陈新园
- 作品数：10 被引量：17H指数：2
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项教育部“优秀青年教师资助计划”国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肿瘤的血管分子生物学研究—肿瘤血管免疫治疗以及纤溶酶原与PAI-1影响肿瘤生长与转移的研究
- 肿瘤是机体正常细胞累积突变而产生的，能够不断增殖且没有接触抑制现象。肿瘤的发生涉及很多基因，病因非常复杂。过去的50年中，人类征服肿瘤的斗争一直在继续。随着对肿瘤细胞的遗传学、生物化学和功能变化越来越深入的了解，现代医学...
- 陈新园
- 关键词：免疫疗法纤溶酶原
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究被引量：2
- 2004年
- 将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI Sepharose亲和层析、SP Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g,纯度达95%以上,比活大于500000IU/mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准.其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符.同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究.
- 朱镇华孙自勇陈于红张菁王石泉杨庆刘莉莉丁楅森陈新园刘建宁
- 关键词：发酵活化纯化蛋白
- 一种具有抗肿瘤活性的新型尿激酶原Kringle结构域变体蛋白的研究被引量：1
- 2004年
- 利用PCR技术获得人尿激酶原Kringle结构域基因,将其克隆至具有T7启动子的表达质粒pET29a中,并进而插入plasminogenKringle5一段16肽片段构建了其变体,重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达,其产物以包涵体形式存在.通过体外复性,得到可溶性的prourokinaseKringle及其变体.所得蛋白质经过动物肿瘤模型测活,确定变体蛋白具有抑制肿瘤生长作用.
- 曹中炜丁楅森陈新园周颖江王石泉张菁朱镇华陈于红刘建宁
- 关键词：抗肿瘤活性抑制疗法
- 牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定被引量：12
- 2004年
- 用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.
- 孙自勇陈均勇陈新园汪晶田鹏鹏吴盛刘建宁
- 关键词：肠激酶毕赤酵母分泌表达纯化免疫印迹
- 重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定
- 2004年
- 用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白．经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3．8mg重组人胸腺肽．小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系．
- 吴盛陈新园陈均勇刘莉莉朱镇华孙自勇张燕刘建宁
- 关键词：胸腺肽大肠杆菌纯化酶解
- 重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2004年
- 将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1 34)纯品.每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1 34).经质谱测定,所得样品的分子量为4117.0Da,与rhPTH(1 34)理论分子量一致.
- 陈均勇陈新园孙自勇刘莉莉朱镇华汪晶吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：甲状旁腺激素大肠杆菌纯化FACTOR
- 重组人尿激酶原氨基末端片段的制备及活性测定被引量：1
- 2004年
- 尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29a(+)/ATF,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达及纯化后,从每升培养液中获得15mgrhATF,其纯度超过95%.活性测定结果表明rhATF能够阻断尿激酶原与尿激酶受体的结合,并能抑制尿激酶对纤溶酶原以及纤溶酶对尿激酶原的激活.
- 汪晶陈新园孙自勇姚宏伟陈均勇刘建宁
- 关键词：ATF尿激酶受体纯化活性测定多肽
- 尿激酶体外抑制人体免疫缺损病毒的侵染能力(英文)
- 2005年
- 人体免疫缺损病毒的包膜蛋白gp120的V3环区包含一段在人类蛋白质中很少出现的高度保守序列,但这段序列与纤溶酶原被纤溶酶原激活剂酶切位点附近序列有同源性.由于V3环区在人体免疫缺损病毒侵染细胞过程中的重要性,评估了尿激酶对人体免疫缺损病毒侵染能力的影响.通过检测逆转录酶活力,P24抗原的表达和合胞体形成情况发现尿激酶可以抑制人体免疫缺损病毒对多种淋巴瘤和白血病细胞系,如MT4、CEM、H9和外周血单核细胞的侵染能力,并且这种抑制与尿激酶浓度呈剂量依赖关系.那些能够被尿激酶抑制的人体免疫缺损病毒株其V3环区序列必须与纤溶酶原激活区序列同源,实验室常用病毒株包括BRU和RF以及某些野生病毒株.研究结果显示尿激酶在体外实验中可以抑制人体免疫缺损病毒的侵染能力.
- 刘建宁张德正Carole LeContel陈平Victor Gurewich张菁陈新园
- 关键词：尿激酶GP120纤溶酶原人体免疫缺损病毒
- 氨甲环酸与Wnt信号通路中含kringle结构域蛋白的结合对新生小鼠骨密度的影响(英文)
- 2005年
- 最近研究发现Wnt信号通路在骨形成过程中发挥重要作用.Wnt受体如脂蛋白相关蛋白5(lrp5)和孤独受体(Ror2)的缺失或突变导致骨的不正常发育.Dkk是一个分泌型规范Wnt信号系统的抑制剂,通过与脂蛋白相关蛋白5和最近新发现的一种含kringle结构域的蛋白kremen形成三聚体复合物.这种复合物随即被细胞内吞,从而导致细胞表面Wnt受体脂蛋白相关蛋白5水平迅速下降,从而达到抑制Wnt信号通路的目地.通过对kremen和Ror2蛋白序列分析发现kremen和Ror2的胞外部分均含有一个结构上能与赖氨酸结合的kringle结构域.通过给怀孕母鼠注射一种赖氨酸类似物———氨甲环酸来研究kremen和Ror2的kringle结构域上的赖氨酸结合位点被占据对小鼠骨发育的作用.但是,研究结果表明AMCA组和对照组之间的骨密度并没有显著差异,揭示赖氨酸结合位点不参与骨的发育调控.
- 陈新园张菁苏艺晶汪向民刘建宁
- 关键词：WNT骨密度KRINGLE
- rhBACE的克隆、表达纯化与活性测定
- 2004年
- 将重组人酸性蛋白水解酶原 (rh_proBACE)基因克隆到原核表达载体 pET2 8a质粒中 ,构建了pET2 8a_rh_proBACE重组表达载体 ,并在大肠杆菌菌株Rosetta中进行表达 .包涵体中的表达产物溶于 6mol/L盐酸胍 ,经Ni_Sepharose亲和层析纯化后 ,得到高纯度的rh_proBACE蛋白 .将此蛋白在复性液中重新折叠后 ,于酸性条件 (pH 4.5)下激活 ,切去酶原序列 ,产生有活性的rhBACE蛋白 ,并利用人工合成多肽底物 (BAS_1 31 )
- 郭志刚张巍陈新园傅一工孙自勇刘建宁
- 关键词：克隆活性测定Β分泌酶阿尔茨海默病BACE
