汤贝贝
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日粮中添加不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织细胞结构的影响被引量：1
- 2013年
- 通过在日粮中添加亚硒酸钠,研究不同水平无机硒对公鸡睾丸组织细胞结构的影响。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只鸡。对照组饲以基础日粮;硒处理组分别在基础日粮中添加0.5、1和2 mg/kg的亚硒酸钠。H-E染色的结果表明:0.5 mg/kg组公鸡睾丸发育最好,各级生精细胞数量最多;1 mg/kg组睾丸各级生精细胞较多,但细胞间存在明显间隙,成熟精子较少;而2 mg/kg组睾丸组织结构已经发生一定程度的损伤,各级精细胞数量都较少。试验说明,日粮添加适宜浓度的硒可促进公鸡睾丸的发育,而较高的硒添加量会使睾丸发育不良。
- 赵辉姚晓磊石磊程彩虹汤贝贝李彦霖张春香任有蛇
- 关键词：亚硒酸钠公鸡睾丸繁殖
- 脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制的研究
- [目的]探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据.[方法]采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonicstem cell,ESC)、原始生殖细胞...
- 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：RNA-SEQ雄性生殖细胞视黄酸脂代谢
- 鸡蛋开窗法对嵌合体鸡制备效率的影响
- 2015年
- 将受体种蛋分为3组,分别经换壳法、钝端开窗法和赤道面开窗后,比较3种开窗方法对孵化率的影响;分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后用线性化的质粒p EGFP-N1转染鸡ESCs,比较显微注射时3种不同的处理方法对孵化率的影响;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:赤道面开窗法的孵化率显著高于换壳法和钝端开窗法(P<0.01);开窗后,显微注射经转染的ESCs组孵化率显著低于其他2组(P<0.01);PCR检测结果显示,有四只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中两只鸡的性腺发生EGFP基因的嵌合。表明赤道面开窗后,对受体鸡胚下腔显微注射经转染的ESCs可以生产嵌合体鸡,产生嵌合体鸡的效率为4.17%。
- 王颖洁张文慧左其生李东张蕾汤贝贝连超肖天荣张亚妮李碧春
- 关键词：开窗法显微注射
- 不同水平的亚硒酸钠对公鸡组织硒沉积及血液抗氧化能力的影响被引量：6
- 2013年
- 试验通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒在公鸡组织中的沉积和对血液抗氧化能力的影响,为亚硒酸钠在鸡养殖业中的应用提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1、2 mg/kg的亚硒酸钠。试验结束时,采集肝脏、肾脏、心、肺、脾、睾丸以及血液,测定硒含量,并分析血液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)等。结果表明:组织和血液中硒含量随日粮硒含量的增加而升高,除心肌组织以外,各组之间差异显著(P<0.05);血液中的SOD、T-AOC活性随着日粮硒含量的增加而逐渐增加,且各组之间差异显著(P<0.05);适量的硒元素可以提高GSH-Px的活性,但过量的硒元素又会增加脂质过氧化反应,造成MDA含量升高,从而对组织细胞造成不良影响。结果提示:适量的硒可以提高鸡组织和血液中的硒含量,也可以提高血液的抗氧化能力,且提倡适宜的浓度为0.5 mg/kg。
- 姚晓磊汤贝贝杜亚丽刘雪雪李彦霖蔡俊国石磊
- 关键词：亚硒酸钠公鸡硒含量抗氧化酶活性
- 蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控被引量：1
- 2016年
- 【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相较于对照组细胞增殖缓
- 李东汤贝贝王颖洁纪艳芹王飞路镇宇王曼张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞雄性生殖细胞
- 5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响被引量：2
- 2015年
- 旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。
- 张亚妮王颖洁左其生李东张蕾汤贝贝连超毕瑜林张文慧李碧春
- 关键词：NANOG基因启动子TSA
- 性激素促进鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化被引量：1
- 2016年
- 试验分别探讨了睾酮和FSH诱导鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先筛选睾酮和卵泡刺激素(FSH)的适宜诱导浓度,在RA和支持细胞的诱导基础上分别添加适宜浓度的睾酮和FSH对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果显示:睾酮和FSH的适宜诱导浓度分别为15 ng/m L和25 ng/m L,单独使用睾酮和FSH诱导均未出现类SSCs样细胞;二者联合支持细胞和RA诱导,诱导2 d出现类胚体,随后类胚体体积逐渐变大,诱导12 d类胚体解体出现类SSC样细胞;实时荧光定量PCR结果显示,睾酮和FSH分别与支持细胞和RA共同诱导组中,Stra8表达量持续上调,integrinβ1、Dazl表达量显著上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下降趋势;睾酮的多因素诱导组中,Dazl的表达量明显高于RA和支持细胞诱导组;而FSH的多因素诱导组中Stra8的表达量相对于RA和支持细胞诱导组也显著升高。结果表明睾酮和FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但可以促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。
- 张文慧蒋一秀王颖洁左其生李东连超汤贝贝张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化睾酮卵泡刺激素
- 脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制被引量：5
- 2015年
- 【目的】探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据。【方法】采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、原始生殖细胞(primitive germ cells,PGC)和精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC),提取细胞总RNA。利用RNA-seq高通量分析方法对这三种细胞进行转录组水平测序,进行GO(Gene ontology)分析和KEGG通路富集,寻找脂代谢相关基因以及信号通路;并利用脂代谢--视黄醇代谢通路终产物视黄酸(retinoic acid,RA)以及抑制剂苯磺酰异羟肟酸(piloty’s acid)在体外诱导ESC向雄性生殖细胞分化和体外鸡胚注射后孵化,q RT-PCR(quantitative real time PCR)检测视黄醇代谢通路上差异基因的表达变化,与RNA-seq结果进行比较分析同时检测雄性生殖细胞标记基因的变化情况。【结果】GO功能显著性富集和Pathway显著性富集分析结果发现:在ESC向SSC分化过程中共存在328个基因持续参与脂代谢调控,富集到27条脂代谢通路中,包括视黄醇代谢、初级胆汁酸的合成、甾类激素的生物合成、脂肪酸代谢、甘油酯代谢以及类固醇的生物合成等通路。在视黄醇代谢通路中ADH5在PGC中特异表达,ALDH1A1在整个发育过程中持续上调,ADH5和ALDH1A1在细胞中参与视黄酸的合成;CYP26b1在整个发育过程中持续上调,参与视黄酸的降解过程;RA体外诱导ESC向SSC方向诱导试验结果表明ADH5、ALDH1A1和CYP26b1家族基因在体外RA诱导过程中变化与体内分化过程一致,RA诱导组产生的SSC样细胞显著高于控制组和Piloty’s Acid+RA组。鸡胚注射抑制剂试验结果表明视黄醇通路被抑制后孵化至18d后SSC细胞表面特异标记基因integrinα6和integrinβ1的表达水平显著的低于正常的孵化组(CON)和阴性对照组(BLANK)【结论】脂代谢--视黄醇代谢通路在家鸡雄性生殖细胞的分化过程中
- 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：RNA-SEQ雄性生殖细胞视黄酸脂代谢
- pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
- 2014年
- 本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80%BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20%的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cES:s,添加10μmol·L^(-1)维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cES:s,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平。结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP—hTERT转染的DF-1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP—hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P>0.05)。综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80%BRL-CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。
- 黄晓梅张蕾左其生施青青李东汤贝贝张亚妮宋九州李碧春
- 关键词：HTERT基因鸡胚胎干细胞
- 菌糠在畜牧业生产中应用效果及存在的问题被引量：10
- 2012年
- 菌糠作为一种新型的饲料资源,在我国具有很好的推广前景,本文阐述了菌糠的资源现状、营养价值、加工工艺和应用效果及存在的问题等。
- 李彦霖蔡俊国汤贝贝李建慧
- 关键词：菌糠营养价值安全性
