和婷
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向微管解聚蛋白stathmin siRNA对Aβ1-42诱发PC12细胞损伤的保护作用
- 2012年
- 目的:探讨微管解聚蛋白stathmin siRNA对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:构建靶向stathmin基因的shRNA真核表达载体;然后用脂质体转染的方法将重组质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,用G418筛选得到稳定转染的细胞;通过RT-PCR和Western印迹方法分析stathmin基因mRNA及蛋白表达水平,筛选表达最低的稳定细胞株。用不同质量浓度的Aβ1-42诱导稳定细胞株,用MTT试验观察筛选稳定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,转染了重组载体pSilencer4.1-s的细胞中stathmin核酸和蛋白水平的表达均显著下调。与Aβ1-42处理的PC12细胞(63.88±2.36)和PC12-parental细胞(65.78±5.74)比较,Aβ1-42处理的PC12-s细胞(78.57±5.22)的存活率明显增加。用Aβ1-42处理过的PC12细胞(28.31±1.65)和PC12-parental细胞(26.65±3.64)的凋亡比用Aβ1-42处理过的PC12-s细胞(17.77±2.37)的凋亡明显增加。结论:Stathmin基因的下调对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤具有保护作用,为阿尔茨海默病的治疗探索了一条新策略。
- 林芳高萍刘昕阳和婷张惠中
- 关键词：STATHMINPC12细胞Β淀粉样蛋白
- Stathmin基因毕赤酵母表达体系的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建Stathmin基因毕赤酵母表达体系,并对表达产物进行纯化和鉴定,为Stathmin相互作用蛋白的进一步研究提供实验基础。方法通过PCR方法从SKBR3乳腺癌细胞中扩增出人Stathmin基因片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K,构建重组载体pPIC3.5K-Stathmin,转化GS115工程菌,经含基因素(G418)的酵母膏胨葡萄糖琼脂(YPD)培养基筛选出阳性克隆。用0.5%甲醇诱导表达,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western Blotting鉴定表达产物。结果 DNA测序结果表明,所获基因片段与Stathmin基因序列一致。在含有G418 600μg/mL的YPD培养基上筛选出的pPIC3.5K-Stathmin转化子,经PCR鉴定为阳性克隆。SDS-PAGE可见约37×103处有目的条带表达,经Western Blotting鉴定,此条带为Stathmin蛋白。结论成功构建了Stathmin酵母表达载体,并在毕赤酵母中表达成功,为Stathmin相互作用蛋白研究以及生物治疗药物的制备奠定了基础。
- 杨铭林芳和婷董轲张惠中
- 关键词：基因
- Stathmin基因磷酸化位点突变真核表达载体构建
- 2016年
- 目的构建Stathmin基因磷酸化位点突变载体,为Stathmin磷酸化功能的进一步研究提供实验基础。方法通过设计磷酸化位点突变引物,运用聚合酶链反应分别将人Stathmin基因片段中4个丝氨酸磷酸化位点Ser16、Ser25、Ser38、Ser63突变为不能进行磷酸化的丙氨酸,插入真核表达载体pc DNA3.1,分别构建重组载体pc DNA3.1/Stathmin Ser16/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser25/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser38/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser63/A,并进行基因测序鉴定。结果基因测序鉴定重组载体结果表明,分别将Stathmin基因中Ser16、Ser25、Ser38、Ser63突变为丙氨酸。结论成功构建了Stathmin磷酸化位点突变载体,为进一步研究Stathmin磷酸化的作用机制和功能奠定了基础。
- 杨铭林芳和婷王琳汪定成董轲张惠中
- 关键词：STATHMIN磷酸化点突变
- 人B7-H3基因的克隆及其重组蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化被引量：1
- 2017年
- 目的:克隆人B7-H3(CD276)基因的完全编码区序列,在毕赤酵母中表达B7-H3重组蛋白并纯化。方法:应用RT-PCR从人肺癌A549细胞中克隆B7-H3基因的完全编码区序列并在3'端加入6×His标签基因,克隆于毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建表达质粒pPIC9K/B7-H3,以该质粒转染酵母菌株GS115,在含有不同浓度遗传霉素(G418)的YPD平板上进行筛选,然后挑取单克隆进行PCR鉴定,甲醇诱导表达鉴定结果为阳性的酵母重组子,表达产物通过离子交换柱纯化后经SDS-PAGE电泳和Western Blot进行检测。结果:应用RT-PCR从人肺癌A549细胞中获得约1500bp、与目的基因大小相符的条带,且测序正确;构建的酵母表达质粒pPIC9K/B7-H3表达框正确无误;阳性酵母重组子表达产物经6×His标签纯化后,SDS-PAGE电泳显示在70k D处有与预期大小相符的蛋白条带,Western Blot显示该蛋白可分别与抗6×His单克隆抗体及抗人B7-H3抗体呈特异性反应。结论:成功克隆了人B7-H3基因的完全编码区序列,在毕赤酵母中表达并进一步纯化,为B7-H3在肿瘤发生、发展中的作用及机制研究奠定了基础。
- 张喆代瑛王希和婷董轲张惠中
- 关键词：B7-H3毕赤酵母蛋白表达
- Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨乳腺癌细胞 MDA-MB-231和 MCF-7中 Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系，为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法应用 RT-PCR和 Western Blot方法检测 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中 Stathmin基因的表达水平，同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测 MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力，分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示，Stathmin基因在 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞（F＝10.173，P＜0.05），且 MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于 MCF-7细胞中的表达水平（t＝4.562，P＜0.05）。而 MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于 MCF-7细胞（P＜0.05）。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强，Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。
- 杨铭林芳和婷王琳董轲张惠中
- 关键词：STATHMIN乳腺癌侵袭性
