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茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择被引量：103: 2010年; 选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR)准确性的先决条件。该文以茶树(Camellia sinensis)芽、叶、幼根、嫩茎、花瓣、种子和愈伤组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和α-tubulin4个常用内参基因在茶树不同器官组织中的表达情况。经GeNorm和NormFinder软件分析发现,当利用荧光定量PCR分析比较茶树不同器官组织中的基因表达差异时,可选择β-actin作为校正内参基因;而比较不同成熟度的叶片和愈伤组织时,可以选择GAPDH作为校正内参基因。; 孙美莲王云生杨冬青韦朝领高丽萍夏涛单育骆洋; 关键词：茶树实时荧光定量PCR 内参基因

茶儿茶素生物合成相关基因表达的实时荧光定量PCR分析: 茶儿茶素生物合成主要涉及的酶类有PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3'H、F3'5'H、DFR、LAR、ANS和ANR等，其中与非酯型儿茶素C、GC、EC和EGC合成直接相关的酶是LAR和ANR。寻找儿茶...; 孙美莲; 关键词：基因表达实时荧光定量PCR

茶儿茶素-香草醛酸性试剂检测方法的研究被引量：5: 2010年; 香草醛酸性试剂比色法是检测儿茶素含量最常见方法,但其准确性及实用性一直受到质疑。利用溶剂萃取、TLC和HPLC等方法,对儿茶素-香草醛酸性试剂显色方法的特异性、准确性进行了研究。结果显示,儿茶素类显色反应的灵敏度远高于黄酮醇、二氢黄酮醇和茶皂素类,又由于这些物质在茶叶中的含量很低,因此不会干扰儿茶素总量的测定。通过对显色试剂中酸的种类、酸浓度、显色温度和显色时间的研究,得出儿茶素检测的最佳方法:采用1%香草醛-浓盐酸试剂,在室温下反应5min,以Y(A505)=aX+b公式计算茶树中儿茶素的总含量。; 王正荣刘亚军高丽萍夏涛孙美莲; 关键词：茶树儿茶素

茶树愈伤诱导及不同儿茶素含量细胞系筛选被引量：2: 2014年; 茶树组织培养是开展茶树次生代谢及调控研究重要的研究平台。在建立茶树愈伤组织培养体系的基础上,开展了茶树含不同儿茶素含量的细胞系筛选方法的研究。结果表明,在H、S和B 3种诱导培养基中,只有B培养基适合于诱导生长迅速、组织疏松、质地均一且具有一定儿茶素合成能力的愈伤组织。从外植体方面考虑,种子诱导出的愈伤组织具有较强的植株再生能力;幼茎和叶片诱导出的愈伤组织,其生长速度快、组织疏松,但再生能力弱。在此基础上,采用目视法和二分法,结合HPLC分析,对B培养基诱导的细胞系"yunjing63Y"进行了筛选,得到含不同儿茶素含量的细胞系"yunjing63Y"和"yunjing63X"。分析结果显示,细胞系"yunjing63Y"和"yunjing63X"的儿茶素组分与鲜叶相似,且二者儿茶素含量(干重)差异较大,前者为7.77 mg·g-1,后者为0.13 mg·g-1。; 刘亚军王正荣王婕杨冬青郭丽丽孙美莲王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树儿茶素细胞系

蔗糖对茶树儿茶素生物合成的影响被引量：2: 2014年; 儿茶素是茶树重要的次生代谢产物,也是茶叶的重要功能物质,具有多种药理活性。因此正确评价茶叶及其制品中儿茶素含量,了解儿茶素生物合成及其调控手段具有重要的意义。利用香草醛盐酸比色法、HPLC等方法,研究蔗糖诱导子处理对茶儿茶素生物合成的影响,并通过qRT-PCR技术分析蔗糖处理对茶树儿茶素生物合成过程中基因表达的影响。结果显示,无论是茶树愈伤组织还是茶树幼苗经蔗糖处理后其儿茶素含量及组分都有所增加,但是高浓度的蔗糖会抑制茶树愈伤组织的生长,特别是在液体培养的早期添加蔗糖。添加适当浓度的蔗糖能增加茶树愈伤组织中非酯型儿茶素C和EC的含量;蔗糖处理后茶树幼苗中非酯型儿茶素EGC和EC含量明显上升,而酯型儿茶素EGCG相对含量有所下降。qRT-PCR分析显示蔗糖诱导了茶树幼苗中C4H、CHS、CHI、F3H、LAR、ANR、DFR、F3’H、F3’5’H基因表达,其中变化最明显的是F3H,其次是ANR、CHS。这进一步证实了F3H、ANR为茶树儿茶素合成的关键基因。; 刘亚军王正荣孙美莲王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树愈伤组织基因表达

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究被引量：4: 2011年; 从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。; 杨冬青王云生孙美莲单育骆洋韦朝领高丽萍夏涛; 关键词：茶树总RNA 器官

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孙美莲