包红
- 作品数：23 被引量：47H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达及病毒样颗粒的形成
- 2014年
- 目的利用大肠埃希菌系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,纯化和重组装获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),为进一步研制HPV18基因工程疫苗奠定基础。方法首先按大肠埃希菌密码子偏好进行HPV18L1全基因合成,经PCR扩增出截短的HPV18L1基因,构建重组表达载体PET30a-L1,通过优化表达在大肠埃希菌BL21中可溶性表达L1蛋白,其次采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、疏水层析后,获得高纯度的的L1蛋白,再通过解聚和重聚获得VLPs。结果全基因优化并截短的HPV18L1蛋白在大肠埃希菌系统中以可溶形式表达,纯化后的蛋白纯度达到90%以上,电镜下观察到直径为60 nm的VLPs颗粒。结论利用大肠埃希菌系统可溶性表达非融合HPV18L1蛋白,并获得均一的VLPs颗粒,为疫苗的开发奠定基础。
- 安静付生芳李雄雄包红寇桂英白幕群余黎
- 关键词：人乳头瘤病毒18型L1蛋白可溶性表达病毒样颗粒
- 用套式RT-PCR检测兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV和HPIV-3被引量：3
- 2007年
- 为了调查兰州地区肺炎患儿中RSV和HPIV-3的感染状况,分别在RSV的G蛋白基因的保守序列和HPIV-3的HN基因的保守序列处,设计了套式引物,采用套式RT-PCR的方法检测了60份兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物样本,结果显示,60份样本中RSV阳性为14例(23%),HPIV-3阳性为12例(20%)。并分别随机对其中的5份样本的扩增产物进行了基因序列测定,结果5份RSV阳性样本与参考株序列的同源性均大于97%,5份HPIV-3阳性样本与参考株序列的同源性大于97%。表明兰州地区下呼吸道感染患儿中,RSV和HPIV-3是常见的感染病原体。
- 白慕群安红包红周旭
- 关键词：套式RT-PCR呼吸道合胞病毒
- 人3型副流感病毒HN基因的克隆、表达及其免疫原性被引量：3
- 2008年
- 目的克隆人3型副流感病毒(HPIV-3)HN基因,构建原核表达质粒,并检测表达蛋白的免疫原性。方法从呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中提取HPIV-3RNA,用套式RT-PCR扩增HN基因,克隆至pGEM-T载体上,进行核苷酸序列分析,并用生物信息软件分析HN蛋白的二级结构,构建截短的HN基因原核表达载体pET-28a-HN,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测后,进行纯化和复性。并以此蛋白免疫昆明小鼠,检测小鼠血清中HN抗体效价。结果扩增出的HPIV-3的HN基因核苷酸序列与参考序列的同源性为95%,氨基酸序列同源性为97%,有16处发生了突变。截短的HN基因的原核表达载体经酶切鉴定及测序,证明构建正确。重组HN蛋白的表达量占菌体总蛋白的30%以上,且具有良好的反应原性。复性的重组HN蛋白免疫的小鼠可产生高效价的抗HN抗体。结论原核表达的截短的HN蛋白具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生较高水平的抗体应答。
- 白慕群安静安红包红周旭
- 关键词：HN基因克隆原核表达免疫原性
- 采用半巢式RT-PCR检测兰州地区住院肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV被引量：1
- 2009年
- 从人呼吸道合胞病毒(hRSV)基因序列中高度保守的N基因处,设计了特异性半巢式引物,以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法随机检测了46份兰州地区2007年春季住院肺炎患儿下呼吸道分泌物样本。结果46份样本中有19份扩增出了预期目的片段,对所有扩增产物进行基因序列测定。结果表明19份样本均有RSV感染,其检出率为41%,而且序列分析结果显示,所有RSV阳性样本均与RSVA亚型的同源性高于B亚型。
- 傅生芳包红安红张蓉芳周旭金玉
- 关键词：人呼吸道合胞病毒
- 流行性感冒灭活疫苗人体免疫效果及评价被引量：3
- 2001年
- 通过对兰州生物制品研究所试生产的流行性感冒灭活疫苗的人体试验研究。兰州所流感灭活疫苗接种后 ,所有接种对象均未见红肿、硬结等局部反应 ,仅有 1例发生在儿童组的低热全身反应 (体温 37 4℃ ) ,72小时后恢复正常 ,整体副反应发生率 0 2 74% ,肯定了该疫苗的安全性。疫苗接种前后易感人群血清血凝抑制 (HI)抗体阳转率 10 0 %。非易感人群HI抗体几何平均效价 (GMT)增长 19～ 6 0倍 ;抗体 4倍增长率最低为 95 % ,成人组平均值最高 (97 6 7% )。证实该疫苗具有较好的免疫原性。
- 赵秦靳毅余黎包红胡广宏安红李益民方捍华李薇
- 关键词：流行性感冒灭活疫苗抗体
- 重组胰酶在口服轮状病毒活疫苗制备中的初步应用被引量：1
- 2017年
- 目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变化等方面进行考量比较;观察轮状病毒LH9株经4种胰酶活化,分别接种对应胰酶传代的MA104细胞上培养,通过病毒滴度(lg CCID_(50)/mL)及RNA-PAGE检测,分析重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的应用。结果连续P1~P10代后3种重组胰酶和猪源胰酶在细胞总数、细胞活率及细胞生长状况,差异均无统计学意义(P>0.05),显微镜观察细胞形态无明显改变。轮状病毒LH9株经不同胰酶活化,接种MA104细胞P1~P10代培养后,病毒滴度差异均无统计学意义(P>0.05),且RNA-PAGE电泳图谱未见差异。结论初步应用试验表明3种重组胰酶均可替代猪源胰酶用于轮状病毒疫苗的制备。
- 姜英陈汉泉包红马超周旭
- 关键词：轮状病毒疫苗制备
- 流行性感冒裂解疫苗的研制被引量：5
- 2002年
- 作为换代产品 ,流行性感冒裂解疫苗的研制已取得突破性进展。根据WHO有关规程的规定和大量的试验研究结果 ,完整建立了该疫苗的生产工艺和生产质量控制系统 ,完成了“流行性感冒裂解疫苗制造及检定规程”等规定性文件的起草和审核工作 ,以中试规模连续生产了三批疫苗并全部自检合格。通过疫苗稳定性试验、效力试验、异常毒性试验及过敏性试验等观察 。
- 赵秦余黎周旭靳毅包红胡广宏
- 关键词：流行性感冒裂解疫苗
- 人乳头瘤病毒16型L1蛋白的纯化及免疫学活性
- 2007年
- 目的纯化人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,并分析其免疫学活性,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。方法采用电洗脱的方法纯化目的蛋白,通过免疫双扩散和ELISA法检测其免疫反应性。将该蛋白免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后的目的蛋白经凝胶灰度扫描显示,其纯度达到95%,免疫双扩散和ELISA结果显示,宫颈癌病人血清抗体效价明显高于健康人,表明该蛋白具有良好的抗原性,小鼠免疫力试验结果表明该蛋白具有较好的免疫原性。结论电洗脱法得到的目的蛋白纯度较高,且有较好的免疫学活性。
- 安静周旭席亮包红陈汉泉
- 关键词：人乳头瘤病毒L1蛋白纯化免疫学活性
- 轮状病毒LH9株在Vero细胞中的培养条件优化研究被引量：5
- 2011年
- 为优化轮状病毒株在Vero细胞上的培养条件,将轮状病毒基因重配株LH9按0.1MOI分别接种于不同规格的细胞培养瓶(100ml、2000ml、3L、15L)。病毒接种采用吸附与未吸附两种方式、病毒收获采取低温冻融后离心与直接离心两种方法,观察分析对病毒滴度的影响。实验中,用CASY细胞计数仪分析活细胞率,病毒接种后逐日观察细胞病变(CPE)并取样,采用细胞半数感染量测定病毒滴度。结果表明,使用不同规格细胞培养瓶经吸附法培养接种、低温破碎法收获的LH9株病毒滴度高,其中以15L立瓶培养滴度最高(6.0～7.0 logCCID50/ml)。
- 包红寇桂英王名强韩平余黎周旭
- 关键词：轮状病毒VERO细胞高滴度
- 人乳头状瘤病毒16型L1蛋白的高效表达及抗原性分析被引量：2
- 2008年
- 为了在大肠杆菌中高效表达人乳头状瘤病毒16型L1蛋白,将L1基因的N端截去,选择最适合L1表达的载体,并且对表达条件进行筛选,结果表明重组蛋白的表达量达到33%;经包涵体变性复性和初步纯化,得到初纯的蛋白,ELISA结果分析表明,复性的L1蛋白保留了较好的抗原性。
- 安静包红周旭
- 关键词：人乳头状瘤病毒抗原性
