目的:采用核素标记相对和绝对定量(isobaric rags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)蛋白组学技术分析乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)肝纤维化患者和健康人血清中的差异表达蛋白.方法:肝纤维患者与正常人血清各30例,去除血清中14种高丰度蛋白,运用液相色谱基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-fight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物学分析.结果:共鉴定血清蛋白274个,符合条件的差异蛋白20个.其中,在肝纤维患者血清中有11个蛋白表达上调,7个蛋白表达下调.20种差异表达蛋白参与48种生物学过程、8种细胞组分和12种分子途径;蛋白功能交互网图显示APOC3、CLU、C4B、CRP和APOE在网图中处于功能网络交叉点.结论:处于差异蛋白功能交互网中交叉点位置的载脂蛋白C-Ⅲ(apolipoprotein C-Ⅲ,APOC3)、聚集素(clusterin,CLU)、补体C4B(complement C4-B,C4B)、C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)、载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE),可能在HBV肝纤维化的发生发展过程中发挥重要作用.
目的利用蛋白质组学方法发现和验证涂阴肺结核的候选血清标志物。方法采用i TRAQ标记结合MALDI-TOF/MS筛选30例健康对照者和30例涂阴肺结核患者血清的差异表达蛋白,通过生物信息学分析差异蛋白之间的相互作用;对差异蛋白SHBG进一步ELISA验证,应用SPSS 20.0统计软件绘制ROC曲线。结果三次独立重复实验一共筛选和鉴定置信度在95%以上蛋白283种;以正常人血清为对照,涂阴肺结核患者血清中有差异表达蛋白31种(P<0.05),其中17个蛋白表达上调,14个蛋白表达下调;蛋白相互作用发现SHBG等12种蛋白处于相互作用网络关键节点;ELISA验证结果显示涂阴肺结核组血清SHBG蛋白浓度高于正常对照组和肺炎组(P<0.001),与蛋白组学筛选和鉴定的结果一致;以SHBG检测值绘制的ROC曲线下的面积是0.92(P<0.001),其诊断涂阴结核病的灵敏度和特异度分别是87.14%和85.11%。结论 i TRAQ标记结合MALDI-TOF/MS技术筛选和鉴定到的12种关键节点蛋白可能是涂阴结核病潜在标志物,SHBG是值得进一步研究的肺结核候选血清标志物。
