牟少凤
- 作品数：7 被引量：28H指数：3
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 增强型表达载体调控TK基因靶向杀伤鼻咽癌的体内外实验研究
- 目的探讨经改良构建的增强型表达载体hTERTp/CMV/TK/egfp/pGl3调控TK基因靶向杀伤鼻咽癌细胞及裸鼠移植瘤的效应。方法将改良构建后的增强型载体hTERTp/CMV/TK/egfp/pGl3及单启动子载体h...
- 文忠申聪香牟少凤关小芳赖肖芬于超生
- hTERT及CMV双调控TK基因靶向杀灭鼻咽癌细胞的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控表达载体调控TK基因靶向杀灭鼻咽癌细胞的效应。方法将双调控增强型载体及hTERT单启动子载体(作为对照组)分别转染两种端粒酶(+)的人鼻咽癌5-8F细胞及对照组人乳腺癌MCF-7细胞及端粒酶(-)的正常人血管内皮ECV细胞,StretchPCR法验证5-8F细胞、MCF-7细胞及ECV细胞中端粒酶活性,荧光显微镜下观察TK基因绿色荧光蛋白表达差异,MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果。结果①Stretch PCR法验证人鼻咽癌细胞5-8F、人乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性呈阳性,人血管内皮ECV细胞端粒酶活性呈阴性。②增强型表达载体转染上述两种端粒酶(+)肿瘤细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,单启动子亦有较强的荧光表达,但比增强型表达载体要弱,而ECV细胞几乎无绿色荧光。③加入GCV后,增强型表达载体对两种端粒酶(+)肿瘤细胞体外增殖均有明显抑制作用,且均高于单启动子组、空载体组及空白对照组,而增强型表达载体转染ECV细胞体外增殖无明显抑制作用。结论以hTERT启动子及CMV增强子双调控TK基因的表达载体能够靶向杀灭鼻咽癌细胞,且作用明显强于单启动子载体组。这种新型高效、靶向增强型载体有可能成为一种鼻咽癌临床靶向基因治疗的新策略。
- 申聪香文忠关小芳牟少凤
- 关键词：鼻咽癌端粒酶
- 端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)调控胸腺嘧啶脱氧核苷激酶基因(TK)靶向性杀伤鼻咽癌移植瘤的实验研究
- 目的:
探讨人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦（HSV-tk/GCV）系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用及其安全性评价。
方法:
1.材料
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- 牟少凤
- 关键词：鼻咽癌巨细胞病毒胸腺嘧啶
- 文献传递
- 增强型胸苷激酶基因表达载体的构建及其杀伤鼻咽癌细胞的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨改良构建人端粒酶催化亚单位（human telomerase catalytic subunit promoter,hTERT）启动子及巨细胞病毒原核（cytomegalovirus,CMV）增强子联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（thymidine kinase,TK）的增强型表达载体在鼻咽癌细胞体内外实验中的靶向杀伤效应及体内应用的安全性评价.方法 以pGL3-basic空载体为模板,分别酶切连接hTERT启动子、CMV增强子及TK基因构建靶向性增强型表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTERTp-CMV（以hTERT单启动子调控TK基因表达载体作为对照组）,转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞及用做对照组的人乳腺癌MCF-7细胞和端粒酶阴性的正常人脐静脉内皮细胞ECV-304,分别采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达差异、实时荧光定量PCR检测转染后TK基因mRNA表达差异、TeloChaser法检测上述细胞中的端粒酶活性、四甲基偶氮唑蓝（MTt）联合Boyden小室实验分析增强型载体对鼻咽癌细胞增殖及侵袭抑制的作用.将鼻咽癌细胞接种于裸鼠腋部皮下,构建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,研究增强型载体对裸鼠移植瘤的体内生长抑制作用及对全身的毒副反应情况.结果 ①成功改良构建hTERT/CMV双调控TK基因的增强型表达载体.②转染增强型载体组及单启动子载体组的鼻咽癌5-8F细胞均有绿色荧光表达,但前者荧光数量及强度均较后者强,对照组端粒酶阳性的乳腺癌细胞也有很强的荧光表达,而ECV-304细胞几乎无绿色荧光表达.实时荧光定量PCR结果显示,增强型载体组的TK基因mRNA表达量是单启动子组的2-5倍.③ TeloChaser法结果显示,两种肿瘤细胞（5-8F细胞、MCF-7细胞）端粒酶活性均为阳性,正常对照ECV-304细胞端粒酶活性为阴性.④MTT联合Boyden小室侵袭实验结果显示,增强型表达载体对5-8F细胞体外增殖及侵袭力均有明显抑制作用.相对细胞存活率为37.0%,较对照组明显低（P〈0.01）.⑤体内实验结
- 申聪香文忠钱宇虹关小芳牟少凤
- 关键词：胸苷激酶鼻咽肿瘤巨细胞病毒
- hTERT启动子调控TK基因靶向性杀伤鼻咽癌移植瘤的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的研究人端粒酶反转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用。方法采用培养细胞移植法,将人鼻咽癌细胞系C666-1接种于裸鼠腋部皮下,建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型。将40只裸鼠随机分为5组:hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组、CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组、HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组,每组8只。采用脂质体介导,进行瘤内直接注射,同时经腹腔给予GCV治疗,观察各组裸鼠生存状况及肿瘤相对体积、抑瘤率,并进行荷瘤裸鼠肝肾组织的常规病理检查。结果成功构建了C666-1裸鼠皮下移植瘤动物模型,hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组移植瘤被明显抑制,抑瘤率达到45.51%,与HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组(抑瘤率分别为5.52%、14.31%、0.03%)比较有显著性差异(P<0.01),肝肾病理检查发现,该组裸鼠肝肾均无明显病理学变化。CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组的抑瘤率亦达到51.56%,但病理检查发现裸鼠出现肝肾毒性。结论hTERT启动子调控TK基因靶向治疗系统能够在体内特异性杀伤鼻咽癌移植瘤,而无明显全身毒副作用,是一种安全、有效的肿瘤靶向基因治疗系统,将为鼻咽癌临床基因治疗开辟新领域。
- 牟少凤文忠郭梦和谢民强关小芳申聪香
- 关键词：肿瘤移植HSV-TK基因
- 人鼻咽癌细胞株中类肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定被引量：21
- 2008年
- 目的检测CD133在人鼻咽癌细胞株SUNE中的表达以及CD133+肿瘤细胞的体外增殖、分化情况,并对其进行类肿瘤干细胞的鉴定。方法采用免疫荧光细胞化学技术及流式细胞仪检测鼻咽癌细胞株SUNE中CD133的表达情况以及CD133+细胞体外分化能力;免疫磁珠分选技术纯化CD133+肿瘤细胞;MTT法检测CD133+细胞的体外增殖能力,并将其与CD133-及未分选细胞进行比较。结果鼻咽癌细胞株SUNE中有0.35%的微量细胞呈CD133+表达;免疫磁珠富集的CD133+肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,具有很强的自我更新和繁殖能力,且在3、5、7 d的紫外吸光度(A)值分别为0.317±0.007、0.370±0.002、0.558±0.004,均高于相同条件下未分选细胞和CD133-细胞(P<0.05);CD133+细胞在含血清培养基中的比例逐日下降,至培养的第12天,由第1天的89.67%下降至0.37%。结论CD133可作为鼻咽癌类干细胞的标志之一。鼻咽癌细胞株SUNE中存在类肿瘤干细胞,并具有自我更新和分化能力。
- 关小芳文忠申聪香牟少凤张宏征谢民强郭梦和
- 关键词：肿瘤干细胞细胞培养技术免疫磁珠分选CD133
- 鼻咽癌细胞中增强型表达载体调控TK基因与端粒酶活性关系的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因核心启动子和原核增强子CMV联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统对TK基因的活性改变及与鼻咽癌细胞中端粒酶活性的关系。方法:将改良构建后的增强型载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer及单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp(作为对照组)分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞株及对照组细胞人乳腺癌MCF-7细胞(端粒酶阳性)及正常人血管内皮ECV细胞(端粒酶阴性),采用荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,TRAP银染法检测肿瘤细胞转染前后端粒酶活性改变并分析TK基因表达与端粒酶活性之间的关系。结果:①增强型表达载体转染鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,比单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及ECV细胞绿色荧光要强。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值亦较对照组明显增高。②转染增强型载体(加GCV)后TRAP银染法检测鼻咽癌5-8F细胞端粒酶活性较转染前明显降低,但转染正常对照细胞后活性无变化。③加入GCV后,pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer对鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞体外增殖均有明显抑制作用,高于单启动子组pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及空载体组pGL3-basic-EG-FP3及空白对照组,而pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer转染ECV细胞无明显抑制作用。结论:hTERT启动子及CMV增强子可明显增强TK基因活性,并可导致该种肿瘤细胞端粒酶活性降低,靶向杀灭该种肿瘤细胞,但这种由TK基因介导的端粒酶活性抑制机制尚不清楚。
- 申聪香文忠钱宇虹牟少凤关小芳
- 关键词：鼻咽肿瘤TK基因端粒酶
