刘红娜
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
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- 鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达
- 2014年
- 以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。
- 王文玉曾范利时坤李健明刘红娜杜锐
- 关键词：差异基因原核表达反应原性
- 牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C_(24)V株E_0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达被引量：2
- 2014年
- E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化,在卡介苗中表达E0基因,检测到了E0蛋白的抗原活性,为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。
- 张云郝俊伟刘红娜王文玉杨宇航时坤李健明杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻E0基因密码子重组卡介苗
- 应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果被引量：1
- 2014年
- 为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。
- 杨宇航宋纪伟时坤曾范利李健明刘红娜王文玉郝俊伟刘东旭杜锐
- 关键词：重组卡介苗流式细胞术免疫效果
- 鹿布鲁菌分型实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2014年
- 鹿布鲁菌病主要是由牛型、羊型和猪型布鲁菌引起的,其他感染型少见,本研究依据布鲁菌的特异性基因BruAB20168、BMEII0466、BR0952上的部分高度保守片段设计猪型、牛型、羊型引物和探针,用于检测并区分鹿源布鲁菌的种型,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到pUC57载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布氏菌各分型荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线敏感性可知该方法的最低检测浓度分别可达到12、9、8copies/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟时坤曾范利李健明王文玉杨宇航刘红娜张云张秀丽杜锐
- 关键词：布鲁菌实时荧光定量PCR
- 细胞活力及细胞免疫力检测方法的研究进展被引量：3
- 2013年
- 随着人们生活水平的不断提高,肿瘤、癌症、药物敏感、免疫缺陷和病毒性感染病等恶性疾病也相继大量出现,而用于检测细胞活性及其免疫力的相关试验都将要求趋于快速、简捷和准确的特点。通过近年来国内外检测细胞活力及其免疫力的试验,作者对推知待测样品水平的方法,包括淋巴细胞转化试验、酶联免疫吸附试验、细胞毒性T细胞检测、白细胞介素12检测及流式细胞术等的研究概况进行综述。
- 杨宇航王文玉刘红娜刘东旭时坤李健明杜锐
- 关键词：酶联免疫吸附试验细胞毒性T细胞白细胞介素12流式细胞术
- 鹿布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 本研究依据布鲁氏菌的特异性基因Omp25c的部分片段作为靶基因,设计探针引物,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到PGEM-T载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线可知该方法的最低检测浓度可达到36拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟张云杨宇航刘红娜王文玉张秀丽时坤李建明杜锐
- 关键词：布鲁氏菌
- 水貂阿留申病毒NS1基因的分段原核表达及免疫原性研究
- 水貂阿留申病（Aleutian disease, AD）是由水貂阿留申病毒（Aleutian disease virus, ADV）引起的一种慢性、进行性、病毒性传染病。幼貂感染AD时，会出现急性间质性肺炎;成年貂感染A...
- 刘红娜
- 关键词：水貂阿留申病毒NS1基因蛋白纯化免疫原性研究
- 文献传递
- 水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
- 2014年
- 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。
- 刘红娜王文玉张云杨宇航郝俊伟时坤李健明杜锐
- 关键词：大肠杆菌
