郑建
- 作品数：29 被引量：87H指数：5
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金农业部动物疫情监测与防治项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达及抗原性研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQE30、pET32a（＋）及pGST-MOLUC,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷（isopro-pyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达,并经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和纯化HIV跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行Western blot检测,利用HIV抗原制备ELISA检测试剂盒,并分析HIV临床样本。结果成功构建了HIV包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的HIV包膜蛋白;Western blot分析结果证实表达纯化的HIV跨膜蛋白gp41（aa.538~718）、gp36（aa.533~764）以及gp41-gp36均能和HIV阳性血清反应;ELISA试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。结论获得了有生物学活性的HIV截短包膜蛋白,并可用于HIV快速检测试剂盒的研发。
- 袁作为帅光泽张君胡接力郑建
- 关键词：抗原性
- 抗2型登革病毒M蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的克隆表达2型登革病毒M蛋白,用纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备可用于胶体金快速检测试条的抗2型登革病毒M蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用登革热2型病毒全长基因重组质粒,经PCR方法扩增出prm/m基因片段,在pET-32a(+)表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用于免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6和Ⅲ3D2;相对亲和力均在105以上。Western blot显示2株mAb能特异识别重组M蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒M蛋白的2株mAb,为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。
- 张娟但妍张君蔡雪飞陈婧郑建黄爱龙
- 关键词：登革病毒M蛋白单克隆抗体生物学特性
- O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定
- 2013年
- 目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库3轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果:3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论:筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。
- 张娟吴倩彭辉何岸陈维贤黄爱龙郑建
- 关键词：单克隆抗体噬菌体随机肽库模拟肽
- 艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活性被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性。结果重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46 000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达。纯化的目的蛋白纯度可达90%,浓度为1.7 mg/ml。纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础。
- 杜茜吴志鹃蔡雪飞袁作为张君郑建
- 关键词：谷氨酸脱氢酶基因表达纯化酶活性
- 艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及酶活性测定
- 目的克隆并原核表达艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)全长基因,纯化重组蛋白并测定其酶活性浓度。方法通过PCR方法从标准株ATCC BAA-1805 DNA中扩增得到GDH基因全...
- 杜茜吴志娟张君郑建蔡雪飞
- 关键词：蛋白纯化酶活性测定
- 重庆地区幽门螺杆菌的EPIYA基序多态性与胃十二指肠疾病的关系被引量：3
- 2015年
- 目的：幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）产生的细胞毒素相关蛋白A（cytotoxin associated antigen A,Cag A）羧基末端的EPIYA序列与胃十二指肠疾病的关系一直存在争议。本研究采集大量H.pylori高感染率同时也是胃癌高发病率的中国重庆地区的病例,通过检测患者感染的H.pylori Cag A羧基末端EPIYA基序的多态性,探讨EPIYA基序与临床胃十二指肠疾病发生的潜在关系。方法：收集消化不良患者的胃黏膜标本分离培养H.pylori,提取细菌基因组DNA,PCR扩增Cag A基因的3＇端区域并分型,根据分型结果随机抽样测序确认,结合分离出H.pylori患者的病历资料,分析EPIYA类型与胃十二指肠疾病之间的关系。结果：292（97.3%）株为Cag A阳性,但Cag A阳性与胃十二指肠疾病病型无关（P〉0.5）。19例（6.51%）为不同EPIYA类型菌株混合感染,胃癌病例中混合感染出现的概率明显高于NUD者（OR=4.46,95%CI=1.17~17.03）。单一菌株感染者273株（93.49%）,其中EPIYA-ABD型254株（93.04%）,EPIYA分型和胃十二指肠疾病的临床病型之间无显著性差异。另外,基因测序标本中发现8株EPIYA-B基序的核苷酸序列存在基因突变。结论：该研究中EPIYA-ABD型占H.pylori感染者的绝大多数,但Cag A阳性和EPIYA-ABD型均与H.pylori感染引起的胃十二指肠疾病无关;然而胃癌患者中混合感染出现的概率明显高于非溃疡性胃炎患者。
- 林震田志颖朱黎黎田玲郑建杨致邦
- 关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A多态性胃十二指肠疾病
- 重组SARS-CoV核衣壳蛋白的表达纯化及其单克隆抗体的制备鉴定
- 2006年
- 目的目的表达纯化SARS冠状病毒(SARS-CoV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid N蛋白),并制备出高安全性、高特异性的针对该蛋白的单克隆抗体(McAb),为SARS的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法在不接触病原体的前提下,采用全基因合成方式分别将SARS-CoV N蛋白编码基因第1-549位碱基(N端)和第496-1269位碱基(C端)直接合成至原核表达载体pET32a(+),表达、纯化重组蛋白(分别记为N1蛋白、N2蛋白),并以纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备特异性针对N蛋白的单克隆抗体,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行配对筛选,分析其亚类,以Western blot和间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体特异性。结果成功表达并纯化SARS-CoV N1、N2蛋白,筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CoVN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,Western blot及间接免疫荧光证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoV N蛋白发生特异性反应。结论重组SARS-CoV N蛋白成功表达及纯化,并由此获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体,为SARS预防检测和发病机制研究奠定基础。
- 张娟余晓林陈维贤陶鹏唐霓黄爱龙郑建
- 关键词：SARS-COV核衣壳蛋白单克隆抗体
- 幽门螺杆菌EPIYA多态性与胃癌关系的研究进展被引量：2
- 2015年
- 胃癌是世界第二位致死性肿瘤。大量研究表明,胃癌的发生与幽门螺杆菌(Hp)合成分泌的CagA蛋白密切相关。CagA蛋白羧基末端EPIYA重复序列是酪氨酸磷酸化的主要位点,EPIYA的不同基序片段磷酸化后会引起细胞信号转导通路改变,进而影响细胞有丝分裂,引起细胞形态发生改变,最终导致胃黏膜细胞癌变。因此EPIYA基序多态性可能与胃癌发生密切相关,但目前有关这一关系的前瞻性流行病学研究结果存在争议。此文从EPIYA结构的多态性出发,对比不同方法、不同地域的研究,就EPIYA多态性与胃癌发生的关系作一综述。
- 林震郑建
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA胃癌
- HBV前S2蛋白的研究进展被引量：5
- 2008年
- 随着现代分子生物学和病毒基因工程技术的广泛应用,有关乙型肝炎病毒颗粒表面的preS2蛋白的研究己取得了较大进展。本文综述了近年来有关研究的成果,重点对preS2的基因结构、生物学功能及临床诊断意义等方面的进展进行讨论。
- 赖梅梅郑建
- 关键词：乙型肝炎病毒前S2
- 霍乱疫苗的研究现状与展望
- 2009年
- 从1883年Koch发现霍乱弧菌至今，霍乱疫苗的研究已有100多年的历史。早期的灭活霍乱弧菌全菌苗为注射用疫苗，因保护力低，不良反应大，已停止使用。目前研制的口服疫苗，主要有灭活的全菌体疫苗及减毒活疫苗，这些口服疫苗在国内外还处于大规模的试验和论证中，世界卫生组织还未正式通过使用任何一种口服霍乱疫苗。发展有效的霍乱疫苗需要新思路，采取更灵活、更切合实际和更富有针对性的预防措施。基因工程疫苗的飞速发展为研制理想霍乱疫苗提供了强有力的理论技术支持，着眼于抗原表位的肽疫苗越来越受到关注和认可。
- 张娟郑建黄爱龙
- 关键词：口服霍乱疫苗基因工程疫苗霍乱弧菌口服疫苗减毒活疫苗
