潘少坤
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 基于CHD基因序列分析的帝企鹅性别鉴定研究被引量：5
- 2010年
- [目的]分析帝企鹅(Aptenodytes forsteri)CHD基因序列,以鉴定性别。[方法]采用苯酚∶氯仿抽提法提取6只未知性别的帝企鹅血液中的基因组DNA,运用P2/P8引物扩增CHD基因片段,将PCR产物克隆到T-Vector,利用NCBI的Blast程序,以短趾鹰(Circaetus gal-licus)同源序列为比对参照,将帝企鹅CHD基因片段序列与GenBank中的基因片段序列进行同源性比较分析,鉴定帝企鹅的性别。[结果]测序结果表明,CHD-Z和CHD-W基因的PCR产物大小分别为378、387 bp,雌雄结果并不明显,不易区分开来。Blast比对结果表明,帝企鹅LD、EK、ZF为雄性,帝企鹅DG、YA、YY为雌性。[结论]结合PCR扩增和测序分析CHD基因,是单态性鸟类性别鉴定的有效和准确的方法。
- 沈玮潘少坤罗红梅刘伟朱标曹祥荣
- 关键词：帝企鹅CHD基因测序性别鉴定
- 原核表达系统pET28a(+)中抗CD20微抗体的表达
- D20 单克隆抗体可用于临床治疗非霍奇金淋巴瘤、类风湿性关节炎及系统性红斑狼疮等疾病.本研究根据人源化抗CD2O 抗体cDNA 序列,人工合成其抗体的轻链全长cDNA 和重链全长cDNA,以轻链全长cDNA 为模板扩增V...
- 曹祥荣潘少坤李东霞沈玮
- 原核表达系统pET28a(＋)中抗CD20微抗体的构建和表达
- 2012年
- 目的:改造Rituximab,构建包含VL、VH和CH3的抗CD20微抗体minibody,并探索诱导其可溶性表达的最佳方法.方法:首先通过overlap PCR将Rituximab的VL和VH通过Linker连接在一起,成为单链抗体ScFv,再将ScFv和人源IgG1 CH3通过人源IgG1铰链区连成minibody的cDNA.将其克隆至表达载体pET28a(+)中,并在大肠杆菌中用IPTG诱导表达.结果:SDS-PAGE和Western blot结果表明,抗CD20的微抗体基因表达产物分子量约41.88 kDa,在20℃、1.0 mmol/L IPTG诱导24 h时minibody的可溶性表达量最大,同时还有包涵体形式的蛋白.可溶性抗体蛋白通过镍柱纯化,纯度达到90.25%,包涵体经过变、复性获得了高纯度的抗体蛋白.重组蛋白minibody可特异性地被兔抗人IgG1单克隆抗体识别,并且可特异性结合靶抗原CD20.结论:抗CD20微抗体minibody基因在此原核表达系统中成功表达,为其生物学功能和更好地针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础.
- 李东霞杨振潘少坤周楠楠宋菲曹祥荣
- 关键词：CD20原核表达大肠杆菌
- 抗CD20微抗体的改造和表达
- Rituximab是人鼠嵌合的抗CD20单克隆抗体,在治疗非霍奇金淋巴瘤和类风湿性关节炎与系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病具有良好的效果。为获得临床上免疫反应较为平和,且在血液循环中半衰期较长的抗体,本研究用基因工程方法改...
- 潘少坤
- 关键词：酵母表达系统原核表达系统
- 文献传递
- 重组hIL-24原核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2009年
- 采用基因克隆的方法构建人白细胞介素(hIL-24)基因的原核表达载体pET-28a(+)-hIL24,在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白rhIL-24,SDS-PAGE和Western blotting分析蛋白表达,探讨其最佳诱导表达条件。结果表明:hIL-24基因的表达产物分子质量约25 ku,且以包涵体的形式存在于超声裂解后的沉淀中,重组蛋白rhIL-24可特异性被鼠抗人IL-24单克隆抗体识别。当IPTG终浓度为0.5 mmol.L-1、37℃诱导8 h时,其表达量最高。hIL-24基因在该原核表达系统中的成功表达,为其生物学功能的研究奠定了基础。
- 胡小翠孙丽君潘少坤罗红梅方琳沈玮曹祥荣
- 关键词：大肠杆菌原核表达载体
