寇桂英
- 作品数：19 被引量：33H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 硫酸镍对人红细胞膜Na^+、K^+、Ca^(2+)-ATP酶及乙酰胆碱酯酶活力的影响被引量：1
- 2005年
- 实验研究了硫酸镍对人红细胞膜Na+、K+、Ca2+-ATP酶及乙酰胆碱酯酶(AChE)活力的影响,为从分子水平阐明镍毒作用机理及为探索防治措施提供依据。结果表明,硫酸镍对此三种酶均有抑制作用,并呈现较高的量效关系及时效关系。
- 路东张岩锐寇桂英朱玉梅罗广付萍
- 关键词：硫酸镍细胞膜
- 轮状病毒LH9株在Vero细胞中的培养条件优化研究被引量：5
- 2011年
- 为优化轮状病毒株在Vero细胞上的培养条件,将轮状病毒基因重配株LH9按0.1MOI分别接种于不同规格的细胞培养瓶(100ml、2000ml、3L、15L)。病毒接种采用吸附与未吸附两种方式、病毒收获采取低温冻融后离心与直接离心两种方法,观察分析对病毒滴度的影响。实验中,用CASY细胞计数仪分析活细胞率,病毒接种后逐日观察细胞病变(CPE)并取样,采用细胞半数感染量测定病毒滴度。结果表明,使用不同规格细胞培养瓶经吸附法培养接种、低温破碎法收获的LH9株病毒滴度高,其中以15L立瓶培养滴度最高(6.0～7.0 logCCID50/ml)。
- 包红寇桂英王名强韩平余黎周旭
- 关键词：轮状病毒VERO细胞高滴度
- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达及病毒样颗粒的形成
- 2014年
- 目的利用大肠埃希菌系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,纯化和重组装获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),为进一步研制HPV18基因工程疫苗奠定基础。方法首先按大肠埃希菌密码子偏好进行HPV18L1全基因合成,经PCR扩增出截短的HPV18L1基因,构建重组表达载体PET30a-L1,通过优化表达在大肠埃希菌BL21中可溶性表达L1蛋白,其次采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、疏水层析后,获得高纯度的的L1蛋白,再通过解聚和重聚获得VLPs。结果全基因优化并截短的HPV18L1蛋白在大肠埃希菌系统中以可溶形式表达,纯化后的蛋白纯度达到90%以上,电镜下观察到直径为60 nm的VLPs颗粒。结论利用大肠埃希菌系统可溶性表达非融合HPV18L1蛋白,并获得均一的VLPs颗粒,为疫苗的开发奠定基础。
- 安静付生芳李雄雄包红寇桂英白幕群余黎
- 关键词：人乳头瘤病毒18型L1蛋白可溶性表达病毒样颗粒
- 轮状病毒基因重配株LD_9(G_2型)Vero细胞适应株的选育及其生物学特性被引量：3
- 2010年
- 目的探讨轮状病毒基因重配株LD(9G2型)在Vero细胞上的传代适应性,选育高滴度的适应株。方法将3个轮状病毒基因重配株LD9克隆株(G2型)(LD9-1、LD9-2、LD9-3)在Vero细胞上分别以0.05、0.10、0.15和0.20MOI传代,选育出1株Vero细胞适应株,并确定其最适MOI,然后在Vero细胞上连续传代15代,检测病毒滴度及基因组核酸带型,采用nestRT-PCR法扩增其VP7基因。取第8、10、13代适应株病毒,以0.10MOI接种于Vero细胞,观察病毒的增殖动态。结果选育出的LD9-2株以0.10MOI接种Vero细胞可产生明显的细胞病变(CPE),病毒滴度随传代次数的增加先下降后升高,至4代时最低,9代后稳定于6.75lgCCID50/ml左右;连续传代15次,病毒基因组核酸带型均与原始毒株一致,且均能扩增出502bp的VP7基因。LD9-2株病毒增殖高峰期均出现在第7～8天,病毒滴度为6.00～7.00lgCCID50/ml。结论轮状病毒基因重配株LD9株(G2型)经Vero细胞适应性培养,获得了病毒表达量高且能稳定传代的疫苗候选株。
- 寇桂英胡广宏包红王名强陈汉泉汪洲周旭
- 关键词：轮状病毒疫苗VERO细胞生物学特性
- 人呼吸道合胞病毒F1蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化。方法采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-F1,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋白可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%。结论已原核表达并纯化了HRSV F1蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础。
- 傅生芳寇桂英包红姜英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：原核细胞纯化
- 两种DMEM培养基培养CHO-C28细胞的研究被引量：1
- 2005年
- 在同一实验条件下,比较了赛尔生物化工厂的DMEM培养基(国产DMEM)和Gibco公司的DMEM培养基(进口DMEM),在基因工程乙肝疫苗生产过程中,对细胞的生长状况、HBsAg的分泌、及纯化收率的影响。结果显示:国产DMEM更有利于重组(CHO)乙肝疫苗的大规模生产。
- 路东寇桂英苟凝虹徐枫林杰姚伟
- 关键词：乙型肝炎表面抗原
- 原核表达HPV16 L1蛋白的变性、纯化及复性效果评价被引量：1
- 2009年
- 目的探讨原核表达HPV16L1蛋白的变性、纯化及复性条件,并对复性效果进行评价。方法将重组质粒pET28a-L1转化E.coliBL21(DE3),经放大培养诱导表达后,收集菌体,超声破碎后提取包涵体,并对其进行洗涤、变性,离子交换层析纯化,然后稀释复性。经电镜观察、红细胞凝集试验以及免疫原性分析,对复性效果进行评价。结果L1蛋白在8mol/L尿素中溶解不完全,SDS、硫脲和高pH值可提高其溶解度;纯化后的L1蛋白纯度可达90%;电镜可观察到VLP,并能凝集小鼠红细胞。免疫家兔后,可产生高滴度的抗体。结论复性的HPV16L1蛋白在体外可自我折叠形成具有正确空间构象的VLP,且具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV16预防性疫苗及诊断试剂盒奠定了基础。
- 安静白慕群翟雷寇桂英张晋瑾周旭
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1蛋白纯化复性病毒样颗粒
- 人呼吸道合胞病毒黏附蛋白片段的原核表达及纯化被引量：2
- 2012年
- 目的原核表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株黏附蛋白(G)片段。方法利用PCR技术从HRSV兰州株(A亚型)中扩增G基因AA75-225片段,克隆至原核表达载体pET-42b(+)中,构建重组表达质粒pET-42b-G,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PCR扩增获得453 bp的DNA片段;重组表达质粒pET-42b-G经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量为50 230,表达量占菌体总蛋白的25%,以包涵体和可溶性两种方式存在;纯化后重组蛋白纯度可达95%以上,可与抗RSV-G蛋白单克隆抗体特异性结合。结论已成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了HRSV兰州株G片段,为后续RSV疫苗的研制、RSV感染的血清学诊断及试剂盒的研发提供了材料。
- 朱传凤傅生芳寇桂英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒黏附蛋白原核细胞
- 人呼吸道合胞病毒(hRSV)兰州株的黏附蛋白(G)片段的表达、纯化和鉴定
- 目的:克隆并表达了人呼吸道合胞病毒(hRSv)兰州株的黏附蛋白(G)基因。方法:利用PCR技术扩增hRSV兰州株的G基因,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子...
- 朱传凤傅生芳寇桂英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 文献传递
- Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗稳定性研究被引量：1
- 2009年
- 为了研究Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的稳定性,对2-8℃、25℃、37℃放置不同时间的9批成品疫苗定期取样观察外观物理性状、检测病毒滴度。结果表明,在2-8℃可保存两年以上,疫苗滴度保持不变;在25℃放置2周、37℃放置1周后疫苗滴度开始下降,因此,该疫苗在贮存、运输以及使用过程中环境温度应以2-8℃为宜。
- 寇桂英包红安红周旭
- 关键词：轮状病毒热稳定性病毒滴度
