李自安 作品数:41 被引量:53 H指数:4 供职机构: 成都军区昆明总医院 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 云南省科技厅科研基金 云南省科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 机械工程 更多>>
胎儿肌肉来源细胞的分离及其成肌分化研究 2015年 目的观察胎儿肌肉来源细胞(f MDC)体外成肌分化能力以及在mdx鼠体内再生抗肌营养不良蛋白。方法使用含10%新生牛血清的DMEM/F12培养液,采用预贴壁方法从胎儿肌肉组织中分离f MDC。采用免疫染色鉴定肌肉特异标志的表达。肌内注射f MDC到6.5 Gy照射3 d后的mdx小鼠股直肌,1个月后采用免疫荧光染色法和RT-PCR方法检测人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结果采用预贴壁方法可从胎儿肌肉组织中分离到贴壁生长、梭型的f MDC。可在f MDC的一些长纤维细胞包浆中检测到MHC的表达,在一些细胞胞核中检测到成肌素的表达。可在注射f MDC的mdx小鼠肌肉中检测到人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结论 f MDC中存在MHC和成肌素的阳性表达,注射f MDC到照射过的mdx小鼠体内可以再生抗肌营养不良蛋白表达。 庞荣清 李自安 王强 杨建勇 朱慧 何洁 朱向情关键词:DUCHENNE型肌营养不良 动物模型 自主开发神经外科手术用便携式视频显微镜 朱兴宝 杨云华 魏洪林 罗俊力 王振洲 潘险峰 李自安 自2008年06月至2014年12月,自主开发神经外科手术用便携式视频显微镜、进行视屏图像引导显微镜手术的研究,主要内容如下:1、定制强照度环形灯,改装便携式视频显微镜使之适合神经外科手术、组装神经外科手术用便携式视频显...关键词:关键词:视频显微镜 骨髓胚胎样干细胞体内重建dystrophin的表达 目的:观察骨髓胚胎样干细胞体内再生dystrophin的可行性.
方法:采用SSP-PCR方法鉴定mdx小鼠的基因型.分离扩增人骨髓胚胎样干细胞,采用DIR标记后,注射细胞到mdx小鼠腹股沟三角皮下,采用活体成... 庞荣清 王强 杨建勇 朱光旭 李自安 何洁 朱向情 阮光萍 潘兴华关键词:DUCHENNE型肌营养不良 抗肌萎缩蛋白 蛋白表达 文献传递 新生猕猴UCMSC的制备、鉴定及对老年猕猴自发DM的治疗作用 被引量:1 2018年 目的探讨新生猕猴脐带间充质干细胞(UCMSC)对老年猕猴自发性糖尿病(DM)的治疗作用。方法利用组织贴壁法获得猕猴UCMSC,流式检测UCMSC的免疫表型,进行体外分化能力分析。将UCMSC进行e GFP标记后,经静脉输入24周岁的自发DM猕猴体内。分别在UCMSC输入前和输入后1个月,测定DM猕猴血清葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清胰岛素(INS)、血清C-肽(C-P)含量,比较输入前后的变化。结果建立猕猴UCMSC分离、培养方法,并获得UCMSC,猕猴UCMSC高表达CD44和CD29,不表达CD34和CD45,可被诱导分化为软骨、骨、脂肪、胰岛样细胞。UCMSC输入到自发DM老年猕猴体内后,血清Glu、TG、TC水平降低,而INS、C-P水平升高。结论成功分离扩增新生猕候UCMSC,该细胞对老年猕猴自发DM有一定治疗作用。 朱向情 王强 蔡学敏 李自安 庞荣清 魏玲 潘兴华关键词:猕猴 脐带 间充质干细胞 老年 糖尿病 山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞对胎羊发育的影响 被引量:2 2018年 目的探索山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞(MSC)对胎羊发育的影响。方法以B超探查10只疑似怀孕的母山羊,观察胎羊数量、胎羊性别,确定胎肝位置。怀孕约3个月时,在B超引导下穿刺至胎肝,注射不同体积和不同数量的雄性山羊骨髓MSC悬液到胎肝实质区域,精心护理并观察穿刺母羊是否流产。结果借助B超探查10只疑似怀孕母羊中的6只怀孕,可以发现胎心跳动和胎肝血流并确定胎肝的位置,在B超引导下能够准确注射MSC悬液至胎肝实质区域,注射1 ml MSC悬液,不会引起流产,安全可行;而注射同等细胞数量的4 ml MSC悬液,则导致穿刺山羊流产。结论 B超显影可确诊山羊怀孕和确定胎肝位置,胎肝内注射1 m山羊骨髓MSC悬液不会导致胎羊流产,MSC数量不变而体积增加至4 ml时易导致胎羊流产。 黄小昆 龙海 苏锡雄 苏锡雄 李自安 杨艾梅 王强 李自安 王金祥 余璞 庞荣清 王强关键词:超声引导 定位注射 山羊 Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化 2016年 目的探讨Notch1对骨髓源性脂肪祖细胞(BMAPCs)向脂肪细胞分化的影响。方法无菌取sD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液,差速贴壁法培养,流式分析检测细胞表面标志表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-timeqPCR)检测脂肪相关基因和Notch信号分子表达。Notch1基因沉默实验分为空载体组和Notch1小RNA干扰组。Westernblotting检测干扰效率;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit行细胞成脂诱导。结果BMAPCs表达CD34、CD44、CD45及CD90,且表达6种脂肪相关基因及Notch信号分子;成脂诱导促进Notch1mRNA表达(P〈0.01);Notch1小RNA干扰抑制Notch1蛋白表达(P〈0.05)。Notch1小RNA干扰组的Cebpa、Lpl和Ppqγ、Slc2a4与Fabp4 mRNA表达均较对照显著降低,而pread1mRNA表达显著增加(P〈0.05-P〈0.01);Notch小RNA干扰显著抑制脂肪细胞百分率(P〈0.05)。结论Notch1基因沉默抑制BMAPCs向成熟脂肪细胞分化。 王金祥 王小华 白盈盈 周芳 蔡学敏 刘菊芬 李自安 余争平 朱光旭 潘兴华干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后化学发光成像 2016年 目的研究用化学发光成像的方法观察脐带间充质干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后的情况,代替活体成像仪的可行性。方法用CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒转染树鼩脐带间充质干细胞,用最适浓度的嘌呤霉素筛选,存活的细胞用6孔板的3个孔培养,贴壁后,3个孔依次加入底物D-荧光素钾盐,用化学发光成像仪拍照,再用软件进行活体成像转换。将转染成功的细胞注入麻醉后的树鼩皮下,树鼩静脉注射底物。结果细胞加入底物后有生物发光,发光强度随底物作用时间延长而减弱。树鼩皮下也观察到发光细胞。结论 CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒能成功转染树鼩脐带间充质干细胞,转染成功的细胞用于动物模型治疗后,可进行活体成像,观察细胞在动物体内的分布。 阮光萍 刘菊芬 李自安 王金祥 吕燕波 庞荣清 潘兴华关键词:树鼩 转染 骨髓单个核细胞体外培养诱导分化为脂肪细胞 2016年 目的体外培养骨髓单个核细胞(BMNCs),并观察其成脂肪细胞分化能力。方法无菌取SD大鼠骨髓制作细胞悬液,差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,传代扩增,取3-5代细胞用于实验。流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45、CD90、CD144(VE—cadherin)和血管内皮细胞生长因子受体.2(KDR)表达;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力。结果通过差速贴壁法可获得相对单一的BMNCs,流式细胞分析表明培养的BMNCs细胞表达CD34、CD44、CD45及CD90等表面标志,但不表达CDl44和KDR;在未经诱导的情况下,培养的BMNCs能自发分化为脂肪细胞;培养BMNCs成脂肪细胞诱导后在第3、5、7d,成脂率分别为(22.4±3.8)%、(55.6±11.4)%以及(82.4±17.7)%,显著高于诱导培养第1d[(1.3±1.1)%,P〈0.011。结论骨髓单个核细胞体外培养后可以诱导分化为脂肪细胞。 周芳 王金祥 李自安 刘菊芬 白盈盈 杨建勇 朱光旭 潘兴华关键词:骨髓单个核细胞 间充质干细胞 脂肪细胞分化 骨髓源性脂肪祖细胞培养及生物学特性研究 2016年 目的体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相关基因表达方面的差异。方法无菌取1-2月龄雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓制作细胞悬液,EBM-2(含20%FBS、15μg/ml ECGs)培养基差速贴壁法培养第3次贴壁细胞,取传代至第3-5代细胞用于实验。流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45及CD90表达;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-timeq PCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ(Ppaγ)、脂肪酸结合蛋白4(Fabp4)、脂蛋白脂肪酶(Lpl)、CCAAT/增强子结合蛋白α(cebpa)、葡萄糖转运蛋白4(Slc2a4)及前脂肪细胞因子1(preadl)mRNA表达水平。结果传代接种培养24h后,BMSCs形态上呈宽大、扁平状,而BMAPs大部呈长三角状;接种48h后,BMSCs排列更为有序,而BMAPs多交织成网状。BMAP表达CD34、CD44、CD45及CD90,BMSC表达CD44及CD90,未检测到CD34和CD45表达。诱导培养后第4d,BMAPs成脂率显著高于BMSCs(P〈0.01);到第8d。BMAPs成脂率为(87.2±1L67)%,BMSCs成脂率为(18.5±10.2)%,差异具有统计学意义(P〈0.01)。诱导分化后第4、8d,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4mRNA在BMAPs表达水平均显著高于BMSCs(P〈0.01)。结论本实验获得了1种具有干细胞的生物学特性,高表达脂肪分化相关的特异性基因,可高效均质性地分化为脂肪细胞的BMAPs。 朱光旭 王金祥 周芳 李自安 刘菊芬 阮光萍 白盈盈 潘兴华关键词:骨髓 脂肪细胞 树鼩急性放射损伤模型的建立 被引量:1 2016年 目的建立树鼩急性放射损伤模型。方法将树鼩32只随机分为对照组(16只)和照射组(16只),照射组给予X射线全身一次性4 Gy照射。分别在照射后7、14、21和28 d,检测两组血象、血生化指标,并于照射后第2 w,处死树鼩做病理检查。结果照射组经4 Gy射线照射后,总死亡率为50%,对照组无树鼩死亡;照射后照射组白细胞计数(WBC)、淋巴细胞绝对值(LYM)先降低后升高;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血小板计数(PLT)、血红蛋白(HGB)与对照组相比先降低后升高,之后又降低;血清尿素(BUN)、肌酐(CREA)含量与对照组相比先升高后降低,之后又升高。照射组肺、肝、肾、胃、脾及小肠等重要脏器病理改变明显。结论成功地建立了树鼩急性放射损伤模型。 王强 王永刚 马洪磊 李自安 杨建勇 朱慧 朱向情 何洁 潘兴华 庞荣清关键词:树鼩 急性放射损伤