王凯
- 作品数：13 被引量：67H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猕猴-兔重构胚的线粒体定量分析
- 在同种和近缘异种体细胞克隆中,线粒体主要来源于受体卵母细胞。然而在远缘异种克隆中,由于核供体和胞质受体来源于两个遗传上关系较远的种或属,两种不同来源的线粒体DNA(mtDNA)在重构胚早期发育中的动态变化还不清楚。实时荧...
- 杨彩侠寇朝辉王凯姜岩毛文伟孙青原盛慧珍陈大元
- 文献传递
- 影响猪体细胞核移植重构胚体外发育的若干因素被引量：20
- 2003年
- 以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56.7%,发育至桑椹胚达11.7%、孵化囊胚率为6.7%,显著高于成纤维细胞组成的重构胚(p<0.05)。我们研究了卵母细胞的采集方法,激活方法和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至GO或G1期,抽吸法/解剖法采集卵母细胞,体外培养33或44 h,将卵丘细胞置于去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6-DMAP激活处理,体外培养6天,结果表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素(CB)并不影响重构胚的发育(以卵龄44h的卵母细胞为受体);而以电脉冲结合6-DMAP激活处理能提高重构胚发育能力(以卵龄33 h的卵母细胞为受体)(p<0.05)。本研究显示,以电脉冲结合6-DMAP激活卵丘细胞重构胚。
- 张德福王英陈茵王凯KarlSchellanderLinCailu
- 关键词：体细胞核移植重构胚体外发育
- 猪体细胞核移植重构胚的体外发育研究(英文)
- ＜正＞ 以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56.7%,发育至桑椹胚达11.7%、囊胚率为6.7%,显著高于成纤维细胞重构胚（p＜0.05）。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体...
- 张德福王英陈茵王凯Karl SchellandeTLin Cailu
- 文献传递
- 体细胞起源的人胚胎干细胞被引量：6
- 2003年
- 根据治疗性克隆假设 ,可以通过体细胞核移植技术获得与病人具同样基因型的细胞或组织 ,这样起源的细胞或组织植回病人将不会引起免疫排斥反应。本研究将 5岁、42岁、52岁和60岁 4个不同年龄的人体细胞核植入去核的兔卵母细胞中重新启动 ,发育至囊胚 ,并分离人胚胎干细胞。研究结果提示 ,年龄不影响体细胞被重新启动的效率。经过核型分析 ,同源染色体分析 ,原位杂交 ,PCR和免疫组化染色等多种鉴定 ,ntES细胞具有人染色体。ntES细胞可以长期增殖并保持不分化状态 ,也可以形成类胚体并分化出包括神经和肌肉在内的多种细胞类型。由类胚体诱导生成的混合细胞群体表达所有三个胚层 (外、中、内胚层 )细胞类型标记 ,说明ntES细胞具有分化成所有三个胚层的潜力。因此 。
- 陈莹何志旭刘爱莲王凯毛文伟褚建新卢勇方贞付施英唐杨庆章陈大元王敏康李劲松黄绍良孔祥银史耀洲王志强夏家辉龙志高薛志刚丁文祥盛慧珍
- 关键词：体细胞人胚胎干细胞核移植体细胞核移植治疗性克隆
- 体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响被引量：6
- 2006年
- 本研究系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40-44h的猪卵母细胞去核后,将经血清饥饿(0．5%FBs)培养2-9d、0．1mg/L Aphidicolin (APD)培养+0．5%FBS培养2-9d或一般培养法(10%FBS)培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞,直接注射到去核的卵母细胞质中,或注射到卵周隙中。再经电融合(100V/mm,30μs,电脉冲1次)构建重构胚。重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6- DMAP激活处理,体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg/L APD+0．5%FBS培养处理后的重组胚卵裂率,均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P＜0．01)。卵丘细胞、颗粒细胞经0．1mg/L APD+0．5%FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞(P＜0．05)。以猪颗粒细胞为核供体时,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P＜0．05),但囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P＞0．05)；以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时,各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。这些结果表明：(1)猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；(2)0．1mg/L APD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果,血清饥饿培养则无明显效果；(3)猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞．核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚,但前者的效果略优于后者,且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法,但两者的总体效率相近。
- 张德福刘东汤琳琳王英陈茵王凯Karl SchellanderLIN Cai Lu
- 关键词：体细胞核移植细胞周期
- 猪体细胞核移植重构胚的体外发育(英文)被引量：5
- 2002年
- 以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚 ,卵裂率达到 5 6.7% ,发育至桑椹胚率达到1 1 .7% ,囊胚率为 6.7% ,显著高于成纤维细胞重构胚 (P <0 .0 5 )。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至G0 G1 期 ,抽吸法 解剖法采集卵母细胞 ,体外培养 3 3～ 44h ,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中 ,重构胚以钙离子载体A2 3 81 7或电脉冲结合 6 DMAP激活处理 ,体外培养 6d。研究表明 ,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素 (CB)、激活程序并不影响重构胚的发育 (以卵龄 44h的卵母细胞为受体 ) ;而以电脉冲结合 6 DMAP激活处理能提高重构胚发育能力 (以卵龄 3 3h的卵母细胞为受体 ) (P <0 .0 5 )。本研究显示 ,以电脉冲结合 6 DMAP激活卵丘细胞重构胚 。
- 张德福王英陈茵陈茵王凯LIN Cai-lu
- 关键词：体细胞核移植重构胚体外发育
- 不同供体细胞及其处理对猪核移植重构胚体外发育的影响被引量：24
- 2007年
- 系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40～44h的猪卵母细胞去核后，将经血清饥饿（0．5％FBS）培养2～9天、0．1mg／L Aphidicolin（APD）培养＋0．5％FBS培养2～9天或一般培养法（10％FBS）培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞，直接注射到去核的卵母细胞质中，或注射到卵周隙中，再经电融合（100V／mm，30μs，电脉冲1次）构建重构胚．重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6．DMAP激活处理，体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS培养处理后的重组胚卵裂率，均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞（P〈0．01）。卵丘细胞、颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞（P〈0．05）。以猪颗粒细胞为核供体时，电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法（P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞，其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异（P〉0．05）；以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时，各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。这些结果表明：（1）猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；（2）0．1mg／LAPD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果，血清饥饿培养则无明显效果；（3）猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；（4）电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法，但�
- 张德福刘东汤琳琳王英陈茵王凯王根林KARL SchellanderLIN Cailu
- 关键词：体细胞核移植细胞周期
- 猪体细胞核移植胚的体外发育及其影响因素
- 2002年
- 张德福王英陈茵王凯Karl SchellanderLin Cai lu
- 关键词：体外发育影响因素
- 应用电脉冲刺激激活猪卵母细胞的研究被引量：3
- 2002年
- 张德福王英陈茵王凯Karl SchellanderLin Cai lu
- 关键词：猪卵母细胞
- 猪体细胞核移植重构胚发育异常及印迹基因表达特征研究的进展
- 2006年
- 由于猪的器官极可能成为人类未来器官的供应源，猪体细胞核移殖及转基因等方面的研究已成为全球的热点。近几年来，猪体细胞核移植研究取得了一定的进展，但总体来看核移植效率还很低（1％～2％），还需要不断完善核移植程序及对一些基础问题的深入研究。本文主要对猪体细胞核移植重构胚发育异常及“印迹”基因表达特征作一综述与分析，旨在为研究者提供一些有益的启示。
- 张德福吴华莉刘东陈学进陈莹王凯
- 关键词：核移植印迹基因
