杨保安
- 作品数：48 被引量：253H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 从噬菌体库中筛选抗SARS病毒S蛋白的Fab中和活性抗体研究被引量：3
- 2005年
- 目的从SARS病毒噬菌体抗体库中筛选出具有中和活性的抗S蛋白Fab片段抗体。方法ELISA方法对抗体库进行富集筛选及人源抗体克隆结合活性的测定,竞争ELISA初步筛选有中和活性的抗体,中和试验进一步确定中和活性,进而对其序列进行测定和分析。结果特异性富集了抗S蛋白噬菌体抗体,竞争ELISA筛选出两株抗体可部分阻断中和抗体2C5与S蛋白的结合,中和试验确定其具有一定中和活性,编号为M1A和P8A,测序结果表明它们为两株不同的抗体克隆。结论筛选获得了两株抗体可部分中和SARS病毒活性,它们的获得为探索SARS病毒感染的被动免疫治疗打下了一定基础。
- 康晓平杨保安赵慧祝庆余
- 关键词：人源抗体中和活性抗SARS病毒S蛋白FAB
- SARS病毒BJ01株核壳蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2005年
- 通过RTPCR从SARS病毒BJ01株的RNA中扩增全长N基因,经凝胶回收后插入pBAD/TOPOThioFusion表达载体。然后在Top10中利用阿拉伯糖进行诱导表达,在优化的条件下,表达产物以可溶性为主,表达量约占细菌可溶性总蛋白的47%。表达产物采用ProBond蛋白纯化系统纯化后,目的蛋白约占67%。经免疫印迹法检测,表达产物与SARS病人恢复期血清和兔的抗血清均可进行特异反应。BJ01株核壳蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达为后续的ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
- 陈水平刘素辉范宝昌赵慧姜涛秦成峰杨保安秦鄂德
- 关键词：SARS冠状病毒核壳蛋白可溶性表达纯化
- H5N1禽流感病毒空斑特征和对小鼠致病性关系研究
- 观察人源 H5N1禽流感病毒 A/Viet Nam/1194/2004和 A/Beijing/01/03及禽源病毒 A/black-headed goose/Qinghai/1/2005(H5N1)在 MDCK 细胞上的...
- 李靖战大伟刘伯华张永国户义夏玉坤杨保安祝庆余
- 文献传递
- 西部马脑炎病毒基因组序列的半套式RT-PCR检测被引量：1
- 2003年
- 为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR ;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化 ,以进一步提高扩增的特异性。结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度 ,其半套式扩增出特定大小的DNA产物 ;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性。扩增产物约为 190bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致。结果表明采用半套式RT PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高 10
- 赵月峨于曼邓永强杨保安吕富双祝庆余秦鄂德
- 关键词：基因组序列
- 一种拯救流感病毒的方法及其专用双向转录载体
- 本发明公开了一种拯救流感病毒的方法及其专用双向转录载体。该双向转录载体，是在pVAX1的多克隆位点插入RNA聚合酶I的启动子和RNA聚合酶I的终止子得到的环状重组载体；所述RNA聚合酶I的终止子位于所述pVAX1的CMV...
- 祝庆余刘伯华张永国战大伟户义夏玉坤罗渊杨保安李靖
- 文献传递
- 免疫荧光法检测广州非典型肺炎患者血清被引量：7
- 2003年
- 石玉玲李林海徐德兴司炳银于曼杨保安
- 关键词：免疫荧光法非典型肺炎血清
- SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察被引量：5
- 2004年
- 观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。
- 秦鄂德石慧颖唐琳王翠娥常国辉丁志芬赵铠汪建于曼司炳银刘建源陈则吴东来彭文明孟庆文刘伯华韩伟国尹训南段鸿元杨保安战大伟田龙程晓洁吴劲松谭刚李懿李豫川李双利刘永刚刘洪
- 关键词：猴体SARS病毒灭活疫苗免疫原性中和抗体疫苗免疫
- 基因免疫制备西尼罗病毒NS5蛋白特异性单抗被引量：1
- 2009年
- 研究了NS5蛋白在西尼罗病毒的特异性检测方面的应用及NS5在黄病毒复制中的作用机理。采用RT-PCR方法扩增了西尼罗病毒株的NS5基因片段,将其克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒。以重组质粒免疫BALB/c小鼠后取脾脏进行杂交瘤细胞融合,建立能稳定分泌西尼罗NS5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。构建了真核表达质粒pVAX1-WNV-NS5,免疫动物后获得了2B2B9等4株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,均为IgM型。真核表达质粒免疫后成功地诱导了针对NS5蛋白的体液免疫应答,单抗特异性分析显示4株单抗与其他黄病毒存在一定交叉反应。
- 夏玉坤刘伯华李靖罗渊张永国杨保安祝庆余
- 关键词：西尼罗病毒NS5基因免疫单克隆抗体
- 人源H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性和致病性研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性,对比研究不同空斑类型H5N1病毒致病性和复制能力差异。方法将不同稀释度的H5N1亚型禽流感病毒株分别接种于MDCK单层细胞,加盖营养琼脂,合适时间染色,观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑形成特点,按照DullbeccoR的方法计算病毒PFU数;根据空斑大小进行挑选、纯化、筛选不同类型空斑病毒,测定这些病毒对Balb/c小鼠致病性差异和在MDCK细胞上复制差异。结果野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,空斑大小、形状差异明显:A/Vietnam/1194/2004(H5N1)以大圆形斑为主,夹杂少量小点状斑。A/Beijing/01/03(H5N1)大多数为中等大小空斑,并有少数针尖状斑。野生A/Vietnam/1194/2004经过分离纯化后,得到的两种空斑类型病毒在致病性和复制能力存在明显差异。结论野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,从野生病毒株中分离、纯化的大小斑病毒在致病性和复制能力上存在明显差异。
- 李靖战大伟刘伯华夏玉坤罗渊户义张永国杨保安祝庆余
- 关键词：H5N1不均一性毒力
- 4株SARS冠状病毒基因组5’端序列的分析与比较被引量：1
- 2003年
- 利用5′RACE试剂盒对从中国不同地区、不同SARS患者体中分离的SARS-CoV基因组5′端序列进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆至T easy vector。扩增片段的序列测定结果表明:所分离的4株SARS-CoV基因组5′端非编码区的核苷酸序列和其他国家和地区报道的序列基本一致,而且所形成二级结构也完全相同,但与已知普通冠状病毒的差别较大。同时发现在依赖于RNA的RNA聚合酶起始密码子上游-197 nt处有冠状病毒典型的转录调控核心保守序列5′-CUAAAC-3′。
- 常国辉彭文明刘伯华范宝昌刘洪邓永强吕富双杨保安秦鄂德祝庆余
- 关键词：SARS冠状病毒基因组
