唐媛媛
- 作品数：9 被引量：5H指数：2
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- 鼠IL-35真核表达载体的构建及在Hepa1-6细胞中的表达
- 2012年
- 目的 构建小鼠IL-35的真核表达载体并使其在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6中表达.方法 采用PCR方法从含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中扩增目的 基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中,经菌落PCR、双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染方法转染到Hepa1-6细胞中,48h后收集细胞,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的 蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定证实重组表达载体构建成功,转染入Hepa1-6细胞经SDS-PAGE电泳和Western Blotting证明均得到与预期相对分子量大小相符的蛋白条带.结论 成功构建小鼠IL-35真核表达载体并在Hepa1-6细胞中表达,为进一步研究mIL-35的生物学功能提供了条件.
- 朱平鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍苗乃法
- 小鼠IL-35基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2010年
- 目的克隆小鼠mlL-35两亚基mEBI3，mlL-12p35cDNA，并构建mlL-35基因的原核表达载体并进行诱导表达。方法RT—PCR方法从RAW246．7细胞中扩增mEBI3基因及脂多糖体外刺激BALB／c小鼠的脾细胞中扩增mlL-12p35基因，通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mlL-12p35基因，并构建原核表达载体pET-30a．mlL-35，转化感受态E．coliBL21（DE3），并用IPTG进行诱导表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的蛋白的表达。结果成功克隆了mEBI3、mlL-12p35cDNA，通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker—mlL-12p35片段，并构建出原核表达载体pET-30a-mlL-35；在IPTG诱导下在E．coliBL21（DE3）中高效表达相对分子质量（Mr）为50000的重组mlL-35蛋白，目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中。结论利用构建的原核表达载体pET-30a-mlL-35成功表达出mlL-35蛋白，为进一步探讨mlL-35的生物学功能奠定了基础：
- 唐媛媛鞠吉雨朱平王丽娜林志娟邸大琳苗乃法
- 关键词：原核表达
- BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应被引量：3
- 2012年
- 背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。
- 袁芳鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍
- 关键词：NCIH446细胞细胞周期CD44
- 小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
- 研究背景:IL-35是重要调节性细胞因子,研究其生物学功能具有重要意义。目的:构建真核酵母表达载体p PIC9K与小鼠IL-35的重组质粒p PIC9K-mIL-35,并在巴斯德毕赤(Pichia pastoris)酵母...
- 唐媛媛邸大琳王丽娜朱平孙萍鞠吉雨
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
- 2016年
- 目的构建真核酵母表达载体pPIC9K与小鼠IL-35基因的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3'端引入His标签,构建重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,经SalⅠ线性化重组质粒后,用电穿孔方法将该基因转染毕赤酵母细胞内。经G418梯度筛选高拷贝转化子,筛选Mut+表型后经PCR进一步鉴定IL-35基因与酵母染色体是否整合。小量诱导表达筛选出高表达菌株,大量甲醇诱导表达,以SDS-PAGE及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达。结果小鼠IL-35基因真核酵母表达载体pPIC9K-mIL-35-His构建成功,并且在GS115中通过甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析,可见相对分子质量约为65 000的目的蛋白。结论实验所构建的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His可在毕赤酵母GS115中正确的表达小鼠IL-35基因。
- 唐媛媛朱平邸大琳魏兵鞠吉雨
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物及试剂盒和检测方法
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物及试剂盒和检测方法。用于检测结核分枝杆菌的组合物1包括：核苷酸序列如SEQ NO:1‑3所示；用于检测非结核分枝杆菌的组合物2‑4包括：核苷...
- 伊正君付玉荣 陈柯唐媛媛王文涛 席志阳 王晓强 苏继营 刘畅
- 一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物及试剂盒和检测方法
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物及试剂盒和检测方法。用于检测结核分枝杆菌的组合物1包括：核苷酸序列如SEQ NO:1‑3所示；用于检测非结核分枝杆菌的组合物2‑4包括：核苷...
- 伊正君付玉荣 陈柯唐媛媛王文涛 席志阳 王晓强 苏继营 刘畅
- mIL-35对Hepa1-6肿瘤生长及荷瘤小鼠免疫功能的影响
- 目的:探讨mIL-35对Hepa1-6肿瘤生长及荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:将构建的真核表达载体pc DNA3.1/V5-His B-mIL-35用脂质体转染方法转染入小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,G418筛选阳性克隆...
- 朱平唐媛媛邸大琳王丽娜梁淑娟鞠吉雨
- 关键词：肝癌细胞免疫功能
- 文献传递
- 一种用于结核病诊断与鉴别的miRNA标志物及试剂盒
- 本发明属于诊断标志物技术领域，具体涉及一种用于结核病诊断与鉴别的miRNA标志物及试剂盒。所述miRNA为如下3种miRNA的任意一种或任意组合，名称和序列分别如下所示：miR‑342‑3p，其为SEQ ID NO:1序...
- 伊正君付玉荣 李崇辉王文涛张波唐媛媛曲梅花
