王云端
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技厅基金南京农业大学SRT基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学更多>>
- 自然土壤中苯酚降解菌的分离和系统发育分析被引量：4
- 2007年
- 采用富集培养的方法,从未受苯酚污染的自然土壤中分离得到5株能以苯酚为唯一碳源生长的细菌.根据生理生化特性和系统发育分析对它们进行了初步鉴定,菌株PHD-2为Ralstonia sp.,菌株PHD-4为Acinetobacter sp.,菌株PHD-5为Microbacterium sp.,菌株PHD-1和PHD-3均为Pseudomonas sp.,16S rRNA基因序列的同源性比较和系统发育分析表明自然土壤中的苯酚降解菌具有丰富的多样性.
- 王云端董小军王茜洪青蒋新李顺鹏
- 关键词：自然土壤苯酚降解菌系统发育分析
- 中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1耐盐相关DNA片段的克隆被引量：6
- 2006年
- 通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom onassp.BYS-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.
- 洪青徐剑宏王云端武俊张晓舟李顺鹏
- 关键词：中度嗜盐菌克隆
- 呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建被引量：3
- 2006年
- 用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonassp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coliDH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含Sphingomonassp.CDS-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonassp.CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显。通过NotⅠ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究Sphingomonassp.CDS-1的生态学行为奠定了基础。
- 徐剑宏武俊洪青张志琳李顺鹏王云端
- 关键词：SPHINGOMONAS呋喃丹降解双标记基因工程菌
