张兆敏
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家科技基础条件平台建设计划四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 免疫鸡群新城疫强毒感染及其与HI抗体的相关性研究被引量：5
- 2009年
- 为调查新城疫强毒(vNDV)在免疫鸡群中的感染情况及其与抗ND抗体效价的相关性,用自行建立的检测vNDV的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)对采自川、渝两地36个免疫鸡群的360份肛门棉拭子进行检测,同时采血测定其血凝抑制抗体效价。结果共检出5个vNDV阳性鸡群,每个阳性鸡群检出1例阳性样本,经病毒分离鉴定证实为NDV;36个受检鸡群HI抗体平均效价在4.5～10.1,标准偏差(SD)在0.70～3.19,变异系数在9.5%～44.3%。当SD大于2.0时,vNDV感染鸡群阳性率为50%(5/10),当CV大于32%时,vNDV感染鸡群阳性率为62.5%(5/8);vNDV感染个体HI抗体效价分别为210、29、28、26、23;阳性样本RT-PCR产物经测序分析证实为vNDVF基因序列,发育进化分析显示,2株vNDV属基因Ⅶ型,3株属基因Ⅸ型。研究结果表明,RRT-PCR适合vNDV感染及传播的监测和分子流行病学调查;免疫鸡群是否感染vNDV可能与个体HI抗体水平高低无关,而与群体HI抗体离散度有关,SD和CV值有助于判定鸡群感染vNDV的风险。
- 汤承岳华刘小银杨泽林张兆敏张斌俞宁
- 关键词：新城疫病毒强毒分子流行病学血凝抑制抗体
- SYBR GreenⅠ定量RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒方法的建立被引量：7
- 2008年
- 针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)℃,对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增,可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.99%和5.12%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需5h。
- 马莉汤承李明义岳华张彬张兆敏
- 关键词：H5亚型禽流感病毒SYBR
- 双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株
- 2009年
- 本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。
- 张斌汤承张兆敏马莉刘小银李明义岳华
- 关键词：禽流感H5亚型双重RT-PCR
- 鸡热休克蛋白70基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2011年
- 热休克蛋白70基因(heat shock protein 70 gene,Hsp70 gene)具有多种重要生理学功能,为进一步研究鸡Hsp70及其表达蛋白的生物学特性,设计一对特异性引物,并采用SMART技术富集鸡心肌细胞mRNA,RT-PCR扩增Hsp70基因的完整编码区,构建Hsp70原核表达载体,转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达Hsp70重组蛋白.结果显示,扩增片段为1905bp,包含有鸡Hsp70基因完整编码区与GenBank中鸡Hsp70基因的同源性为99.2%～99.8%,SDS-PAGE电泳显示,在92Kda处的蛋白表达量明显增多,Western blot试验证实表达产物能与抗Hsp70阳性血清发生反应,证实本研究扩增出了鸡Hsp70基因的完整编码区,原核表达得到了鸡Hsp70重组蛋白,为进一步研究鸡Hsp70的分子特征及其表达蛋白的生物学功能奠定了基础.
- 汤承张兆敏岳华
- 关键词：HSP70SMART技术克隆原核表达
- 新城疫病毒HN基因功能结构域的原核表达被引量：3
- 2011年
- 本研究对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)分离株sc05的HN基因进行了克隆、序列测定,在此基础上将其C端功能结构域76-571aa片段亚克隆到pET32a(+)表达载体上,构建重组表达质粒pET32a-HN,鉴定正确后转化进BL21plysS(DE3)细胞,筛选出阳性克隆,用1mmol/L IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。SDS-PAGE电泳结果显示,HN基因功能结构域片段在BL21plysS(DE3)细胞中实现融合表达,表达产物大小约为76ku,Western blotting试验证实其能与NDV阳性血清反应。本研究为进一步研究HN蛋白功能结构域的免疫原性和研制鸡新城疫HN基因工程疫苗奠定了基础。
- 俞宁张兆敏岳华
- 关键词：NDVHN基因克隆功能结构域原核表达
- 基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H_5N_1亚型禽流感病毒被引量：1
- 2009年
- 针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因。熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(79.5±0.3)℃和(83.3±0.3)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150 bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列。该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰。AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA无扩增信号。本法最低可检测21.0拷贝.μL-1和19.5拷贝.μL-1H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍。本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于HN亚型AIV的检测。
- 岳华李明义马莉汤承张兆敏张斌
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型熔解曲线
- 乳鸽沙门氏菌性脑炎的诊断被引量：2
- 2009年
- 四川某肉种鸽场500只30日龄乳鸽发生以腹泻和神经症状为特征的传染性疾病,经PCR检测及细菌分离鉴定,初步确诊为沙门氏菌性脑炎,分离菌株的抗原结构式为4,5:i:-;药敏试验结果显示分离菌对环丙沙星、达氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、氧氟沙星和恩诺沙星高度敏感。
- 张兆敏岳华王晓佳高艳张斌陈小飞海泉
- 关键词：沙门氏菌脑炎药敏试验
- 乳鸽沙门菌性脑炎的诊断
- 鸽副粘病毒和沙门菌等多种病原都能感染鸽造成脑组织损伤,导致脑炎的发生继而出现共济失调、头颈扭曲等神经症状,仅从临床症状和病理剖检变化难以鉴别,必需通过实验室诊断才能确诊。2008年4月四川某肉种鸽场500只30日龄乳鸽发...
- 张兆敏岳华王晓佳高艳张斌陈小飞海泉
- 文献传递
- RT-PCR快速诊断鸽新城疫被引量：3
- 2009年
- 2008年11月成都市某种鸽场5120只种鸽发生急性疾病并出现大批死亡,临床表现有下痢和歪头缩颈等明显神经症状,剖检变化有全身性的黏膜和浆膜出血,并伴有呼吸道和消化道病变,经实验室细菌分离鉴定和RT-PCR检测,确诊为鸽新城疫。目前使用LaSota、V4等鸡新城疫疫苗进行免疫,可有效地控制该病在鸽群中的流行。
- 张兆敏岳华
- 关键词：种鸽神经症状新城疫
- TaqMan实时荧光RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒被引量：4
- 2009年
- 根据GenBank中100个H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针，对荧光定量RT—PCR反应体系和条件进行优化，并对该方法进行评价。结果表明：该方法对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增，对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其他家禽常见病原RNA无扩增；敏感度高，最低检测限为21个拷贝质粒DNA；可重复性好，批内变异系数及批间变异系数分别为2．01％和4．93％；检测速度快，从样本处理到报告结果仅需4h。
- 马莉汤承岳华李明义张彬张兆敏
- 关键词：禽流感病毒H5亚型TAQMAN探针
