李靓
- 作品数：9 被引量：4H指数：1
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- MMF维持治疗ANCA相关性血管炎肾损害的疗效观察
- 目的： 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies associated vasculitis,AAV)是一种累及全身多个系统的自身免疫性疾病，累及肾...
- 李靓
- 关键词：吗替麦考酚酯环磷酰胺糖皮质激素
- 依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用
- 2016年
- 目的:观察依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用及其机制。方法:采用脂质体瞬时转染的方法将野生型hERG(WT-hERG)、突变型Y652A-hERG和F656C-hERG分别转染人胚胎肾细胞HEK-293,应用全细胞膜片钳技术记录依托咪酯对转染后HEK-293细胞表达的hERG钾通道电流的抑制作用以及对激活曲线和失活曲线的影响。结果:依托咪酯可浓度依赖性地抑制WT-hERG转染的HEK-293细胞钾通道电流,其半数最大抑制浓度为(6.41±2.43)μmol/L,对激活曲线和失活曲线无明显影响。与WT-hERG转染的HEK-293细胞相比,依托咪酯对突变体Y652A-hERG及F656C-hERG转染的HEK-293细胞内钾通道电流的抑制作用减弱。结论:F656C可能是依托咪酯抑制hERG钾通道的重要靶点。
- 韩圣娜刘备孔岚李靓冯馨张卫张莉蓉
- 关键词：依托咪酯HERG钾通道全细胞膜片钳HEK-293细胞
- 甘蓝型油菜二酰甘油酰基转移酶基因微藻真核表达载体的构建
- 2012年
- 目的:构建二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的微藻真核表达载体。方法:采用RT-PCR从甘蓝型油菜中扩增得到DGAT1和DGAT22个基因cDNA编码区序列,分别连接到载体pMD18-TSimple上,经测序及与已知的DGAT1和DGAT2序列比对,将鉴定正确的基因用于微藻真核表达载体pSV40DGAT1/CaMVBar和pSV40DGAT2/CaMVBar的构建。结果:克隆到的甘蓝型油菜DGAT1和DGAT22个基因长度分别为1512和1026bp,同源性分别为99%和98%,构建了微藻真核表达载体pSV40DGAT1/CaMVBar和pSV40DGAT2/CaMVBar。结论:2个微藻真核表达载体构建成功。
- 张楠楠潘卫东郑国庭李靓崔玉琳秦松薛乐勋
- 关键词：甘蓝型油菜微藻真核表达载体
- 杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHHcDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报告基因MEL1。结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白。
- 柴丹丹李庆华阎赟梦毛丽红李靓朱立强薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体自激活杜氏盐藻
- 杜氏盐藻鞭毛相关蛋白cDNA片段的克隆及在鞭毛重吸收过程中的表达
- 2011年
- 目的:克隆杜氏盐藻鞭毛相关蛋白(FAP)的cDNA片段并探讨其功能。方法:分析莱茵衣藻等生物的FAP同源蛋白的氨基酸序列保守区域,设计简并引物。提取盐藻总RNA进行RT-PCR。根据得到的序列设计3’RACE引物,巢式PCR扩增该cDNA的3’端序列。秋水仙碱处理对数生长期的盐藻细胞,使细胞停留在分裂中期,并诱导鞭毛缩短,半定量PCR检测FAP基因的表达情况。结果:RT-PCR和3’RACE分别得到长1535bp和782bp的cDNA片段,拼接后总长2141bp,编码541个氨基酸。序列比对发现与莱茵衣藻的FAP(88%)、团藻CDC48(89%)氨基酸序列均有较高的同源性。秋水仙碱处理后盐藻细胞FAPmRNA表达量高于未处理对照组(F组间=43.192,P<0.001;F时间=2.659,P=0.043;F交互=594.419,P<0.001)。结论:成功获得杜氏盐藻FAP的cDNA片段,该基因在秋水仙碱诱导的鞭毛重吸收过程中表达量增高。
- 李靓石科李俊平柴丹丹薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻秋水仙碱
- 杜氏盐藻FKBP cDNA的克隆及其在鞭毛解组装中的功能被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆杜氏盐藻FK506结合蛋白(FKBP)的cDNA片段并探讨其与鞭毛微管解组装的联系。方法:提取杜氏盐藻总RNA,根据已知盐藻FKBPcDNA3’端序列,用5’RACE方法扩增该cDNA的5’端序列,拼接得到全长并对其序列进行分析。秋水仙碱处理对数生长期杜氏盐藻,处理0、20、40、60、80、100、120、140和160min后采用实时荧光定量PCR检测FKBPmRNA的表达情况。结果:经5’RACE得到681bp的FKBPcDNA片段,拼接后得到的cDNA全长1075bp,序列分析显示其开放阅读框为762bp,编码253个氨基酸;经BLAST比对,其氨基酸序列具有FKBP家族特有的功能结构域,与莱茵衣藻、团藻、小球藻、大麦及水稻的同源性分别为61%、54%、47%、48%和51%。杜氏盐藻细胞FKBPmRNA表达量在秋水仙碱处理后20～40min明显升高,而在40～100min时逐渐下降,但仍高于对照组(F组间=32.580,P<0.001;F时间=5.543,P=0.001;F交互=237.306,P<0.001)。结论:得到了杜氏盐藻的FKBPcDNA全长序列;FKBP参与了杜氏盐藻微管解组装过程,可能参与了细胞通过鞭毛对外界应激反应的应答。
- 许芳石科李靓张楠楠薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻鞭毛
- 杜氏盐藻FLA8基因全长的克隆及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:获得FLA8基因cDNA序列。方法:根据衣藻、小球藻等驱动蛋白-2亚基的氨基酸高度保守序列GYNGTIF、NEDPKDA设计一对简并引物,采用RT-PCR及3’RACE和5’RACE的方法扩增杜氏盐藻FLA8基因的全长。结果:克隆得到的杜氏盐藻FLA8基因cDNA全长序列为2612bp,序列分析显示其包括90bp的5’UTR、167bp的3’UTR以及2355bp的开放阅读框,其编码784个氨基酸残基,蛋白质的理论等电点为6.65,相对分子质量为85097。氨基酸序列同源性分析显示其与其他物种有较高的同源性:团藻(98%)、衣藻(99%)、小球藻(92%)。结论:得到杜氏盐藻驱动蛋白-2亚基FLA8的基因全长。
- 李俊平刘岷毛丽红石科李靓许尧薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- 一种与杜氏盐藻FLA8相互作用新蛋白的筛选及功能初探
- 背景:鞭毛/纤毛是细胞表面的突起物,在生物进化的过程中逐渐成为专门的细胞器,在细胞的运动、感知外界环境变化及信号向细胞内的传递过程中担任重要角色,纤毛的异常会导致多囊肾疾病、肥胖症、糖尿病、癌症等人类疾病。
鞭毛内...
- 李靓
- 关键词：杜氏盐藻基因克隆原核表达
- 与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的新蛋白的酵母双杂交筛选
- 2013年
- 目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白。方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Westernblot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达。通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白。转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白。结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白。
- 李靓崔柳青王瑞莉毛丽红韩康柴丹丹薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交杜氏盐藻
