刘伯华
- 作品数：50 被引量：142H指数：7
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- 原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化被引量：21
- 2003年
- 对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- PAGE分析结果表明 ,其纯度达 97%。酶联免疫试验测定的结果显示 ,与复性前变性蛋白相比 ,纯化蛋白与 CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了 2～ 16倍。
- 刘伯华余兴龙张茂林肖昌徐兴然吴健敏李作生涂长春
- 关键词：原核表达猪瘟病毒包涵体复性纯化
- 西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M，进行融合表达和纯化。将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验，观察其保护作用。结果分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M，表达和纯化了融合蛋白Nus-M，该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击。结论构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达，表达产物有较弱的免疫保护反应，为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料，但需要进一步改进。
- 刘志国朱晓光杨保安刘伯华祝庆余
- 关键词：西尼罗病毒多表位基因免疫保护
- 4株SARS冠状病毒中国分离株3′非编码区的序列测定及分析被引量：8
- 2003年
- 分别对 4株SARS冠状病毒中国株基因组 3′非编码区序列进行测定和分析 ,然后应用Blast、DNAstarGeneQuest等软件对中国株的这段序列与其它SARS和非SARS冠状病毒的序列进行比较 .结果显示 ,所测 4株SARS冠状病毒中国分离株的 3′非编码区长度均为 339nt,与其它已测序SARS冠状病毒的相应序列完全一致 .SARS冠状病毒的非编码区含有冠状病毒保守的“伪结”结构 .在距末端 138nt处还存在 1个长约 32nt的Ⅱ型茎 环结构的序列 ,该序列在其它已知人冠状病毒中并不存在 ,而与禽传染性支气管炎病毒和星状病毒中的对应序列高度同源 .
- 范宝昌姜涛于曼邓永强彭文明常国辉司炳银刘伯华杨保安祝庆余秦鄂德
- 关键词：SARS冠状病毒中国分离株重症急性呼吸综合征非典型肺炎
- WJBC株盖塔病毒基因组序列测定及与其他甲病毒的系统进化关系被引量：6
- 2011年
- 目的对WJBC株盖塔病毒(GETV)进行基因组序列测定,阐明其与已报道的GETV及其他甲病毒的关系。方法将GETV基因组编码区分12段分别进行RT-PCR扩增,将扩增产物直接进行测序,非编码区采用RACE法进行扩增,扩增产物纯化后连入pGEM-T easy载体,经转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆鉴定后测序,应用DNAStar软件将测序结果拼接获得基因组序列。结果与结论 GETV基因组核苷酸共11 696 nt,编码3721个氨基酸,非结构基因编码2468个氨基酸,结构基因编码1253个氨基酸,结构基因和非结构基因之间有44 nt的连接区为非翻译区。病毒基因组5'端和3'端分别有78、411 nt的非编码区。序列同源性分析结果表明,此株病毒与M1株盖塔病毒同源性最高,两者核苷酸序列同源性为99.8%,氨基酸序列同源性为99.2%。
- 张雨司炳银常国辉刘伯华杨银辉祝庆余
- 关键词：盖塔病毒基因组RT-PCR
- 汉坦病毒H8205株基因组全序列分析
- 采用RT-PCR技术扩增出汉坦病毒H8205株L、M、S基因序列,利用5'-RACE和3'-RACE扩增出基因的末端,将其分别克隆于pGEM-T Easy载体上进行序列测定,利用重叠片段拼装出汉坦病毒H8205株的基因组...
- 张永国刘伯华李靖战大伟夏玉坤罗渊祝庆余
- 关键词：汉坦病毒基因组全序列RACE系统发生树
- 文献传递
- 人及野鸟H5N1病毒株在人体靶细胞复制及拮抗人细胞因子能力差异分析
- H5N1禽流感病毒跨越种属屏障感染人类是当前全球关注的重要社会公共卫生问题之一。为了揭示H5N1病毒跨种传播的机制,本研究利用分离/保存的3株人源及7株青海野鸟源的H5N1病毒株(人分离株株A/Beijing/01/03...
- 刘伯华夏玉坤罗渊张永国李靖祝庆余
- 文献传递
- 几种虫媒病毒悬浮芯片检测方法的建立
- 虫媒病毒在我国分布广泛,有些病毒可造成严重的公共卫生问题,对于这类病毒快速甄别目前缺乏高通量、快速的检测方法。悬浮芯片是近年来兴起的一种检测技术,具有高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高以及线性范围宽等优点,特别适合于多...
- 罗渊杨保安刘伯华祝庆余
- 关键词：虫媒病毒芯片检测悬浮芯片
- 文献传递
- 人源H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性和致病性研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性,对比研究不同空斑类型H5N1病毒致病性和复制能力差异。方法将不同稀释度的H5N1亚型禽流感病毒株分别接种于MDCK单层细胞,加盖营养琼脂,合适时间染色,观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑形成特点,按照DullbeccoR的方法计算病毒PFU数;根据空斑大小进行挑选、纯化、筛选不同类型空斑病毒,测定这些病毒对Balb/c小鼠致病性差异和在MDCK细胞上复制差异。结果野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,空斑大小、形状差异明显:A/Vietnam/1194/2004(H5N1)以大圆形斑为主,夹杂少量小点状斑。A/Beijing/01/03(H5N1)大多数为中等大小空斑,并有少数针尖状斑。野生A/Vietnam/1194/2004经过分离纯化后,得到的两种空斑类型病毒在致病性和复制能力存在明显差异。结论野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,从野生病毒株中分离、纯化的大小斑病毒在致病性和复制能力上存在明显差异。
- 李靖战大伟刘伯华夏玉坤罗渊户义张永国杨保安祝庆余
- 关键词：H5N1不均一性毒力
- 4株SARS冠状病毒基因组5’端序列的分析与比较被引量：1
- 2003年
- 利用5′RACE试剂盒对从中国不同地区、不同SARS患者体中分离的SARS-CoV基因组5′端序列进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆至T easy vector。扩增片段的序列测定结果表明:所分离的4株SARS-CoV基因组5′端非编码区的核苷酸序列和其他国家和地区报道的序列基本一致,而且所形成二级结构也完全相同,但与已知普通冠状病毒的差别较大。同时发现在依赖于RNA的RNA聚合酶起始密码子上游-197 nt处有冠状病毒典型的转录调控核心保守序列5′-CUAAAC-3′。
- 常国辉彭文明刘伯华范宝昌刘洪邓永强吕富双杨保安秦鄂德祝庆余
- 关键词：SARS冠状病毒基因组
- 猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达及其免疫活性的研究
- 猪瘟病毒的E2蛋白是CSFV主要的保护性抗原,E2蛋白可诱导机体产生坚强的中和性免疫保护,能够抵抗致死剂量CSFV的攻击。在E2蛋白上存在4个相对独立的抗原区,即A、B、C和D区,A区又可以分为A1(776aa-866a...
- 刘思国涂长春余兴龙张茂林刘伯华吴健敏殷震
- 文献传递
