刘平
- 作品数：9 被引量：51H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- PBL互动式教学模式在留学生教学中的探索与实践被引量：31
- 2009年
- 结合留学生教学的现状、笔者在美国纽约大学的学习体会以及几年来的留学生教学经验,阐述了在留学生教学中开展PBL教学的必要性,进而提出了适合留学生教学的PBL教学具体方案。
- 郭风劲林建炜刘平
- 关键词：留学生教学PBL教学模式教学方法
- 靶向XBP1S的RNA干扰质粒对细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 构建靶向人XBP1S的siRNA真核表达载体（pSUPER-XBP1S）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.方法 设计并合成针对XBP1S基因的siRNA,退火成互补双链后克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒,并将其转染入HeLa细胞和HepG2细胞中.采用RT-PCR检测转染前后XBP1S在HeLa细胞和HepG2细胞中的转录,Western印迹检测转染前后XBP1S蛋白的表达;MTT法、细胞计数检测重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.结果 重组质粒能有效地抑制HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S基因的转录和表达;转染HeLa细胞和HepG2细胞后,细胞增殖抑制率及细胞增殖数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 成功构建了靶向人XBP1S的siRNA表达载体pSUPER-XBP1S,并且有效的抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S的转录和表达,有效抑制了细胞的增殖能力.
- 林建炜刘平李祥柱赵文君郭风劲
- 关键词：SIRNA真核表达载体
- 转录因子XBP1S基因表达谱差异分析被引量：1
- 2010年
- 目的 应用基因表达谱芯片技术了解XBP1S在肝细胞中可能上调或下调的基因,了解其可能的调节功能线索.方法 构建pcDNA3.1（-）-XBP1S真核表达载体,转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1（-）处理相同细胞系作为对照.48 h后制备细胞裂解液,提取mRNA,应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析.结果 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行基因表达谱芯片技术分析.经过差异基因表达谱的筛选,发现HepG2细胞转染XBP1S以后,有38个基因表达水平显著上调,30个基因表达水平显著下调.结论 成功构建XBP1S的真核表达载体pcDNA3.1（-）-XBP1S,运用基因表达谱芯片技术成功筛选了XBP1S转染细胞后的差异表达基因,这些差异表达基因包括细胞周期、蛋白质的翻译合成及运输、能量代谢、体内免疫调节、细胞凋亡及细胞内的信号转导等方面起重要作用及肿瘤发生相关的基因,为进一步阐明XBP1S可能存在的调控机制及XBP1S蛋白可能的生物学功能提供理论依据.
- 郭风劲林建炜刘平李祥柱赵文君
- 关键词：转录因子基因芯片
- IRE1结构域分析及截短型载体的构建和表达被引量：5
- 2011年
- 目的 克隆IRE1基因,根据IRE1基因不同生物学功能的4个结构域构建截短型真核表达载体,并用生物信息学方法对其蛋白产物进行分析.方法 应用PCR重组技术,以pCMV-IRE1为模板扩增IRE1全长及4个截短型片段,利用DNA重组技术将片段定向插入到真核表达载体pcDNA3.1（-）中,经酶切及测序鉴定后,免疫印迹检测各重组载体在细胞中的表达,并利用SWISS-MODEL在线软件预测其蛋白结构.结果 酶切鉴定及Western 印迹结果表明成功构建了IRE1全长及每一种截短型片段的真核表达载体：pcDNA3.1（-）-IRE1（pIRE1）,pcDNA3.1（-）-IRE1-NLDP（pNLD）,pcDNA3.1（-）-IRE1-KinaseP（pKinase）,pcDNA3.1（-）-IRE1-R＋L（pR＋L）,pcDNA3.1（-）-IRE1-RNase（pRNase）.结论 IRE1及其截短型真核表达载体的成功构建和表达,为进一步研究IRE1各个结构域的生物学功能奠定了基础.
- 刘平李祥柱赵文君刘艳娜周菁华郭风劲
- 关键词：内质网应激结构域
- 人类X盒结合蛋白1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2009年
- 目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌E.coliBL2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的蛋白经透析袋复性后进行蛋白质定量,再以此蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,末次免疫后心脏取血,采用ELISA法检测抗血清效价;免疫印迹和免疫组化法检测兔抗XBP1u血清的特异性.结果:XBP1u蛋白为包涵体表达,包涵体裂解后经过纯化、复性进行免疫,得到抗血清的效价大于1∶64000,免疫印迹结果出现特异Mr33×103XBP1u条带,免疫组化法在兔肝细胞中成功检测到XBP1u的表达.结论:成功表达和纯化人XBP1u蛋白,并得到高特异性、高效价兔抗XBP1u多克隆抗体.
- 林建炜李婧刘平郭风劲
- 关键词：效价纯化多克隆抗体免疫印迹
- 靶向IRE1a干扰质粒构建及对ERS时细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细胞中。采用RT—PCR检测pS1、pS2转染前后IRE1a在HeLa细胞和HepG2细胞中的mRNA水平，免疫印迹检测pS1、pS2转染前后IRE1a蛋白的表达；MTT比色法、BrdU／DAPI双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。结果干扰质粒（pSUPER-IRE1a）能有效抑制HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a基因的表达；成功转染后，细胞处于内质网应激（ER stress）状态时，各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较，差异均具有统计学意义P〈0．05）。结论成功构建靶向人IRE1a的shRNA真核表达载体pS1、pS2，有效抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a的表达；细胞处于ERS状态时，IRE1a-shRNA有效促进HeLa、HepG2两种肿瘤细胞的增殖；抑制HeLa和HepG2细胞的凋亡。
- 姜蓉刘艳娜周菁华刘平郭风劲
- 关键词：SHRNA细胞增殖
- 转录因子XBP1S对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响被引量：9
- 2011年
- 目的:探讨人剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein1spliced,XBP1S)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用衣霉素(tunicamycin,Tm)和毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)建立HepG2细胞的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。将XBP1S真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1S和靶向XBP1S的RNA干扰质粒pSUPER-XBP1S转染HepG2细胞,MTT法检测细胞的增殖能力,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,FCM法检测细胞凋亡率,Western印迹法检测caspase12的表达。结果:转染pSUPER-XBP1S可有效抑制细胞增殖,而转染pcDNA3.1(-)-XBP1S可促进细胞增殖。荧光显微镜下可见Tm处理组细胞出现细胞凋亡的形态学改变,进一步下调XBP1S的表达可使这一改变增强。对照组、Tm组、Tm+pSUPER-XBP1S转染组和Tm+pcDNA3.1(-)-XBP1S转染组细胞的凋亡率分别为5.21%、41.51%、52.15%和35.87%,差异有统计学意义(P<0.05)。HepG2细胞中caspase12的表达,Tm组高于对照组,Tm+pSUPER-XBP1S转染组高于Tm组,Tm+pcDNA3.1(-)-XBP1S转染组低于Tm组。结论:XBP1S可以促进肝癌HepG2细胞增殖,抑制或促进XBP1S表达可调节ERS介导的细胞凋亡。
- 林建炜刘平向廷秀李祥柱赵文君郭风劲
- 关键词：肝肿瘤内质网应激细胞增殖
- DC-SIGN表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究
- 目的:筛选合适的实验对象,研究IL-4调控树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素/(dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin, DC-SIGN/)的表达...
- 刘平
- 关键词：结核白细胞介素-4
- 文献传递
- 小鼠树突状细胞经脂多糖诱导成熟前后超微结构的适应性变化被引量：3
- 2009年
- 目的研究树突状细胞成熟前后细胞超微结构的一系列适应性变化。方法经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导小鼠骨髓单个核细胞分化为未成熟树突状细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志。再经脂多糖(LPS)诱导48h成熟,经透射电镜观察诱导成熟前后树突状细胞超微结构并加以比较分析。结果树突状细胞经LPS刺激成熟后,其细胞表面树枝状突起明显减少,细胞内器持续增多,同时细胞核直径增大。结论树突状细胞表面突起的分布状态,可能决定了抗原呈递能力的大小,同时也是细胞功能潜力及状态的一种潜在标尺。
- 骆德平李勇李代庆季平王涛邱丽华刘平
- 关键词：树突状细胞脂多糖超微结构
