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简化一步多重RT-PCR法快速检测芜菁花叶病毒被引量：8: 2012年; 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)是侵染十字花科作物和观赏性物种的主要病害之一。利用反转录酶M-MLV和普通Taq酶,使用一步法多重RT-PCR技术,建立了一种快速、简便、特异性强的检测TuMV的方法。该方法简便,不需先对总RNA提纯,只需室温下在提取液中对病样叶片直接碾磨,用粗提液或浓缩后的DNA-RNA混合物为模板进行检测。2套针对TuMV的特异性引物确保了检测的准确性。; 曾钢叶艳英闫晓红马荣才唐乐尘姚磊; 关键词：芜菁花叶病毒一步法多重RT-PCR 病毒检测

RNAi介导的植物抗芜菁花叶病毒的研究: 芜菁花叶病毒(TuMV)是危害十字花科作物最严重和分布最广泛的一种病毒。白菜、甘蓝抗TuMV研究一直是我国蔬菜抗病育种的攻关目标之一。植物中虽然广泛存在TuMV的抗性基因，但常规育种存在转育时间较长、某些抗性基因为隐性基...; 曾钢; 关键词：RNAI 发育分析; 文献传递

芜菁花叶病毒萝卜与甘蓝分离物P3基因的克隆与序列分析被引量：4: 2012年; 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)危害范围广,变异快,对其序列进行分析,能对病毒的演变与进化有深入的了解,为抗病育种打下基础。P3蛋白是TuMV高度容易变异的蛋白之一,包含一个对Brassica属和Raphanus属不同宿主侵染能力的决定因子,决定了宿主范围。笔者分别从北京感病的萝卜和甘蓝上分离得到4个TuMV分离物BJ-R01和BJ-B01、BJ-B02、BJB03。利用RT-PCR克隆了这4个分离物的P3基因,测定了它们的核苷酸序列,并进行了序列分析。结果表明,4个分离物的P3基因均为1 065个碱基,编码355个氨基酸。4个分离物P3基因的同源性较高,核苷酸序列同源性在92.6%～99.3%,氨基酸同源性在93.5%～99.7%。根据系统进化树分析,4个TuMV分离物均属于world-B组。经对宿主的致病性鉴定,4个TuMV分离物均为BR致病型。4个TuMV分离物对Brassica属植物均表现出强致病性,但对Raphanus属植物致病性显现出明显的差异。; 叶艳英曾钢闫晓红马荣才吴才君姚磊; 关键词：芜菁花叶病毒克隆

一个含LoxP-FRT重组酶位点及易于操作的植物表达双元载体pYBA100被引量：3: 2012年; 在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体。为便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,我们构建了植物表达双元载体pYBA100,以满足用于生产安全转基因植物的需要。本研究通过融合PCR方法,尽可能去除所有非必需的序列,将pYBA载体最小化。pYBA载体在大肠杆菌中为多拷贝,骨架为3.69kb。我们构建的含NptⅡ植物筛选标记基因的载体pYBA100仅为5.37kb,多克隆位点为22个,方便基因工程操作。载体pYBA100的T-DNA植物筛选基因表达框两侧预留有LoxP-FRT融合位点,方便在获得转基因植物后通过Cre或FLP重组酶将植物筛选标记基因删除。pYBA100载体能于大肠杆菌和农杆菌中自我复制,并成功转化了拟南芥,符合农杆菌介导的植物转基因要求。离体删除实验结果证明,载体pYBA100能经Cre重组酶删除植物标记基因表达框。; 闫晓红王慧叶艳英曾钢马荣才米福贵姚磊; 关键词：农杆菌介导植物遗传转化

HC-Pro基因片段介导的高抗TuMV被引量：2: 2014年; 芜菁花叶病毒(turnip mosaic viruses,TuMV)是侵染重要经济作物的主要病毒之一,寄主范围十分广泛,尤其是对十字花科作物的危害最为严重。为了获得对TuMV持久稳定的高度抗性,本研究以TuMV HC-Pro基因的453 bp保守序列为靶标,构建了植物表达RNAi载体pBBBTu-HC-Pro,并转化了TuMV的天然宿主拟南芥。对转基因拟南芥用北京地区流行的TuMV强致病株BJ-C4进行了抗病接种鉴定。鉴定的13个单拷贝转基因株系中有4个对TuMV的BJ-C4株表现出高度抗性,抗性比对照提高约80%以上,且抗性可以稳定遗传。经半定量和荧光定量PCR方法检测,在高抗转基因植株体内几乎检测不到病毒的累积,抗病效果明显。该载体在利用基因工程抗TuMV育种中具有广阔的应用前景。; 叶艳英曾钢曹鸣庆马荣才吴才君姚磊; 关键词：芜菁花叶病毒 HC-PRO 基因片段 RNAI

外壳蛋白基因片段介导的高抗TuMV研究被引量：1: 2013年; 为了获得对芜菁花叶病毒(TuMV)高度稳定的抗性,选取TuMV的外壳蛋白(CP)基因近3'端保守区共377 bp的核苷酸序列,构建了抗TuMV的发卡结构RNAi载体,并转化了TuMV的天然宿主拟南芥。转基因植株用北京地区TuMV主要流行的强致病株系BJ-C4人工接种。鉴定的8个转基因株系中有3个株系表现出对TuMV的高度抗性。定量PCR结果显示,高抗转基因株系体内几乎检测不到病毒的积累。; 曾钢叶艳英曹鸣庆马荣才唐乐尘姚磊; 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白基因

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曾钢