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FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达: 本研究构建了口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切肽介导的人白介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。首先克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将...; 陈秋菊; 关键词：白细胞介素2 乳腺上皮细胞; 文献传递

利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法: 本发明公开了一种利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用对引物P1在PCR条件...; 曹斌云侯金星安小鹏王建刚宋宇轩杨明明朱广琴王韵斐崔易虹陈秋菊

组织块再移法分离培养奶山羊乳腺上皮细胞被引量：3: 2012年; 通过比较组织块贴壁培养法、组织块再移法、胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶消化配合组织块贴壁法分离、培养、纯化山羊乳腺上皮细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群体倍增时间,研究乳腺上皮细胞培养效果。结果显示,利用胶原酶消化配合组织块贴壁法不能获得正常生长的乳腺上皮细胞;利用组织块贴壁培养法、组织块再移法和胶原酶Ⅱ消化法获得大量的乳腺上皮细胞,所得到的上皮细胞生长曲线呈典型的"S"型,符合细胞生长的一般规律。组织块再移法不仅可快速获得大量纯化的乳腺上皮细胞,而且所得到的细胞经传代后,细胞群体倍增时间最短、增殖能力最强,表明,该法是获得山羊乳腺上皮细胞最适宜的方法。; 陈秋菊王韵斐崔易虹朱广琴宋宇轩曹斌云; 关键词：山羊乳腺上皮细胞

一种山羊产羔性状的分子标记选择方法: 一种山羊产羔性状的分子标记选择方法，以山羊基因组DNA序列为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物P1和P2在PCR条件下分别扩增KITL基因内含子1和6，...; 曹斌云安小鹏侯金星王建刚宋宇轩杨明明朱广琴王韵斐崔易虹陈秋菊

FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达: 2011年; 构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切序列连接EGFP基因,构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pFIENβ,并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞,然后用RT-PCR技术和Western blot检测hIL-2基因与EG-FP基因的表达。重组质粒pFIENβ经酶切鉴定后表明构建成功,转染质粒PFIENβ和pEGFP-C1的细胞均观察到绿色荧光;从转染pFIENβ的乳腺上皮细胞中扩增出hIL-2基因和EGFP基因,而转染pEGFP-C1的细胞中只扩增出EGFP基因;经Western blot检测,转染pFIENβ的细胞中均表达了hIL-2和EGFP蛋白。结果表明山羊β-酪蛋白启动子能同时启动hIL-2基因和EGFP基因在山羊乳腺上皮细胞中的表达,并且利用FMDV 2A元件实现了hIL-2基因和EGFP基因的非融合型表达。; 陈秋菊王韵斐崔易虹朱广琴杨明明宋宇轩曹斌云; 关键词：人白细胞介素2 EGFP 双顺反子

一种山羊产羔性状的分子标记选择方法: 一种山羊产羔性状的分子标记选择方法，以山羊基因组DNA序列为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物P1和P2在PCR条件下分别扩增KITL基因...; 曹斌云安小鹏侯金星王建刚宋宇轩杨明明朱广琴王韵斐崔易虹陈秋菊; 文献传递

检测山羊促性腺激素释放激素和生长分化因子9的碱基突变多态性的方法: 本发明公开了一种检测山羊促性腺激素释放激素基因外显子4和生长分化因子9基因外显子2三个碱基突变多态性的方法，以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的...; 曹斌云安小鹏颜泉梅侯金星王建刚宋宇轩杨明明朱广琴王韵斐崔易虹陈秋菊

西农莎能奶山羊和布尔山羊GnRH基因多态性与产羔数的相关分析被引量：7: 2011年; 根据牛GnRH基因序列设计4对引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRH基因的多态性,同时用最小二乘法研究了其多态性与产羔数和生长体质量的关系。所研究的西农莎能奶山羊和布尔山羊群体在P4扩增片段存在多态性,分别定义为CC、CT和TT 3种基因型;P1、P2和P3扩增片段均不存在多态性,只表现一种带型。通过测序发现CC型与GG型相比扩增片段的第185、336bp处同时有C→T的单碱基突变。在西农莎能奶山羊和布尔山羊群体中,CC和CT基因型产羔数最小二乘均值均极显著或显著高于TT基因型(P<0.05)。研究结果表明,GnRH基因对西农莎能奶山羊和布尔山羊的产羔数均有显著影响,因此认为GnRH基因P4扩增位点的突变可作为西农莎能奶山羊和布尔山羊多胎性状的有效分子标记。; 颜泉梅陈秋菊崔易虹朱广琴朱春梅安小鹏杨莎王建刚宋宇轩曹斌云; 关键词：GNRH 西农萨能奶山羊布尔山羊

一种良种奶山羊多基因聚合的选育方法: 本发明公开了一种良种奶山羊多基因聚合的选育方法，以连续产2羔及以上的奶山羊基因组DNA为模板，利用4对引物分别扩增催乳素受体基因内含子2和外显子10，以及促黄体素beta亚基基因5′非翻译区(5′UTR)和外显子1，以琼...; 曹斌云安小鹏李广侯金星王建刚宋宇轩杨明明朱广琴王韵斐崔易虹陈秋菊; 文献传递

人白介素-2基因打靶载体的构建、转染及鉴定: 2011年; 为研究人白介素-2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达,构建人白介素-2基因的山羊β-酪蛋白位点打靶载体。以质粒pBC1为模板扩增山羊β-酪蛋白上游2.5 kb和下游3.5 kb的序列作为5′和3′同源臂,将克隆得到的人白介素-2基因和neo基因插入到2个同源臂之间,获得山羊β-酪蛋白基因打靶载体pBNI53。利用脂质体将重组质粒转染奶山羊胎儿成纤维细胞进行G418筛选,并采用PCR和实时定量PCR方法对人白介素-2基因在稳定株中的表达进行验证。检测结果表明,本试验构建的打靶载体pBNI53成功转染奶山羊胎儿成纤维细胞,将人白介素-2基因成功整合至奶山羊胎儿成纤维细胞基因组中,为通过体细胞核移植法制备人白介素-2基因乳腺生物反应器的研究奠定了基础。; 王韵斐陈秋菊杨莎崔易虹杨明明曹斌云; 关键词：Β-酪蛋白基因打靶乳腺生物反应器

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陈秋菊