韦旭钦
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 高密度培养生产高活力α-乙酰乳酸脱羧酶
- 黄日波蒙健宗王青艳卢福燊周志强李庆业李丛韦函忠韦旭钦林海鹏黄鲲杜丽琴陆坚
- 该项目采用现代化生物技术手段重组DNA，经高密度培养生产 α-乙酰乳酸脱羧酶，经菌种筛选和反复多次的PCR测试，项目组从一株克雷伯氏土壤菌中克隆到编码α-乙酰乳酸脱羧酶的基因（约900bp片段），经过周密细致的基因操作，...
- 关键词：
- 关键词：Α-乙酰乳酸脱羧酶
- 一步法发酵葡萄糖生成1,3-丙二醇的基因工程菌的构建及分子改性
- 本文分析了生物转化葡萄糖生成1,3-PDO的代谢途径及其关键酶，对甘油转化为1,3-PDO的关键酶及其编码基因-dha调节子进行了研究，利用现代的生物技术方法从分子水平上来改造甘油脱水酶以获得具有高活力和具有其它目的性状...
- 齐向辉黄日波韦旭钦杨登峰吴杰群孟晓蕾唐悦梁甜杜丽琴韦宇拓
- 关键词：一步发酵法1,3-丙二醇葡萄糖基因工程菌
- 大肠杆菌yqhD基因的克隆与表达被引量：1
- 2005年
- 以大肠杆菌E scherich ia coli K-12基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到假定的氧化还原酶(pu tative ox idoreductase)基因yqhD,将它连接到克隆质粒pGEM-3zf(+)上,得到重组质粒pGEM-yqhD,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明,yqhD基因全长为1 164 bp。再将yqhD基因插入表达载体pSE 380,构建成重组子pSE 380-yqhD,并在E.coli BL 21中获得表达。研究表明,以1,3-丙二醇为底物时,基因工程菌在30°C下,以1.0 mm o l/L IPTG诱导12 h的酶活力达到3.13 U/mL,比对照菌株提高4.4倍。
- 韦旭钦韦宇拓黄日波
- 关键词：大肠杆菌
- 产1,3-丙二醇基因工程菌发酵条件的研究被引量：3
- 2006年
- 利用途径工程的方法,将来源于克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的甘油脱水酶基因dhaB和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT构建成多顺反子重组质粒pSE-dhaB-dhaT并在大肠杆菌JM 109中进行表达,在大肠杆菌中构建一条新的产1,3-丙二醇代谢途径。研究表明,重组菌株JM 109/pSE-dhaB-dhaT在微好氧条件下,尝试用廉价的乳糖为诱导物、维生素B12为辅酶,可以将甘油转化为1,3-丙二醇,产量达15.34 g/L,甘油转化率为35.7%,对低成本生产1,3-丙二醇作了有益的探索。
- 韦旭钦陈发忠罗兆飞韦宇拓周文广黄日波
- 关键词：1,3-丙二醇重组菌发酵条件
- 丘状乳杆菌中二醇脱水酶激活因子pduGH的克隆与功能鉴定
- 2007年
- 以丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)基因组DNA为模版,通过PCR方法得到二醇脱水酶激活因子基因pduGH,连接到表达载体pET30a上,得到重组质粒pET-pduGH。将此重组质粒转化到Escherichia.coli Rosseta(DE3)中进行表达,重组菌株SDS-PAGE结果显示有明显的64.5 ku和12.4 ku两条特异性蛋白。表达的目的蛋白大多为不溶性的包涵体,经变性、复性后得到部分可溶性蛋白。在辅酶B12,ATP,Mg2+或Mn2+存在下,以Clostridium pasteurianum甘油脱水酶为对象进行激活实验,结果证实,重组质粒pET-pduGH的表达产物具有甘油脱水酶激活活性。
- 梁甜齐向辉韦旭钦韦宇拓黄日波
- 关键词：1,3-丙二醇克隆
- 一步法发酵葡萄糖生成1,3-丙二醇的基因工程菌的构建及分子改性
- ＜正＞ 1,3-丙二醇（1,3-propanediol,1,3-PDO）是一种重要的化工原料,1,3-PDO 不仅是良好的溶剂、抗冻剂、保护剂,而且还是合成许多缩聚物的单体,如新型聚酯材料-聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）...
- 齐向辉韦旭钦杨登峰吴杰群孟晓蕾唐悦梁甜杜丽琴韦宇拓黄日波
- 文献传递
- 基于非理性设计的肺炎克雷伯氏杆菌甘油脱水酶的分子定向进化被引量：3
- 2014年
- 1,3-丙二醇是一种具有广泛应用前景和巨大市场潜力的平台化合物。在生物体转化甘油合成1,3-丙二醇的代谢途径中,甘油脱水酶是代谢途径的限速酶,然而自然界中的甘油脱水酶却存在着诸多的不足。本研究采用易错PCR技术对来源于肺炎克雷伯氏杆菌的甘油脱水酶进行非理性设计的分子定向进化,通过高通量筛选方法筛选获得了一个酶学性质得到了改善的突变酶γ-F97G。当以甘油作为酶催化的底物时,突变酶的酶比活力为(583.8±49.4)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约94%;当以1,2-丙二醇作为酶催化底物时,突变酶的酶比活力为(147.9±5.5)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约72%。经分析酶蛋白的三维结构后发现酶蛋白发生突变的位点属于远距离突变位点,实验结果表明远距离突变有时同样是一条优化和改善酶的酶学性质的好途径。
- 陈云来韦旭钦杜丽琴韦宇拓黄日波
- 关键词：1,3-丙二醇甘油脱水酶分子定向进化
- 一种新型可用于DNA分子量标准的质粒构建被引量：9
- 2004年
- 将首尾带有EcoRI酶切位点的 2 .0kb、1.5kb、1.0kb、0 .75kb、0 .5kb、0 .2 5kb六个长度的片段逐步连接到pGEM - 3zf(+)质粒上的BamHI位点中 ,构建的质粒用EcoRI进行单酶切 ,经电泳可以获得七条DNA带与设计结果完全一致 ,可用于DNA电泳试验中分子量标准。
- 韦柳静韦宇拓黄小凤韦旭钦黄日波
- 关键词：DNA质粒
- 甘油脱水酶的定向进化及其高通量筛选方法
- ＜正＞1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,它具有多种用途而倍受重视。在生物法生成1,3-丙二醇的过程中,甘油脱水酶（Glycerol Dehydratase,EC 4．2．1．30）能催化甘油生成3-羟基丙醛,（3- 羟...
- 韦旭钦陈发忠韦宇拓齐向辉黄日波
- 文献传递
- 宏基因组中不依赖辅酶B12甘油脱水酶基因的筛选和表达
- 2013年
- 通过特定的引物,以土壤宏基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得3.3 kb的DNA片段,该片段连接于pSE380载体构建重组质粒pSE380-dhaB12用于测序和表达。序列分析表明,该DNA片段编码的氨基酸序列与已报导的丁酸梭菌不依赖辅酶B12甘油脱水酶的相似性达99%。通过IPTG诱导,dhaB12基因在大肠杆菌中表达成功,SDS-PAGE分析表明有88 kD和34 kD两条蛋白质条带,在没有辅酶B12存在的情况下,所表达的酶具有明显的甘油脱水酶活性。
- 韦旭钦陈云来吴杰群韦宇拓杜丽琴黄日波
- 关键词：宏基因组甘油脱水酶
