孔繁强 作品数:5 被引量:6 H指数:2 供职机构: 天津医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
基质金属蛋白酶-9调控CD73自视网膜色素上皮细胞膜表面脱落机制的初步研究 被引量:1 2017年 目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9调控CD73自视网膜色素上皮(RPE)细胞膜表面脱落的机制。方法以脂多糖及肿瘤坏死因子-α共同干预体外培养的人RPE细胞,诱导RPE细胞膜表面CD73脱落。同时给予磷脂酶C(PLC)抑制剂ET-18-OCH,30.0gmol/L或广谱MMP抑制剂ONO-48175.0gmol/L进行干预;流式细胞仪检测RPE细胞膜表面CD73含量变化。以选择性MMP.2、MMP-9抑制剂或相应siRNA进行干预;利用基因定点突变技术改造CD73中潜在的MMP.9识别位点,在CD73^-/-。RPE细胞中过表达野生型(Wt)及突变型(Mut)CD73,检Nwt、Mut.CD73脱落情况。结果广谱MMP抑制剂可有效抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落;PLC抑制剂不能抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落。选择性抑制MMP-9活性或以siRNAT调MMP-9的表达也均可抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落。表达于CD73。RPE细胞膜表面的Wt.CD73可发生脱落,而Lys^547Phe^548编码位点突变的CD73未见脱落。结论MMP.9通过水解Lys^547Phe^548位点而参与炎症状态下CD73自RPE细胞膜表面的脱落。 孔繁强 周树民 陈松关键词:视网膜色素上皮 CD25含量与T辅助细胞对IL-2的促增殖反应性 2012年 目的研究不同激活状态下T辅助细胞(Th)中IL-2R各亚基的表达变化及对IL-2反应的相关性。方法以包被的抗CD3抗体激活Thl细胞,同时设立未激活对照。’H掺入法测定其对IL-2的促增殖反应;real-timePCR检测IL-2R各亚基编码基因的表达;流式细胞术检测CD25及CDl22的含量;以I125标记的IL-2检测不同状态的Thl细胞对IL-2的亲和力。脂质体法转染IL-2RotsiRNA至激活的Thl细胞,比较不同CD25含量时Thl细胞对IL-2的反应性。自小鼠体内分离CD4细胞,以抗CD3抗体激活后在不同时间点收集细胞,比较它们的CD25含量及对IL-2的反应性。结果较未激活对照相比,激活的Thl细胞中IL-2Rα亚基,即CD25的表达显著增加,而其他两个亚基则无变化;同时伴有对IL-2亲和力的升高,但对IL-2的促增殖反应性却显著降低。以siRNA适当下调IL-2Rα基因的表达则可显著提高激活的Thl细胞对IL-2的反应性。虽然激活后的naiveCIM细胞对IL-2的反应性明显增加,但却不与CD25的含量及激活度正相关。最高的IL-2反应性出现在低度激活的CD4细胞中。结论CD25在激活后的Th细胞中显著增多,并可通过自身数量的变化来调节所在细胞对IL-2的促增殖反应性。适度高表达的CD25可使靶细胞具有最高的IL-2反应性,过度表达的CD25则可导致对IL-2反应性的降低。 孔繁强 王志谋 孙蓓 梁东春关键词:CD25 IL-2 T辅助细胞 增殖 PXR基因外显子3甲基化与肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性相关 被引量:3 2013年 孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)可通过调节细胞色素P450同工酶3A4—CYP3A4的表达而影响肿瘤细胞对化疗的敏感性,而其表达水平则会受到自身基因甲基化的影响.本文研究了结肠癌组织中pxr基因甲基化的分布情况及其对pxr,cyp3a4表达的影响,并在多种结肠癌细胞系中分析了pxr基因甲基化是否与5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性相关.收集结肠癌病灶区、癌旁区及正常结肠组织样本,分别提取基因组DNA及RNA.PCR-限制性酶切分析检测pxr基因外显子3甲基化;real-time PCR检测pxr及cyp3a4基因的表达.鉴定LOVO、LS180、LS174T、HT29、HCT116等5种结肠癌细胞中pxr外显子3甲基化与pxr,cyp3a4表达的相关性并分别筛选出PXR高/低表达的细胞株进行5-FU耐药性分析.结果显示,结肠癌病灶组织中pxr外显子3甲基化频率显著增加,伴有pxr,cyp3a4表达的增强.在结肠组织及结肠癌细胞系中,pxr与cyp3a4的表达均密切相关,且均与pxr甲基化程度相关.PXR高表达细胞株LS180对5-FU的耐药性显著升高,以siRNA分别下调pxr及cyp3a4的表达,均可增加LS180对5-FU的敏感性.结果提示,pxr基因外显子3区甲基化与PXR及CYP3A4的高表达密切相关,并与结肠癌细胞对5-FU的抗药性相关. 赵嵘 胡丽玲 孔繁强 左爱军关键词:孕烷X受体 甲基化 5-氟尿嘧啶 天津地区FTO基因rs9939609位点多态性与儿童原发性肥胖的相关性研究 脂肪团与肥胖症相关基因(Fat mass and obesity-associated gene, FTO)对能量摄入及脂肪代谢有显著的调节作用,是迄今发现的与肥胖症关系最为密切的基因。该基因的rs9939609位点具有... 孔繁强关键词:变体 儿童 ^pSP偶联低分子量壳聚糖介导siRNA对靶基因的沉默 被引量:2 2011年 放射性标记针对荧光素酶报告基因(Luc)的siRNA,与不同分子量的壳聚糖(CS)制备成CS/siRNA复合物,转染可稳定表达Luc基因的MDA-MB-231/Luc人乳腺癌细胞系.与较大分子量壳聚糖相比,低分子量壳聚糖(LMWC)与siRNA形成的复合物具有更小的粒径及更强的siRNA转染能力,但是对靶基因的沉默效应却不高.其原因归咎于低分子量壳聚糖(Mr为2 000或5 000,LMWC)与siRNA间强烈的电荷引力限制了siRNA在细胞内的释放.合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的可磷酸化短肽(p SP)与LMWC相偶联,合成p SP-LMWC.分别对siRNA及p SP-LMWC进行FAM及Dabcyl标记,利用FRET技术检测细胞内p SP-LMWC与siRNA的解离.结果表明,p SP修饰可大幅度增加siRNA与LMWC在细胞内的解离,成为有功能的游离形式,从而显著下调靶基因的表达.本文的结果表明,低分子量壳聚糖具有良好的siRNA递送能力,促进其与siRNA在细胞内的解离可有效提高siRNA对靶基因的沉默效应. 周树民 孔繁强 孙蓓 左爱军 梁东春关键词:短肽 小干扰RNA