闫晓红
- 作品数：5 被引量：36H指数：3
- 供职机构：北京市农林科学院农业生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市农林科学院科技创新能力建设专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 简化一步多重RT-PCR法快速检测芜菁花叶病毒被引量：8
- 2012年
- 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)是侵染十字花科作物和观赏性物种的主要病害之一。利用反转录酶M-MLV和普通Taq酶,使用一步法多重RT-PCR技术,建立了一种快速、简便、特异性强的检测TuMV的方法。该方法简便,不需先对总RNA提纯,只需室温下在提取液中对病样叶片直接碾磨,用粗提液或浓缩后的DNA-RNA混合物为模板进行检测。2套针对TuMV的特异性引物确保了检测的准确性。
- 曾钢叶艳英闫晓红马荣才唐乐尘姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒一步法多重RT-PCR病毒检测
- 芜菁花叶病毒萝卜与甘蓝分离物P3基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2012年
- 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)危害范围广,变异快,对其序列进行分析,能对病毒的演变与进化有深入的了解,为抗病育种打下基础。P3蛋白是TuMV高度容易变异的蛋白之一,包含一个对Brassica属和Raphanus属不同宿主侵染能力的决定因子,决定了宿主范围。笔者分别从北京感病的萝卜和甘蓝上分离得到4个TuMV分离物BJ-R01和BJ-B01、BJ-B02、BJB03。利用RT-PCR克隆了这4个分离物的P3基因,测定了它们的核苷酸序列,并进行了序列分析。结果表明,4个分离物的P3基因均为1 065个碱基,编码355个氨基酸。4个分离物P3基因的同源性较高,核苷酸序列同源性在92.6%～99.3%,氨基酸同源性在93.5%～99.7%。根据系统进化树分析,4个TuMV分离物均属于world-B组。经对宿主的致病性鉴定,4个TuMV分离物均为BR致病型。4个TuMV分离物对Brassica属植物均表现出强致病性,但对Raphanus属植物致病性显现出明显的差异。
- 叶艳英曾钢闫晓红马荣才吴才君姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒克隆
- 一个含LoxP-FRT重组酶位点及易于操作的植物表达双元载体pYBA100被引量：3
- 2012年
- 在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体。为便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,我们构建了植物表达双元载体pYBA100,以满足用于生产安全转基因植物的需要。本研究通过融合PCR方法,尽可能去除所有非必需的序列,将pYBA载体最小化。pYBA载体在大肠杆菌中为多拷贝,骨架为3.69kb。我们构建的含NptⅡ植物筛选标记基因的载体pYBA100仅为5.37kb,多克隆位点为22个,方便基因工程操作。载体pYBA100的T-DNA植物筛选基因表达框两侧预留有LoxP-FRT融合位点,方便在获得转基因植物后通过Cre或FLP重组酶将植物筛选标记基因删除。pYBA100载体能于大肠杆菌和农杆菌中自我复制,并成功转化了拟南芥,符合农杆菌介导的植物转基因要求。离体删除实验结果证明,载体pYBA100能经Cre重组酶删除植物标记基因表达框。
- 闫晓红王慧叶艳英曾钢马荣才米福贵姚磊
- 关键词：农杆菌介导植物遗传转化
- pYBA植物表达双元载体构建与构巢曲霉alcM启动子在拟南芥中功能验证
- 在农杆菌/(Agrobacterium tumefaciens/)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体。为了便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,本试验构建了植物表达双元载体pYBA载体...
- 闫晓红
- 关键词：乙醇诱导
- 文献传递
