杨宇航李晶张云郝俊伟刘东旭时坤李健明曾范利杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗安全性
- 鹿布鲁氏菌病实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 中国的养鹿业历史悠久，是世界上养鹿最早的国家之一，同时也是最早将鹿副产品用于医疗保健的国家,最早可以追溯到商周时代。养鹿业作为特色养殖给我国养殖业带来了巨大的经济收入。当前在很多地区鹿养殖业已经成为了农牧民增收，带动农村...
- 郝俊伟
- 关键词：布鲁氏菌实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 鹿布鲁菌分型实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2014年
- 鹿布鲁菌病主要是由牛型、羊型和猪型布鲁菌引起的,其他感染型少见,本研究依据布鲁菌的特异性基因BruAB20168、BMEII0466、BR0952上的部分高度保守片段设计猪型、牛型、羊型引物和探针,用于检测并区分鹿源布鲁菌的种型,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到pUC57载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布氏菌各分型荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线敏感性可知该方法的最低检测浓度分别可达到12、9、8copies/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟时坤曾范利李健明王文玉杨宇航刘红娜张云张秀丽杜锐
- 关键词：布鲁菌实时荧光定量PCR
- 牛病毒性腹泻病毒E2基因优化表达重组卡介苗的免疫试验被引量：2
- 2014年
- 为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2基因优化表达重组卡介苗(rBCG)对小鼠的免疫效果,分别用已构建的pMV361-E2-1、pMV361-E2-2、pMV361-E2-3、pMV361-E2-4、pMV361-E2-5、pMV361-E2-6重组卡介苗,pMV361空载体,卡介苗,BVDV灭活疫苗和生理盐水对小鼠进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、T淋巴细胞增殖程度和CD4+、CD8+和IL-12的水平,以评价其免疫效果。结果显示,6组重组卡介苗均能够引起小鼠产生BVDV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,免疫小鼠血清CD4+、CD8+和IL-12的水平均高于对照组,pMV361-E2-1重组卡介苗在诱导小鼠产生BVDV抗体方面要优于其他各组基因重组卡介苗。结果表明,BVDV E2基因不同片段的重组卡介苗均可诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫,这为BVDV基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 曾范利张云张梦时坤李建明郝俊伟孙凡婷杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2基因重组卡介苗免疫
- 应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果被引量：1
- 2014年
- 为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。
- 杨宇航宋纪伟时坤曾范利李健明刘红娜王文玉郝俊伟刘东旭杜锐
- 关键词：重组卡介苗流式细胞术免疫效果
- 鹿布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 本研究依据布鲁氏菌的特异性基因Omp25c的部分片段作为靶基因,设计探针引物,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到PGEM-T载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线可知该方法的最低检测浓度可达到36拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟张云杨宇航刘红娜王文玉张秀丽时坤李建明杜锐
- 关键词：布鲁氏菌
- 水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
- 2014年
- 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。
- 刘红娜王文玉张云杨宇航郝俊伟时坤李健明杜锐
- 关键词：大肠杆菌
- 水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7
- 2014年
- 根据水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)基因序列(GenBank登录号:NC_001662.1)设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥102拷贝/μL具有良好的特异性和重复性。同时利用该方法对8份疑似AMDV血清进行检测,结果6份阳性,阳性率为75%。本研究为水貂阿留申病的鉴别诊断及净群根除奠定了技术基础。
- 张秀丽于慧娟徐超张桉潮宋兴超郝俊伟赵家平杜锐
- 关键词：水貂阿留申病毒SYBR荧光定量PCR
