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刘惠荣: 作品数：38 被引量：120H指数：7; 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金博士科研启动基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生环境科学与工程更多>>

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致病疫霉菌株交配型的检测及其检测方法的比较被引量：1: 2016年; 致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原体,可导致马铃薯大面积减产。致病疫霉的有性生殖可以产生卵孢子,由于其抗逆性较强,利于致病疫霉渡过不利的生存环境,给马铃薯晚疫病的有效防治带来巨大的困难。致病疫霉的有性生殖属于异宗配合,即A1、A2交配型同时培养时才会产生卵孢子。因此,快速而有效地检测致病疫霉菌株的交配型将为致病疫霉有性生殖分子机理的研究及致病疫霉的防治奠定基础。通过直接配对法、纸盘法和分子标记法三种方法,对5株来源不同的致病疫霉菌株进行了交配型检测。三种方法的检测结果均表明,菌株HQK8-3、2PO-D、USA1的交配型与ATCC标准菌株64093的交配型一致,为A1交配型,而菌株2PO82001、P7723的交配型与ATCC标准菌株32835的交配型一致,为A2交配型。说明三种方法均可有效鉴定致病疫霉交配型,但三种方法各有优缺点,应根据实验条件,采取合适的方法进行菌株交配型测定。; 崔海辰任兴波董磊赵秀铭刘惠荣; 关键词：致病疫霉分子标记法

内蒙古西部地区土壤微生物数量及其土壤理化特性被引量：9: 2017年; 以内蒙古西部为研究区,按35种土壤亚类共采集103份土样,测定了土壤微生物数量和土壤理化特性,并分析了其相关性。结果表明:该地区土壤细菌、放线菌、真菌的平均数量分别为515.67×104、145.61×104、1.62×104cfu·g-1。土壤理化特性分析结果显示,土壤呈中性到碱性;土壤含水量很低,其中96.1%的土壤含水量<15%;土壤养分含量普遍很低。相关性分析和通径分析表明,土壤微生物数量与土壤pH、含水量、碱解氮、速效钾均体现出相关性;土壤碱解氮是影响土壤微生物数量的直接作用因子,而土壤pH、速效钾主要是通过其他环境因子影响土壤微生物数量。说明内蒙古西部地区土壤偏碱性,其含水量、养分含量偏低是造成该地区土壤微生物数量较低的主要原因。; 丁一秀谢荣辉高安琪王勇乐刘惠荣; 关键词：通径分析土壤环境土壤微生物土壤理化特性

马铃薯晚疫病菌拮抗粘细菌YR–35的分离鉴定及其代谢产物稳定性被引量：9: 2016年; 从乌拉山镇的农田土壤中分离获得致病疫霉的高效拮抗菌株YR-35,通过形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析将其鉴定为变绿色粘球菌Myxococcus virescens。菌株YR-35对马铃薯晚疫病致病菌菌丝生长抑制率高达96.67%。抗菌活性物质在30～80℃处理1 h后菌丝生长抑制率可达21.70%,高于80℃时活性逐渐下降,90℃处理后菌丝生长抑制率仍然可达15.38%。活性物质在pH 5.0～9.0条件下菌丝生长抑制率保持在25.27%以上,当pH〈5.0或pH〉9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,菌株YR-35的发酵无菌液处理组叶片相对病斑面积仅为0.57%,对照组的相对病斑面积高达87.72%。菌株YR-35的发酵无菌液可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片。本研究首次发现变绿色粘球菌对致病疫霉有显著拮抗活性,为研发有效防治马铃薯晚疫病的生物农药奠定了基础。; 任兴波张子良赵璞钰武志华崔海辰刘惠荣; 关键词：致病疫霉拮抗菌株

一株抗马铃薯晚疫病菌的黏细菌鉴定及其活性分析被引量：5: 2014年; 采用大肠杆菌诱导的方法,从内蒙古呼和浩特市采集的土壤中分离到一株细菌(Xt—2)。通过子实体和菌落形态学的初步观察、生理生化特征和16S rDNA分子鉴定,该菌株具有与橙色黏球菌相似的形态及生理生化特征,且其16S rDNA序列与橙色黏球菌的16S rDNA序列具有99%的同源性,说明该菌株为橙色黏球菌。抗菌活性表明菌株Xt—2具有明显的抗马铃薯晚疫病菌活性,且活性物质主要存在于菌株的胞外代谢产物中。活性物质不是蛋白质,对紫外的耐受性比较好,但对高温、过酸或过碱的环境比较敏感。本研究为菌株Xt—2抗马铃薯晚疫病活性物质的提取、分离及鉴定奠定了基础,也为内蒙古地区黏细菌的深入研究及抗马铃薯晚疫病新药研发奠定了一定的基础。; 刘沛生李娜冯福应刘惠荣; 关键词：黏细菌抗菌活性物质

由一株紫色杆菌产生的聚乙烯醇降解酶的酶学特性研究: 2017年; 从岱海水样中筛选出一株可以生产聚乙烯醇降解酶的菌株,该菌株可以以聚乙烯醇(PVA)为唯一碳源生长。根据该菌株的形态学特征及其16S r DNA序列分析结果,鉴定其属于詹森菌属(Janthinobacterium sp.),实验室编号为DH-01。从该菌株的发酵液中提取聚乙烯醇降解酶的粗酶液,并对其酶学特性进行研究,考察该酶在细胞内外的分布情况及其适宜的环境条件。实验结果表明:该菌株产生的PVA降解酶在细胞内外均有分布,但PVA降解酶绝大部分分泌至细胞外。该菌株所产的PVA降解酶最适的反应条件为:底物浓度为1.0 g/L,p H为6.5,温度为45℃。该菌株所产的PVA降解酶的酶活在p H值为6.5,温度为35℃时相对比较稳定。粗酶液对浓度为1.0 g/L的PVA溶液有较好的降解作用,反应10 h后,降解率达到82%。; 武志华丁一秀孙志宁郭维维马强刘惠荣; 关键词：聚乙烯醇酶活

不同标签对致病疫霉PiGK5胞外端表达及稳定性的影响: 2022年; 马铃薯晚疫病病原菌致病疫霉的PiGK5蛋白是一类跨膜蛋白,该蛋白在致病疫霉的致病性、无性生殖及有性生殖方面均有重要作用,但其结构与详细功能目前尚未可知。本研究通过PCR扩增PiGK5胞外端编码区,分别构建融合His标签及MBP和His双标签的原核表达载体,比较了不同标签对PiGK5胞外端表达水平、可溶性及稳定性的影响。结果显示,融合His标签的PiGK5胞外端蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为28.11 mg,其中可溶性蛋白总量约为2.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为0.1175 mg。纯化后的重组蛋白稳定性较好,可在96小时内维持蛋白结构稳定。融合MBP、His双标签的PiGK5胞外端蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为49.93 mg,其中可溶性蛋白总量约为44.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为6.0125 mg。但重组蛋白的稳定性较差,仅在1.5小时就出现了蛋白降解现象。因此,虽然融合His标签的PiGK5胞外端蛋白的可溶性蛋白量较低,但重组蛋白更稳定,融合His标签更适合于PiGK5胞外端的原核表达及后续结构与功能研究。本研究比较了不同标签对PiGK5蛋白胞外端表达的影响,建立了该蛋白的原核表达条件,为其结构与功能的研究奠定了基础。; 张乐乐刘惠荣韩晓东陈阳; 关键词：致病疫霉标签表达纯化稳定性

人CETP cDNA的克隆与真核表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2008年; 通过克隆人CETP cDNA ORF序列,构建人CETP真核表达载体,为进一步研究人CETP的结构与功能奠定基础。该试验提取人肝组织的总RNA并纯化mRNA,用试剂盒将mRNA反转录合成cDNA-链,设计引物,以合成的cDNA链为模板PCR扩增CETP cDNA的ORF序列。将扩增得到的约1.5kb片段克隆进入pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒载体,最后将重组质粒进行鉴定并测序。结果表明,CETP重组真核表达载体包含完整的CETP cDNA ORF序列,且与已发表的人CETP cDNA ORF序列完全一致。; 任春秀佳元何一平刘惠荣; 关键词：胆固醇酯转运蛋白 CDNA 真核表达载体

致病疫霉拮抗菌株YR-7的分离鉴定及其活性物质被引量：6: 2016年; 【目的】从黄河边的农田土壤中分离筛选拮抗致病疫霉的粘细菌,鉴定目标菌株,分析其发酵上清液的稳定性及对马铃薯晚疫病菌的抑制效果,为活性物质分离鉴定及抗马铃薯晚疫病菌生物农药的研发奠定基础。【方法】采用兔粪诱导法分离菌株,通过平板对峙法筛选对马铃薯晚疫病菌有拮抗作用的粘细菌,通过形态特征、生理生化特征以及16S r RNA基因序列分析对菌株进行鉴定。采用称重法测定菌株生长曲线,通过平皿法测定菌株不同生长时期发酵上清液对致病疫霉的菌丝生长抑制率和浓缩发酵上清液的稳定性。通过马铃薯离体叶片涂布浓缩发酵上清液和接种病原菌孢子悬浮液法,测定该菌株对马铃薯晚疫病的防病作用。【结果】从土壤样品中共分离获得7株粘细菌,其中4株拮抗致病疫霉,拮抗效果最强的为YR-7菌株,菌丝的生长抑制率为96%,该菌株被鉴定为Myxococcus xanthus。培养7 d后,菌株发酵上清液对致病疫霉的抑制活性趋于稳定。浓缩发酵上清液经30-50°C处理后,对致病疫霉菌丝的生长抑制率可达50.90%,高于50°C时抑菌活性逐渐下降,90°C处理后菌丝的生长抑制率仍可达25.45%。浓缩发酵上清液在p H 4.0-9.0条件下比较稳定,保持40.21%以上菌丝的生长抑制率,当p H<4.0或p H>9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,其抗菌活性不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,YR-7的浓缩发酵上清液处理组叶片相对病斑面积仅为0.35%,对照组的相对病斑面积高达68.19%。【结论】粘细菌菌株YR-7可以产生抗马铃薯晚疫病菌的次生代谢产物,抗菌活性物质具有较好的稳定性,可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片,具有开发成抗马铃薯晚疫病生物农药的潜在价值。; 任兴波武志华崔海辰高向红冯福应刘惠荣; 关键词：致病疫霉拮抗菌株活性物质

利用PCR进行基因定点突变方法的改进被引量：1: 2009年; 本研究旨在对利用PCR进行定点突变的方法进行改进。设计1对含突变碱基对的互补引物,以插入目的外源基因的质粒为模板,经过20个循环的PCR扩增出质粒的全长序列之后,用氯仿抽提PCR产物,然后转化感受态细胞TOP10,通过测序验证阳性克隆。利用这种改进的方法可以简单、快速对质粒上的外源基因进行定点突变,降低了构建突变体的成本。; 李艳君刘惠荣; 关键词：基因定点突变 PCR

树鼠句膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1cDNA和蛋白质结构分析及其组织表达: 2007年; 目的获得不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1的cDNA和蛋白质序列,鉴定其组织分布,探讨其是否参与树鼠句独特的高密度脂蛋白代谢。方法以树鼠句肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术,获得树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列并推导出其氨基酸序列,应用实时聚合酶链反应技术分析树鼠句ATP结合盒转运体A1 mRNA在各组织中的分布情况。结果获得的树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列全长为7 762 bp,其中开放阅读框架6 786 bp,编码2 261个氨基酸的蛋白。该蛋白与人ATP结合盒转运体A1的长度相同,二者在氨基酸水平上高度同源(95%)。多组织表达谱显示树鼠句ATP结合盒转运体A1在多种组织中广泛表达,其中表达量最高的依次为肺脏、肝脏、肾脏和脾脏,这与人和小鼠ATP结合盒转运体A1在肝中高表达而在肺和脾中低表达的分布有很大差异。结论树鼠句ATP结合盒转运体A1组织表达谱的特点有可能增加其在体内的浓度和数量,从而可能间接增加高密度脂蛋白的合成。; 周冰曾武威刘惠荣孙国涛吴钢薛红陈保生; 关键词：分子生物学蛋白质序列高密度脂蛋白

刘惠荣

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