陈克力
- 作品数：20 被引量：56H指数：4
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生历史地理更多>>
- 人HCT116结肠癌细胞系中CD133^+结肠癌干细胞分离及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性。方法利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性。结果HCT116细胞系中存在CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性。结论CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相关蛋白。
- 陈克力梁后杰江恒陈建芳裴莉郑晨宏
- 关键词：HCT116结肠癌干细胞CD133
- 结肠癌HT29多细胞球的培养及其结构与生物学特性的观察
- 2010年
- 目的建立结肠癌体外三维细胞培养模型HT29多细胞球,鉴定并检测其基本生物学特性。方法琼脂糖抑制细胞贴壁、水平回旋振荡法培养HT29多细胞球;扫描电镜、HE染色、免疫组化检测多细胞球的组织病理学性质;透射电镜检测细胞超微结构;Cell counting kit-8检测药物敏感性。结果成功培养由细胞相互黏附形成的多层细胞构成的结肠癌多细胞球模型;多细胞球内细胞接触广泛而紧密,可见大量细胞连接;多细胞球局部可见腺腔样结构,细胞角蛋白表达强弱与腺腔样结构有关;多细胞球药物敏感性显性降低,在500μg/L奥沙利铂处理48h条件下,单层细胞生存分数为(9.3±2.0)%,而多细胞球则为(42.9±4.0)%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了结肠癌多细胞球模型,此模型是研究体内无血管的微小结肠癌及结肠癌无血管区的较理想模型。
- 何建明江恒陈克力黄海辉庞学利梁后杰
- 关键词：结肠癌细胞黏附耐药
- 沉默孕烷X受体增强结肠癌LS174T细胞对奥沙利铂敏感性的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察沉默孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达对结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响,初步探讨其可能机制。方法构建PXR基因的siRNA质粒表达载体,转染结肠癌LS17T细胞,并建立稳定表达细胞,用RT-PCR和Western blot方法检测特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)和多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance-asso-ciate protein 3,MRP3)表达,MTT方法检测奥沙利铂化疗敏感性。结果成功建立PXR敲低细胞克隆PXRi 1#、PXRi 2#;在PXRi 1#和PXRi 2#细胞克隆中,MRP3 mRNA及蛋白表达明显下降,SP1表达也下降;与PXRi control相比,细胞克隆PXRi 1#、PXRi 2#奥沙利铂的IC50值均显著降低[(4.83±0.22)、(4.75±0.19)vs(9.44±0.37),P<0.05]。结论 PXR表达沉默可增强结肠癌LS174T细胞对奥沙利铂化疗敏感性,这可能与PXR沉默后,SP1、MRP3表达下调相关。
- 江恒陈健陈克力李建军潘凤梁后杰
- 关键词：孕烷X受体结肠肿瘤多药耐药奥沙利铂
- ERCC5基因+25A>G多态性与晚期结直肠癌铂类药物疗效的相关性被引量：3
- 2011年
- 目的探讨切除修复交叉互补基因5(ERCC5)基因单核苷酸多态性与中国汉族晚期结直肠癌患者铂类药物疗效的相关性。方法应用PCR-LDR法检测以奥沙利铂为主化疗的105例晚期结直肠癌患者ERCC5基因位点+25A>G(rs751402)、+202C>T(rs2296147)及+372C>T(rs2296148)的多态性,分析不同基因型与疾病控制率、无进展生存期(PFS)的相关性。结果本研究人群中各多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。携带+25A等位基因(AA/AG基因型)患者经以奥沙利铂为主化疗的疾病控制率为73.5%,显著高于携带+25GG基因型患者的51.4%(χ2=5.231,P=0.022)。携带+25GG基因型患者的中位PFS为5个月,低于携带+25AG基因型患者的8个月以及+25AA基因型患者的6个月(χ2=6.916,P=0.009)。+202C>T、+372C>T位点多态性与疾病控制率、中位PFS之间均无显著差异。结论晚期结直肠癌ERCC5基因+25A>G单核苷酸多态性与奥沙利铂化疗的临床疗效相关。
- 陈建芳梁后杰邹岚蒋金妍陈克力王东廖玲
- 关键词：结直肠癌化学治疗
- 稳定干扰αv整合素表达的HT-29细胞系的建立
- 2011年
- 目的探讨逆转录病毒介导RNA干扰(RNAi)稳定抑制αv整合素表达的有效性,并建立稳定抑制αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系。方法设计并合成3对针对αv整合素基因的短发夹RNA(shRNA)序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT-29;G418筛选,局部消化法挑选阳性克隆;Western blotting检测蛋白表达水平。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被HindⅢ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800bp片段。测序结果显示,针对αv整合素基因的3对shRNA序列皆成功插入逆转录病毒质粒;转染逆转录病毒载体的HT-29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blotting结果显示逆转录病毒介导的shRNA能有效地抑制αv整合素表达。结论逆转录病毒介导的shRNA能够高效、稳定地抑制αv整合素表达,进而可以建立稳定干扰αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系。
- 何建明江恒庞学利肖红陈克力胡绍毅黄海辉梁后杰
- 关键词：整合素逆转录病毒RNAI
- FAK靶向RNAi重组体的构建及其抗多细胞球体形成效应被引量：1
- 2009年
- 目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制黏着斑激酶(FAK)表达,并探讨其对结肠癌多细胞球体(MCSs)形成的影响。方法针对FAK cDNA序列设计并合成1对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其对照序列,经退火后插入pGenesil-1中构建重组体。经双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染结肠癌HT29细胞,并用G418稳定筛选,采用Real-time PCR和Western blot检测干扰前后FAK在HT29内的表达变化,并作细胞悬浮培养观测靶向干扰FAK对MCSs形成的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;靶向干扰FAK后,其mRNA和蛋白表达分别显著下调(79.20±2.97)%和(78.47±4.39)%,且细胞不易聚集形成MCSs。结论成功构建FAK靶向RNAi重组载体,显著地抑制FAK表达,并能有效地抑制MCSs的形成。
- 陈玉英向浏欣杨黎潘凤蒋金妍陈克力梁后杰
- 关键词：黏着斑激酶RNA干扰
- 人BNIP3基因真核表达载体的构建及其对HT-29细胞化疗敏感性的影响
- 2013年
- 目的构建人BNIP3真核表达载体,观察BNIP3高表达对人结肠癌细胞HT-29化疗敏感性的影响。方法PCR法扩增BNIP3基因,酶切后插入质粒pEGFP-C3,构建重组真核表达载体pEGFP-C3/BNIP3。脂质体转染人结肠癌细胞HT-29,Western blot检测BNIP3蛋白表达。MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性和细胞增殖,AnnexinV-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切电泳分析和DNA序列测定证实,重组质粒pEGFP-C3/BNIP3构建成功;转染重组质粒的HT-29细胞BNIP3蛋白明显高表达。与未转染组和转染空质粒pEGFP-C3组比较,转染pEGFP-C3/BNIP3组5-Fu的IC50值显著降低[(120.11±5.45)、(113.40±4.72)μg/mL vs(19.08±2.62)μg/mL,P<0.05],细胞凋亡率显著增加[(5.51±0.32)%、(7.19±0.47)%vs(41.72±1.48)%,P<0.05],细胞克隆形成显著减少[(52±6)、(49±5)vs(11±3),P<0.05],细胞增殖速度减慢。结论成功构建了人BNIP3真核表达载体,BNIP3高表达可增加HT-29细胞对5-Fu的化疗敏感性。
- 裴莉边志衡江恒陈克力陈建芳梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤HT-29细胞化疗凋亡
- 结直肠癌中FAK、FAK pY397、Akt、NF-κB表达及相关性研究被引量：14
- 2009年
- 目的:检测黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(FAK pY397)、Akt和细胞核因子(NF-κB)在结直肠癌组织中的表达,并探讨其相关性。方法:采用免疫组织化学SP法,检测74例结直肠癌组织与10例正常结肠组织中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的表达。结果:结直肠癌组织标本中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的阳性率分别为82.43%、45.95%、52.70%和59.46%,除FAK pY397外,FAK、Akt、NF-κB均与正常结肠壁组织表达的差异显著(P<0.05)。FAK表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置、Dukes分期的影响。Akt阳性表达与分化程度显著相关(P<0.05),NF-κB表达与淋巴结转移显著有关(P<0.05),并且Akt、NF-κB表达与FAK表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:FAK、Akt、NF-κB在结直肠癌组织中均高表达,且Akt、NF-κB表达与FAK有显著正相关性,提示生存信号传导通路FAK/Akt/NF-κB在结直肠癌的发生、演进中起重要作用。
- 陈玉英陈克力潘凤杨黎李建军向浏欣何建明梁后杰
- 关键词：黏着斑激酶AKT结直肠癌
- 短发夹RNA干扰黏着斑激酶对结肠癌多细胞球氟尿嘧啶敏感性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨抑制黏着斑激酶(FAK)在结肠癌HT29细胞中的表达能否提高HT29多细胞球对氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。方法构建带有短发夹RNA(shRNA)靶向干扰FAK的重组体pGenesil-l-FAK,抑制FAK在HT29中的表达,采用实时定量PCR和Western blotting检测其在单层细胞和多细胞球中的干扰效率。采用血球计数板计数法检测多细胞球在各时间点的增殖速度,流式细胞术检测干扰对5-FU诱导的多细胞球凋亡的影响,CCK-8法检测单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性的变化。结果用重组体pGenesil-l-FAK靶向干扰FAK能显著抑制单层细胞FAKmRNA,并能抑制单层细胞和多细胞球FAK蛋白的表达。多细胞球的增殖速度并不受FAKshRNA干扰的影响,各组间在各时间点均无显著性差异(P>0·05)。流式细胞术结果显示,FAKshR-NA干扰能够使多细胞球的自发凋亡率(16·48%±1·18%)和5-FU诱导的凋亡率(21·50%±2·62%)显著增加(P=0·000、P=0·001),且两者之间差异显著(P=0·003)。CCK-8法检测结果显示,FAKshRNA干扰提高了单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性,且两者无显著差异(P>0·05),从而逆转了因三维球体结构产生的多细胞耐药性。结论FAK靶向RNA干扰虽不影响多细胞球的增殖,但能促进多细胞球凋亡,并增加多细胞球对5-FU的敏感性;FAK可能介导了结肠癌的多细胞耐药。
- 陈玉英潘凤杨黎向浏欣蒋金妍陈克力梁后杰
- 关键词：黏着斑激酶
- 重组人血管内皮抑制素对淋巴管内皮细胞骨架及淋巴管生成的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:研究重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对淋巴管内皮细胞的作用及淋巴管生成的影响。方法:磁珠分选小儿包皮真皮淋巴管内皮细胞进行培养,并在光镜下观察和采用细胞特异性标记物检测。设立对照组和恩度实验组,应用免疫荧光法和体外三维培养法来判定恩度对淋巴管内皮细胞有无抑制作用。结果:恩度实验组淋巴管内皮细胞骨架中微丝排列极性减弱或消失,微管无明显改变。恩度实验组淋巴管内皮细胞体外形成管状分支数量及管状结构形成能力较对照组明显下降(P<0.05)。结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)对淋巴管内皮细胞的细胞骨架和体外成管能力有明显的抑制作用。
- 欧娟娟潘凤吴峰童晶涛陈克力梁后杰
- 关键词：淋巴管内皮细胞淋巴管生成
