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牛腺病毒7型PCR检测方法的建立被引量：2: 2009年; 根据GenBank中牛腺病毒7型(BAdV-7)的蛋白酶基因序列,设计一对特异性的引物,扩增该序列中775 bp的片段,建立了BAdV-7的PCR检测方法。以Fukuroi株BAdV-7 DNA为模板进行特异性和敏感性试验,结果显示,该方法检测BAdV-7 DNA最小检测量为1 ng;与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)无交叉反应。方法为BAdV-7感染的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。; 王进轶刘双翼刘合义王红侯喜林; 关键词：聚合酶链反应

貉源犬瘟热病毒的分离鉴定被引量：4: 2009年; 采集大庆某貉养殖场病貉的病料,处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。病料接种Vero细胞72h后产生明显的细胞病变(CPE);病毒分离株可以被犬瘟热病毒阳性血清中和,中和效价为1∶25;分离株对氯仿、乙醚敏感,对酸和热抵抗力弱,可以凝集鸡红细胞,其凝集作用可被犬瘟热病毒阳性血清所抑制;RT-PCR检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长287bp,与预期设计的长度相同,经测序发现与MS01株的同源性为99%。结果表明,分离的病毒株为犬瘟热病毒,命名为CDV-DQ株。; 刘双翼王进轶王延涛刘合义侯喜林; 关键词：犬瘟热病毒

新城疫特异性转移因子的免疫作用研究被引量：2: 2009年; 将新城疫特异性转移因子（Newcastle disease-specific transfer factor，ND-STF）1mL单独或与La Sota弱毒疫苗一起，分别口服和注射试验鸡，然后用MTT法检测各组鸡外周血淋巴细胞转化率；用La Sota疫苗免疫鸡，同时口服或注射0．1、0．5、1mL 3种不同剂量的ND-STF，然后检测血清中新城疫病毒HI抗体效价。在使用ND-STF后第5天，试验组鸡的淋巴细胞转化率达到高峰，刺激指数（stimulation index，SI）可达1．68-1．71，对照组的SI值为1．24～1．34，试验组与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组之间差异不显著（P〉0．05）；鸡的HI抗体效价（log2 X）在免疫后第28天达到高峰，口服或注射ND-STF 3种不同剂量组HI抗体效价分别为10、9．25、10和6．3、9、8．3，使用ND-STF各组与未使用组相比较差异显著（P〈0．05），且口服的效果更好。表明ND-STF能够增强鸡的细胞免疫和体液免疫能力。; 王进轶刘双翼刘合义王红侯喜林; 关键词：新城疫特异性转移因子淋巴细胞转化

牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：16: 2009年; 为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白,western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性。以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶8000,建立了检测BCV抗体的间接ELISA方法。用该法对黑龙江一些地区采集到的256份牛血清样品进行检测,结果阳性率为65.23%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达95.31%。本研究建立的间接ELISA方法为BCV的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。; 刘合义孙留霞王进轶刘双翼王红余丽芸朴范泽侯喜林; 关键词：牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA 抗体检测

牛冠状病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：8: 2009年; 刘合义孙留霞王进轶刘双翼王红余丽芸朴范泽侯喜林; 关键词：牛冠状病毒 PCR检测方法犊牛腹泻成年牛水样腹泻

貉源细小病毒的分离鉴定被引量：8: 2009年; 从大庆某貉养殖场采集病貉的病理病料，处理后接种于犬肾细胞（MDCK），分离到8株病毒。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定试验，应用PCR方法扩增分离毒株VP2部分基因并进行序列分析。结果显示，病料接种MDcK细胞72h后产生了明显的细胞病变（CPE）；分离毒株可以被犬细小病毒阳性血清中和，中和效价为1：10^6—1：10^7；分离毒株对氯仿、乙醚不敏感，耐酸耐热，可以凝集猪红细胞，其凝集作用可被犬细小病毒阳性血清抑制；用PCR检测病毒的细胞培养液，可扩增出长531bp的片段，该片段的核苷酸序列与吉林分离的犬细小病毒株（EU310373）的同源性为99.6％。表明，分离的这8株病毒均为貉源细小病毒。; 刘双翼余丽芸侯喜林王进轶刘合义王延涛刘建奎; 关键词：细小病毒

牛冠状病毒N基因的原核表达及初步应用被引量：3: 2010年; 目的获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用。方法根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a(+)上进行原核表达,SDS-PAGE和Western blot检测;用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对部分临床样本进行检测。结果BCV-DQ株N基因全长1347bp,与GenBank已发表的6株BCV的N基因相比较,核苷酸同源性98.3%以上。构建的重组质粒pET-N能表达出一条大小约为60ku的蛋白,且能与鼠抗BCV血清发生特异性反应。用建立的ELISA方法对黑龙江不同地区送检的共256份牛血清样品进行检测,结果阳性率65.23%,与病毒中和试验的符合率达95.31%。结论BCV N基因保守性很高,并在原核表达系统中获得了高效表达,其表达产物具有良好的免疫反应原性。临床检测结果表明N蛋白可作为诊断抗原用于牛冠状病毒病的流行病学调查。; 刘合义余丽芸侯喜林孙留霞周玉龙王进轶刘双翼朴范泽; 关键词：牛冠状病毒 N基因克隆原核表达

牛腺病毒7型PCR诊断方法建立和新城疫特异性转移因子免疫作用研究: 为建立牛腺病毒7型(bovine adenovirus serotype 7, BadV-7)PCR诊断方法,将BadV-7接种至原代犊牛睾丸细胞,细胞在接毒后96h出现明显的细胞病变(cytopathic effect...; 王进轶; 关键词：PCR 新城疫特异性转移因子淋巴细胞转化率 HI抗体效价; 文献传递

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王进轶