张必成
- 作品数：38 被引量：287H指数：11
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- 人鼻咽组织特异性基因NASG编码蛋白及其抗体的制备
- 人鼻咽组织特异性基因NASG编码蛋白及其抗体的制备。本发明采用成人鼻咽组织cDNA制备检测子(tester)，以成人食管、肺、肝、心、胃、脾、肌肉、肾和皮肤cDNA制备驱赶子(driver)，采用抑制性消减杂交技术获得1...
- 李桂源张必成李小玲沈守荣周鸣聂新民朱诗国吕红斌向娟娟
- 文献传递
- 鼻咽癌分子标志物—BRD7试剂盒
- 鼻咽癌分子标志物—BRD7试剂盒。本发明通过PCR技术和直接测序法对BRD7基因的编码区进行单核苷酸多态性(Coding－region Single Nucleotide Polymorphism，cSNP)分析，并计算...
- 李桂源余鹰熊炜曾朝阳李小玲朱诗国张必成周鸣
- 文献传递
- 鼻咽癌细胞中表达上调的新基因NAG23(FBXO30)的克隆与分析被引量：9
- 2001年
- 目的:分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581(6q25.3-27)附近与鼻咽癌相关的新基因。方法:运用差异RT-PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签(expressedsequencetags,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及其所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA,对该序列进行初步分析。结果:获得了一个位于6q25.3-27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23(FBXO30)(GenBank收录编号:AF248640)。该基因在68.9%的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F-box基序。结论:NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F-box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。
- 李忠花曹利向娟娟张必成向秋唐珂周鸣李小玲李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤基因克隆F-BOX蛋白
- BRD7交互作用蛋白基因BRD2、BRD3在鼻咽癌组织中的表达被引量：5
- 2003年
- 背景与目的:BRD7基因是通过cDNA代表性差异分析获得的一个鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关基因。采用酵母双杂交技术,已从人胎脑的cDNA文库中筛选到了两个与BRD7蛋白存在交互作用且包含溴区结构域(bromodomain)的蛋白BRD2、BRD3。本研究的目的在于进一步证实BRD7蛋白与BRD2、BRD3蛋白之间的交互作用,探讨BRD2、BRD3基因在鼻咽癌中的表达和作用模式。方法:将BRD2、BRD3基因分别与BRD7基因共转化酵母Y187后将菌落影印到尼龙膜,X-Gal检测酵母中报告基因LacZ的表达,推断BRD2、BRD3与BRD7蛋白之间的交互作用。RT-PCR方法检测BRD2、BRD3基因在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌活检组织中的差异表达以及在BRD7基因稳定转染的鼻咽癌细胞株(HNE1)中,BRD7基因的重表达对BRD2、BRD3基因表达水平的影响。结果:通过特异性酵母双杂交技术,发现酵母转化子的颜色呈蓝色,进一步证实BRD2、BRD3蛋白能分别与BRD7蛋白发生交互作用。RT-PCR结果显示,在鼻咽癌组织中,BRD2和BRD3基因表达下调或缺失;在BRD7基因稳定转染的HNE1细胞株中,随着BRD7基因表达的增强,BRD2、BRD3基因的表达也存在明显的上调。结论:BRD7蛋白能分别与BRD2、BRD3蛋白发生交互作用,且在mRNA水平存在一定程度的协同表达作用。
- 周鸣彭聪聂新民张必成朱诗国余鹰李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌酵母双杂交技术发病机制
- 一种生物标志物——荧光硅纳米颗粒的制备方法
- 一种荧光硅纳米颗粒的制备方法。本发明运用OP－10/环已烷/氨水微乳液自组装体系，在硅纳米颗粒网状聚合的过程中将荧光素、罗丹明等荧光染料嵌入其中，制备出不同粒径大小(20－200nm)，分布均匀，形态规则，表面光滑圆润，...
- 李桂源朱诗国向娟娟吕红斌李小玲沈守荣周洁聂新民张必成周鸣曹利
- 文献传递
- 新克隆的硝基还原酶基因NOR_1的表达及其产物的纯化被引量：9
- 2003年
- 背景与目的:NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤/易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法:抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT-PCR扩增NOR1基因全长,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后插入同样经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-thiogalactoside,IPTG)诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Westernblot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Westernblot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论:成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。
- 聂新民肖炳李小玲张必成李伟芳王蓉曹利李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤RT-PCR肿瘤生物学
- 鼻咽癌上皮细胞株HNE1差异表达基因的分离与鉴定被引量：3
- 2003年
- 为了分离鼻咽癌差异表达基因 ,应用抑制性扣除杂交技术 ,在正向抑制性扣除杂交中 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为检测子 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为驱赶子 ;在反向抑制性扣除杂交中 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为检测子 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为驱赶子 ,分别通过抑制性扣除杂交 ,构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达下调和表达上调的两个扣除cDNA文库 .从鼻咽癌相关的扣除cDNA文库中随机挑取 1 2 0 0个克隆 ,采用菌落PCR扩增其插入cDNA片段 ,自动点膜制备成cDNA微阵列膜 ,分别用鼻咽癌上皮细胞株HNE1、人胚鼻咽上皮mRNA经逆转录标记cDNA探针 ,分别与cDNA微阵列膜杂交 ,通过杂交信号的自动扫描分析 ,对杂交信号存在 5倍差异的克隆进行测序 ,获得了 1 0个鼻咽癌差异表达基因的cDNA片段 ,其中 3个为新基因序列 ,其GenBank登录号为 :AF5 1 0 1 88、AF5 1 0 1 89和AF5 1 0 1 90 ,7个代表已知基因序列 .采用RT PCR证实S1 0 0A8,CK1 9和RBP1基因在人胚鼻咽上皮中高表达而在鼻咽癌细胞株HNE1中低表达 .
- 张必成周洁朱诗国龚佳蕾聂新民吕红斌何显锋李小玲胡赓熙李桂源
- 关键词：CDNA微阵列差异表达基因
- 人胚鼻咽上皮细胞cDNA文库的构建及鼻咽癌相关基因的筛选被引量：12
- 2002年
- 为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因 ,采用SMART (switchingmechanismat 5′endofRNAtranscript)技术 ,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库 .从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA ,利用经修饰的oligo (dT)引物 (含sfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiⅠA酶切位点 )作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR (long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiⅠ (ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库 .结果表明 ,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得 1 0× 10 6个重组子 ,重组率达 96 % .文库扩增后 ,滴度达 7 8× 10 9pfu ml,插入cDNA平均长度为 1 2kb ,用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA .构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。
- 张必成曹利钱骏余鹰李伟芳向娟娟李桂源
- 关键词：鼻咽上皮细胞CDNA文库鼻咽癌胚胎基因克隆
- 表达序列标签数据库搜索鉴定小鼠UBAP1基因及其数字化表达分析被引量：13
- 2002年
- UBAP1(ubiquitinassociatedprotein 1)基因是最近克隆的一个定位于人类染色体 9p2 1 2 2鼻咽癌杂合性丢失高频区的泛肽相关蛋白家族新成员 .为了深入研究UBAP1基因的功能 ,利用计算机对表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)、UniGene等数据库进行综合搜索分析 ,结合cDNA克隆测序的方法 ,成功地获得了UBAP1基因在小鼠中的同源基因 .小鼠UBAP1基因cDNA全长为 2 6 76bp ,编码一个由 44 1个氨基酸组成的蛋白质 ,在其蛋白质C端只有一个泛肽相关功能域 (UBAdomain) .与人UBAP1基因相比 ,两者编码的氨基酸序列有 89%相同 .基于EST的数字化表达分析显示UBAP1基因在小鼠正常组织中广泛高表达 .
- 钱骏董利张必成王洁如周鸣李忠花李伟芳李小玲李桂源
- 关键词：表达序列标签数据库搜索小鼠鼻咽癌基因克隆
- 应用酵母双杂交系统筛选BRD7相互作用的蛋白质被引量：15
- 2002年
- BRD7基因是鼻咽癌组织表达下调/缺失的基因,有强烈的鼻咽癌细胞系HNE1生长抑制作用.利用酵母双杂交系统筛选与BRD7蛋白相互作用的蛋白,首先将BRD7基因的完整阅读框架部分亚克隆至pAS2载体（BRD7-BD）,然后以BRD7-BD为靶蛋白,筛选人胎脑cDNA文库,在4.8×106个转化子中筛选到11个阳性克隆,序列测定表明,分离到溴区包含蛋由3,溴区包含蛋白2,β-IκB激酶,KIAA1375蛋白,白介素7和接头相关蛋白复合物3δ-1亚单位等与BRD7相互作用蛋白,说明BRD7可能与BRD3或BRD2蛋白形成异源二聚体或三聚体发挥核内转录调节功能.
- 余鹰朱诗国张必成周鸣李小玲李桂源
- 关键词：酵母双杂交系统相互作用蛋白鼻咽癌
