高杨
- 作品数：30 被引量：34H指数：4
- 供职机构：昆明市第一人民医院更多>>
- 发文基金：昆明市科技计划项目国家自然科学基金云南省科技厅-昆明医学院应用基础研究联合专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生建筑科学更多>>
- 长链非编码RNA核富集转录体1调节不均一核糖核蛋白A2蛋白对人肝细胞癌进展的研究被引量：4
- 2016年
- 目的 通过RNA免疫共沉淀寻找长链非编码RNA（lncRNA）核富集转录体1（NEAT1）相关的RNA结合蛋白,验证这些RNA结合蛋白参与NEAT1调节肝癌相关基因核内不均一核糖核蛋白A2（hnRNPA2）表达的分子机制,观察NEAT1调节hnRNP A2的表达对人肝细胞癌的进展的影响.方法 查询Starbase 2.0数据,寻找与NEAT1相互作用密切的RNA结合蛋白,通过RNA免疫共沉淀明确能同时与NEAT1和NEAT1所调控基因mRNA相互作用的RNA结合蛋白,RNA pull-down明确RNA结合蛋白与NEAT1作用靶点片段,使用转染试剂Lipofectamine 2000和siRNA NEAT1（终质量浓度100 nmol/L）敲低HepG2细胞NEAT1表达,Western blot、免疫组织化学检测NEAT1对hnRNP A2蛋白的调节,使用逆转录病毒STP-重组逆转录病毒载体作为载体建立hnRNP A2过表达模型并应用于NEAT1低表达的HepG2细胞模型中,细胞计数试剂盒（CCK-8）增殖实验（10 μl/2 000个细胞）和Transwell小室研究NEAT1低表达的HepG2细胞（2×10^5个/孔）过表达hnRNP A2后与对照组的增殖、侵袭功能.HepG2经NEAT1敲低后2×10^6/0.2 ml腋下注射建立裸鼠皮下成瘤模型,与对照组（si-NC）比较肿瘤体积,hnRNP A2表达.结果 U2AF65能够与NEAT1和hnRNP A2 mRNA相互作用（富集度分别为IgG的82.659倍和53.527倍）,NEAT1敲低降低了hnRNP A2 mRNA转录和蛋白表达（P＜0.01）,这种调控作用可能与NEAT1-U2AF65复合物相关,hnRNPA2过表达可以促进NEAT1敲低的HepG2细胞增殖和侵袭功能（P＜0.01）.结论 NEAT1通过调节hnRNP A2蛋白影响了肝细胞癌细胞的增殖和侵袭能力.
- 莽源祎李立冉江华张升宁刘静李来邦陈奕明刘剑高杨任刚
- 关键词：肝细胞长链非编码RNARNA结合蛋白
- 恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κBp65的表达被引量：1
- 2013年
- 背景:核因子κB作为一种重要的核内转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,参与机体免疫细胞的增殖、分化及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控,在体液和细胞免疫中发挥重要作用。目的:探讨恒河猴移植肝组织内核因子κBP65蛋白表达与急性排斥反应的关系。方法:将恒河猴随机分为2组:急性排斥反应组肝移植后不给予抗排斥处理,对照组肝移植过程中及移植后均给予抗排斥处理。分别在移植后6,12,24和72h4个时间点收集血标本,全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、总胆红素,取移植肝脏组织行苏木精-伊红染色观察组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度,采用Western blot法检测肝脏组织中核因子κBp65的表达。结果与结论:肝移植急性排斥反应发生时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。当急性排斥反应发生时,移植肝组织中核因子κBp65表达上调,急性排斥反应程度也随之加剧。并且在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,核因子κBp65表达显著升高。因此移植肝组织中核因子κBp65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义,同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点。
- 张升宁冉江华刘静李铸李来邦高杨张熙冰吴淑媛李立
- 关键词：肝移植急性排斥反应丙氨酸氨基转移酶总胆红素灵长类动物恒河猴
- 利用脱细胞动脉基质构建组织工程胆道的可行性
- 2014年
- 目的通过观察胆道组织和动脉及其相应的脱细胞基质并比较其差异,探讨利用脱细胞动脉基质构建生物工程胆道的可行性。方法应用捐献肝、肾进行器官移植的心跳死亡患者捐献器官后剩余的胆道及髂动脉组织,应用胰酶、十二烷基硫酸钠、TritonX-100进行脱细胞处理,应用光学显微镜及扫描电子显微镜观察比较胆道与动脉脱细胞后的形态特点。结果脱细胞动脉基质较脱细胞胆道具有更为疏松的内膜、中膜,脱细胞后细胞外支架完整,其平均内膜厚度为(276.00±48.35)μm,与脱细胞胆道[(18.3±1.83)μm]相比,差异有统计学意义。结论脱细胞动脉基质具有良好的孔率、孔径以及完整的细胞外支架结构,是理想的组织工程支架,利用脱细胞动脉基质有可能构建组织工程胆道。
- 陈奕明李立张春平冉江华张升宁李来邦高杨任刚
- 关键词：脱细胞动脉胆道
- 两种分离脐血间充质干细胞的方法比较被引量：5
- 2011年
- 背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P<0.01),第1次传代时间短(P<0.01)。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P>0.05)。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。
- 高杨李立冉江华陈奕明蒋益舟
- 关键词：脐血间充质干细胞
- 胆道镜对肝内、肝外胆道残余结石的诊断与治疗被引量：4
- 2018年
- 目的:分析肝内、肝外胆道残余结石患者采用胆道镜进行诊断与治疗的作用。方法:对100例肝内外胆道残余结石患者进行观察,对所有患者先后进行T管造影、胆道镜检查,之后再二者联合进行检查。对比观察三种检查方法对肝内、肝外胆道残余结石检出率、漏诊、误诊率情况,分析胆道镜对肝内、肝外胆道外胆道残余结石的诊治作用。结果:(1)胆道镜检出肝内、肝外胆道残余结石87例,阳性率为87.00%;T管造影检出肝内、肝外胆道残余结石76例,阳性率为76.00%;胆道镜、T管造影联合检测肝内、肝外胆道残余结石95例,阳性率为95.00%;三种检查方式检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)对100例肝内、肝外胆道残余结石患者在纤维胆道镜引导下进行胆道镜检查、取石疗后,均成功完成,一次结石取尽率达到98%。手术时间为15~95 min,术后住院时间1~5 d。结论:胆道镜对肝内、肝外胆道残余结石检出率高,胆道镜引导下进行取石手术的取石成功率高,结石清除彻底,弥补了单独手术的缺陷,在肝内、肝外胆道残余结石的诊治中具有重要作用。
- 高杨张升宁张春平张熙冰
- 关键词：胆道镜
- 体外诱导大鼠肝卵圆细胞定向分化为胆管上皮细胞被引量：2
- 2014年
- 目的通过对大鼠肝卵圆细胞进行体外培养,建立诱导大鼠肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞的诱导体系。方法通过2AAF/PH建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,使用二步酶消化法获得原代肝卵圆细胞,应用20ng/mL干细胞生长因子及10 ng/mL表皮生长因子诱导肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化,并应用流式细胞及免疫荧光观察细胞分化过程中OV-6及CK-19标志的表达变化。结果原代肝卵圆细胞OV-6阳性细胞为(94.30±1.40)%,CK-19阳性细胞为(3.16±1.87)%,诱导后第7代细胞OV-6阳性细胞为(4.97±0.21)%,CK-19阳性细胞为(96.17±1.21)%,差异有显著性(P<0.05)。免疫荧光结果证实CK-19广泛表达。结论成功诱导大鼠肝卵圆细胞分化为表达CK-19的胆管上皮细胞,细胞形态符合上皮细胞形态特点,表皮生长因子及干细胞生长因子可诱导肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞。
- 陈奕明李立冉江华张升宁张蕾苏晓三张春平高杨任刚
- 关键词：肝卵圆细胞胆管上皮细胞
- 人脐血间充质干细胞对肝癌转移的影响及机制的探讨
- 目的：探讨人脐带血间充质干细胞的体外培养方法、细胞生长曲线、细胞表面标志等特性,分析脐带血作为间充质干细胞来源的可行性。方法：采集脐带血,Percoll分离液法分离脐血间充质干细胞,贴壁培养人脐血间充质干细胞并传代,绘制...
- 高杨
- 关键词：人脐血间充质干细胞肝癌肝癌转移
- 文献传递
- 胰肾联合移植供体修整技巧浅谈
- 目的 探讨胰肾联合移植过程中供体修整中的多个细节技术，重视这些细节技术可以更加有利于供体修整的成功，从而更加有利于受体移植的顺利和术后并发症的尽量减少，术后更加有利于受体的恢复，最终有利于移植物存活时间的延长和受体生活质...
- 刘静李立冉江华张升宁赵永恒李肖山张熙冰高杨李来邦刘剑
- 大鼠原位肝移植模型不同灌注方式和吻合方法的效果比较被引量：1
- 2023年
- 目的分析不同灌注方式和不同肝上下腔静脉吻合方法对建立大鼠原位肝移植模型的影响。方法将80只SD大鼠随机分为供肝获取组和受体肝移植组,每组40只。供肝获取组10只大鼠采用腹主动脉输液器滴灌法(1滴/s),10只大鼠采用腹主动脉微量泵灌注法(6 mL/min),之后分别进行受体肝移植(每组对应10只大鼠肝移植),收集2组大鼠的供肝灌注时间和供肝获取时间,并于灌注后、肝移植24 h取肝脏组织行HE染色。受体肝移植组10只大鼠肝移植时采用连续吻合法,10只采用减张力半针吻合法(2组均在成功完成10只肝移植后截止),收集2组大鼠的肝上下腔静脉吻合时间、无肝期时间和术后发生并发症发生情况。结果与腹主动脉输液器滴灌组比较,腹主动脉微量泵灌注组的供肝灌注时间和供肝获取时间较短(P<0.05);HE染色结果显示,腹主动脉微量泵灌注组的肝细胞、门静脉及胆管形态学无明显改变,仅个别淋巴细胞浸润。与连续吻合组比较,减张力半针吻合组大鼠的肝上下腔静脉吻合时间和无肝期时间较短(P<0.05),术后吻合口出血和供肝灌注不全发生率较低(P<0.05)。结论相对于腹主动脉输液器滴灌法,腹主动脉微量泵灌注法能提高供肝质量;与连续吻合法比较,减张力半针吻合方法能缩短无肝期与肝上下腔静脉吻合时间,同时降低吻合口出血的发生率。
- 赵姣姣莽源祎李立李立张升宁
- 关键词：原位肝移植模型灌注方式
- 边界性可切除胰腺导管腺癌的诊治现状
- 2018年
- 目的总结目前边界性可切除胰腺导管腺癌(BR-PDAC)的诊治情况及进展。方法通过文献检索,就近年来BR-PDAC的诊断和治疗进行综述,总结BR-PDAC的定义、治疗及治疗效果。结果近年来胰腺外科已经有了很大的进步,特别是在血管重建和多脏器联合切除方面已经能够对以往不能手术的胰腺导管腺癌患者进行根治性切除。2014年国际胰腺外科学组(ISGPS)对BR-PDAC进行了定义。目前,对BR-PDAC是先直接手术切除还是先进行新辅助治疗后再手术存在许多争议。BR-PDAC诊治的关键是,术前进行精确的评估以确定肿瘤的可切除性,以及外科的根治性切除联合新辅助治疗。结论外科手术结合新辅助治疗是BR-PDAC患者唯一有可能获得长期生存的治疗方式。
- 高杨张升宁张熙冰李立冉江华
