师红利
- 作品数：5 被引量：10H指数：1
- 供职机构：宁夏回族自治区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
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- 血清反应因子的过表达与胃癌预后关系的研究
- 目的检测血清反应因子SRF（serum response factor）蛋白在胃癌组织及癌旁组织的表达情况，分析SRF蛋白表达与临床病理特征的关系及SRF蛋白表达与胃癌患者术后5年生存率的关系，判断SRF是否可以作为胃癌...
- 师红利
- 关键词：胃癌癌旁预后
- 文献传递
- 多肽pd20与肿瘤坏死因子α融合蛋白的纯化及生物学活性鉴定
- 2014年
- 背景多肽pd20是具有胃癌肝转移导向性的新多肽分子,为研究其是否具有携带抗癌药物或抑癌基因靶向性治疗胃癌肝转移的作用,本研究将其与肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行基因融合,构建原核表达载体,对重组融合蛋白进行诱导表达。目的将pd20-TNF-α融合蛋白进行蛋白纯化,并对纯化后蛋白进行鉴定和生物学活性检测。方法用Ni-NTA柱法纯化pd20-TNF-α融合蛋白并进行Western blotting检测;采用L929细胞毒法进行pd20-TNF-α融合蛋白的生物学活性检测;用流式细胞术检测不同浓度融合蛋白作用于胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L的早期凋亡率,此实验分为5组:pd20-TNF-α100.00、25.00、6.25 U/ml分别为A、B、C组,不加融合蛋白的为D组,流式细胞凋亡的KB组为E组;细胞侵袭实验观察融合蛋白对胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L转移能力的影响,此实验分为4组:pd20-TNF-α组、TNF-α组、XGC9811-L组和对照肽组。结果通过Ni-NTA柱纯化,在咪唑浓度为200 mmol/L时获得纯化的目标pd20-TNF-α融合蛋白,蛋白纯度可达92%;纯化后的蛋白具有与抗TNF-α单抗结合的能力。L929细胞毒法显示:pd20-TNF-α融合蛋白对L929细胞有明显的杀伤力,杀伤活性可达7.6×106U/ml。凋亡实验显示:A^E 5组细胞早期凋亡率间有差异〔(9.04±0.08)%、(6.96±1.21)%、(5.99±0.02)%、(0.73±0.02)%、(0.01±0.00)%;F=2.57,P<0.05〕。细胞侵袭实验显示:pd20-TNF-α组、TNF-α组、XGC9811-L组、对照肽组单位时间内的穿膜细胞数有差异〔(26.5±5.9)、(36.0±3.2)、(63.5±5.0)、(64.0±6.8)个;F=49.87,P<0.01〕。结论本研究成功纯化了pd20-TNF-α融合蛋白,并证实该蛋白有明显的生物学活性,具有促进胃癌细胞早期凋亡和抑制胃癌细胞侵袭的能力。
- 呼圣娟姜荣兴师红利沈皓谢华红
- 关键词：融合蛋白质类肿瘤坏死因子Α纯化生物学活性
- 沉默c-met基因表达对胃癌肝高转移潜能细胞生物学行为的影响被引量：10
- 2016年
- 背景胃癌肝高转移潜能细胞(XGC9811-L)是本实验组在前期工作中建立的一株具有肝脏高转移潜能的胃癌细胞系,c-met基因在其中高表达。c-met是肝细胞生长因子(HGF)的受体。目的研究沉默c-met基因表达对XGC9811-L的增殖、侵袭和转移等生物学行为的影响。方法 2014年1—6月,采用细胞转染法将重组质粒p SuppressorRetro-c-met-siRNA导入XGC9811-L,建立稳定转染细胞系,按有无转染和转染目的基因的不同分为未转染组、空载体组、随机序列组和siRNA组。采用荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测XGC9811-L中c-met mRNA相对表达水平,Western blotting法检测c-met相对表达水平,通过细胞增殖实验检测各组细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,通过侵袭实验和运动实验计算各组穿膜细胞数。结果 siRNA组c-met mRNA、c-met相对表达水平低于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。siRNA组第3天、第5天、第6天、第7天细胞增殖能力低于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。在侵袭实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。在运动实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。结论沉默c-met基因的表达可以抑制XGC9811-L的增殖、侵袭和转移能力,c-met在胃癌肝转移的发生、发展过程中可能起重要作用,抑制c-met基因表达可能会抑制胃癌细胞向肝脏转移。
- 沈皓呼圣娟师红利姜荣兴贺婵婵张蓉
- 关键词：基因沉默原癌基因蛋白质C-MET
- 胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合肽与肿瘤坏死因子的融合与鉴定
- 2013年
- 目的将胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合肽pd20与人肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行基因融合,并构建原核表达载体,表达pd20-TNF-α融合蛋白。方法利用全基因合成法制备pd20-TNF-α融合基因,构建pd20-TNF-α原核表达载体,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析。结果成功构建了pd20-TNF-α重组融合质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量约21 000处出现了1条新生的蛋白条带,转印NC膜后该融合蛋白可与抗TNF-α单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了pd20-TNF-α基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行诱导表达,为下一步融合蛋白的纯化奠定了实验基础。
- 呼圣娟姜荣兴沈皓师红利王铁武
- 关键词：基因融合原核表达载体重组融合蛋白
- 多肽pd20分子胃癌肝转移导向性的体内特异性鉴定
- 2013年
- 目的鉴定胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合肽pd20胃癌肝转移的导向性。方法构建胃癌肝转移的模型,通过归巢实验鉴定pd20噬菌体在胃癌肝转移裸鼠体内不同部位的归巢情况。竞争抑制实验来检测多肽pd20是否能抑制pd20噬菌体的归巢作用。免疫荧光实验检测多肽pd20在胃癌肝转移裸鼠体内的荧光分布情况。结果归巢实验显示:pd20噬菌体在胃癌和胃癌肝转移组织中回收滴度明显高于心、脾、肾等正常组织和对照噬菌体M13(P<0.05),而对照噬菌体M13在各组织中回收滴度之间的差异无统计学意义(P>0.05)。竞争抑制试验表明:随着多肽pd20的浓度增加,对pd20噬菌体归巢至胃癌肝转移组织的抑制作用越强(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示:将多肽pd20携带绿色荧光,注入胃癌肝转移裸鼠体内,发现绿色荧光主要分布于胃癌和胃癌肝转移组织,而其他正常组织中荧光分布很少,或几乎没有荧光分布。结论裸鼠体内实验证实多肽pd20可能具有胃癌肝转移的导向性。
- 师红利王海姜荣兴沈皓呼圣娟
- 关键词：胃癌肝脏导向性
