朱平
- 作品数：6 被引量：21H指数：2
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- 鼠IL-35真核表达载体的构建及在Hepa1-6细胞中的表达
- 2012年
- 目的 构建小鼠IL-35的真核表达载体并使其在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6中表达.方法 采用PCR方法从含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中扩增目的 基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中,经菌落PCR、双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染方法转染到Hepa1-6细胞中,48h后收集细胞,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的 蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定证实重组表达载体构建成功,转染入Hepa1-6细胞经SDS-PAGE电泳和Western Blotting证明均得到与预期相对分子量大小相符的蛋白条带.结论 成功构建小鼠IL-35真核表达载体并在Hepa1-6细胞中表达,为进一步研究mIL-35的生物学功能提供了条件.
- 朱平鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍苗乃法
- IL-10与疾病关系的研究进展被引量：19
- 2012年
- IL-10是一种重要的抗炎细胞因子，对多种免疫细胞功能均有抑制作用。这种细胞因子的特殊生理意义在于防止和抑制强大的特异和非特异性免疫反应和由此导致的组织损伤，同时IL-10可增强“清道夫”功能，并有助于诱导免疫耐受。IL-10的这些作用与疾病的发生有密切的联系，因此研究其分子机制和生物学特征对IL-10相关性疾病的免疫治疗有重要意义。
- 朱平杜小萍鞠吉雨
- 关键词：IL-10细胞因子受体免疫性疾病
- 小鼠IL-35基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2010年
- 目的克隆小鼠mlL-35两亚基mEBI3，mlL-12p35cDNA，并构建mlL-35基因的原核表达载体并进行诱导表达。方法RT—PCR方法从RAW246．7细胞中扩增mEBI3基因及脂多糖体外刺激BALB／c小鼠的脾细胞中扩增mlL-12p35基因，通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mlL-12p35基因，并构建原核表达载体pET-30a．mlL-35，转化感受态E．coliBL21（DE3），并用IPTG进行诱导表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的蛋白的表达。结果成功克隆了mEBI3、mlL-12p35cDNA，通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker—mlL-12p35片段，并构建出原核表达载体pET-30a-mlL-35；在IPTG诱导下在E．coliBL21（DE3）中高效表达相对分子质量（Mr）为50000的重组mlL-35蛋白，目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中。结论利用构建的原核表达载体pET-30a-mlL-35成功表达出mlL-35蛋白，为进一步探讨mlL-35的生物学功能奠定了基础：
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- 关键词：原核表达
- 小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
- 研究背景:IL-35是重要调节性细胞因子,研究其生物学功能具有重要意义。目的:构建真核酵母表达载体p PIC9K与小鼠IL-35的重组质粒p PIC9K-mIL-35,并在巴斯德毕赤(Pichia pastoris)酵母...
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- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
- 2016年
- 目的构建真核酵母表达载体pPIC9K与小鼠IL-35基因的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3'端引入His标签,构建重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,经SalⅠ线性化重组质粒后,用电穿孔方法将该基因转染毕赤酵母细胞内。经G418梯度筛选高拷贝转化子,筛选Mut+表型后经PCR进一步鉴定IL-35基因与酵母染色体是否整合。小量诱导表达筛选出高表达菌株,大量甲醇诱导表达,以SDS-PAGE及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达。结果小鼠IL-35基因真核酵母表达载体pPIC9K-mIL-35-His构建成功,并且在GS115中通过甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析,可见相对分子质量约为65 000的目的蛋白。结论实验所构建的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His可在毕赤酵母GS115中正确的表达小鼠IL-35基因。
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- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- mIL-35对Hepa1-6肿瘤生长及荷瘤小鼠免疫功能的影响
- 目的:探讨mIL-35对Hepa1-6肿瘤生长及荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:将构建的真核表达载体pc DNA3.1/V5-His B-mIL-35用脂质体转染方法转染入小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,G418筛选阳性克隆...
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- 关键词：肝癌细胞免疫功能
- 文献传递
