俄世瑾
- 作品数：3 被引量：32H指数：2
- 供职机构：山东农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 嗜热子囊菌光孢变种热稳定超氧化物歧化酶的纯化及基因克隆和表达
- 超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)(EC．1.15．1.1)系一类金属酶，广泛存在于生物体中。它能够催化超氧阴离子(O<,2>)发生歧化反应，从而清除超氧阴离子。在生物体防御氧化损伤的...
- 俄世瑾
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种纯化克隆表达
- 文献传递
- 嗜热毛壳菌CT2纤维二糖水解酶Ⅰ在毕赤酵母中的高效表达被引量：13
- 2006年
- 嗜热毛壳菌ChaetomiumthermophilumCT2可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RT-PCR扩增cbh1成熟蛋白的编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.42mg/mL。表达蛋白分泌到培养基中,分子量约80kD;以脱脂棉为底物测得酶活为21U/mL。表达蛋白在60℃稳定,70℃保温60分钟仍保持90%的酶活力,具有较高的热稳定性。
- 刘守安李多川张燕郭芳先俄世瑾
- 关键词：纤维素酶羧甲基纤维素
- 嗜热毛壳菌纤维素酶(CBHⅡ)cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：23
- 2005年
- 嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilumCT2是一种土壤腐生菌,可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RACEPCR获得嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因(cbh2)。DNA序列分析表明cbh2的开放阅读框由1428个碱基组成,编码476个氨基酸。推断的氨基酸序列包含一个典型真菌纤维素酶的糖结合域(CBD)、催化域(CD)以及二者之间富含脯氨酸和羟基氨基酸的连接桥。根据氨基酸序列推算该酶分子量为53kD,属于糖苷水解酶第六家族,具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增cbh2的成熟蛋白编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶蛋白的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.2mgmL。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fastflow阴离子层析等步骤纯化了该重组表达蛋白。SDSPAGE得到重组蛋白分子量为67kD,与从嗜热毛壳菌中纯化的该酶分子量一致。该重组纤维二糖水解酶作用的最适合温度50℃,最适pH4.0,在70℃的半衰期为30min,具有较好的热稳定性。
- 刘守安李多川俄世瑾张燕
- 关键词：嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶CDNA克隆巴斯德毕赤酵母
