崔光辉
- 作品数：21 被引量：19H指数：3
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。
- 郭新漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：基质蛋白小鼠胚胎干细胞拟胚体原始生殖细胞
- Lin28调节小鼠胚胎干细胞向原始生殖细胞分化
- 2011年
- 目的探讨小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells，mESCs）向原始生殖细胞（primordial germcells，PGCs）分化过程中特异基因表达变化及可能机制。方法mESCs分化形成拟胚体（embryoid bodies，EBS），不同浓度atRA（1uM，2uM，5uM）持续诱导EBS16h、2d和5d，RT—PCR、和免疫荧光分别检测Lin28和Blimpl以及相应蛋白的表达变化。结果atRA诱导16h的EBs其Lin28mRNA表达量较高，随着诱导时间延长而逐渐降低，Blimpl则无明显变化。WB结果显示EBs的Lin28蛋白表达随诱导时间延长逐渐减弱，而Blimpl蛋白表达逐渐增强。免疫荧光显示Lin28和Blimpl阳性信号均定位于细胞胞浆，其变化特点与WB结果相一致。结论EBs经atRA诱导后可影响Lin28的表达，Lin28和Blimpl的变化并不协调，其蛋白表达随着诱导会随之发生变化。atRA诱导可能使PGCs分化的Lin28低水平表达时期提前出现。
- 郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：小鼠胚胎干细胞生殖细胞
- 诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为雄性生殖细胞
- 目的：探讨诱导小鼠胚胎干细胞成为生精细胞,并最终能够在雄性不育小鼠曲精细管中重建精子发生的有效方法。方法：采用悬滴培养法使表达绿色荧光蛋白的小鼠 XY 型胚胎干细胞形成拟胚体,诱导胚胎干细胞分化为原始生殖细胞。采用酶消化...
- 崔光辉郭新秦洁石敏叶炯贤蔡志明
- 文献传递
- LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中的表达及意义被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中表达情况,以及两者之间的关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系LIN28A、LIN28B和LAMP1表达,免疫荧光检测LIN28A和LAMP1二者蛋白表达定位;LIN28A敲减后通过qRT-PCR检测LAMP1的mRNA表达变化。结果:5个癌细胞系T24、UM-UC3、J82、5637和SW780和正常移行上皮细胞系SV-HUC-1均表达LIN28A,其中J82也表达LIN28B;5个癌细胞系均表达LAMP1,SV-HUC-1不表达LAMP1;LIN28A和LAMP1蛋白均定位在胞浆;LIN28A敲减后对LAMP1的mRNA表达变化无明显影响,相应蛋白变化需要进一步验证。结论:4个膀胱癌细胞系T24、5637、UM-UC3和SW780可以用于LIN28A与肿瘤相关的机制研究,而J82可用于LIN28B的机制研究。LIN28A对肿瘤细胞和干细胞的调控方面可能具有相似性,敲减后对其靶点mRNA表达量无明显影响,LAMP1蛋白可能对肿瘤细胞侵袭转移具有抑制作用。
- 张艳敏秦洁漆正宇龙霞崔光辉郭新
- 关键词：膀胱癌
- 小鼠iPS细胞具备诱导性原始生殖细胞分化潜能的研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞IP14D-1是否具备诱导性原始生殖细胞(induced primordial germcells,iPGCs)分化潜能,以及特异基因表达变化及可能机制。方法:未分化IP14D-1培养扩增,分化形成诱导性拟胚体(induced embryoid bodies,iEBs)。RT-PCR和免疫荧光分别检测4、7、9 d的iEBs中Lin28、Blimp1、Stra8和Mvh的表达变化和蛋白定位情况。结果:未分化IP14D-1同小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)相同,Lin28表达较弱,Blimp1表达相对较强,Mvh和Stra8也在这两种细胞及其相应iEBs和EBs中表达,但均无明显差别。IP14D-1分化形成的iEBs从4 d生长到7 d时,Lin28表达逐渐增强,到9 d时表现为下降,Blimp1表达则随着iEB生长时间延长而逐渐降低。结论:建立了IP14D-1和相应拟胚体(iEBs)的完善、稳定的培养及分化体系;未分化IP14D-1与mESCs在Lin28、Blimp1、Mvh和Stra8表达方面无明显差别;iEB和EBs的Mvh和Stra8表达也无明显差别。IP14D-1及iEBs具有iPGCs分化潜能,且可能是7 d的iEBs内iPGCs分化数量较多,之后进入iPGCs分化的Lin28低表达时期。
- 郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：诱导性多能干细胞原始生殖细胞小鼠
- miR-7在肾癌中的表达及临床意义研究被引量：3
- 2014年
- 目的检测肾细胞癌组织及相应癌旁正常组织中miR-7的表达,分析18达与临床病理特征之间的关系,为进一步研究miR-7在肾癌的发生发展中作用奠定基础。方法收集48例经手术切除的配对肾癌及癌旁组织标本,提取组织中总RNA,经逆转录获得cDNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测标本中miR-7表达量,并通过统计学软件分析其表达量与患者临床病理特征之间的相关性。结果与相应癌旁组织相比,肾癌组织中miR-7表达量明显升高,其中34例(70.8%)肾癌标本miR-7表达上调,14例(29.2%)表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。肾细胞癌中miR-7表达上调与患者年龄、性别、肾癌组织类型、TNM分期、AJCC临床分期无相关性(P>0.05)。结论 miR-7在肾癌组织中明显高表达,提示其可能与肾癌的发生和发展相关,可能成为肾癌早期诊断、治疗乃至预后判断的新的生物标记物。
- 周宝永陈独群余祖虎张强任瑞池泽湃王亚东李彩玲秦洁郭新崔光辉周亮桂耀庭来永庆
- 关键词：微小RNA肾癌TNM分期
- LAMP1在膀胱癌细胞中的表达及对肿瘤细胞迁移的影响
- 2016年
- 目的:探讨溶酶体膜相关蛋白LAMP1(Lysosomal-associated membrane proteins 1,CD107a)在膀胱癌细胞系和正常膀胱上皮细胞系中表达情况,检测其与膀胱癌细胞迁移关系,推测其对膀胱癌进展的影响。方法:采用RT-PCR检测正常膀胱上皮细胞系和膀胱癌细胞系LAMP1表达;免疫荧光明确其蛋白表达定位;采用RNAi方法对LAMP1敲减,然后通过划痕实验检测其对肿瘤细胞迁移影响。结果:膀胱癌细胞系5637和UMUC3均表达LAMP1,正常移行上皮细胞系SV-HUC-1不表达;LAMP1蛋白定位在肿瘤细胞胞浆中;LAMP1敲减后膀胱癌细胞迁移减慢。结论:LAMP1参与膀胱癌发生发展过程,促进癌细胞迁移。
- 潘鹏郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉
- 关键词：膀胱癌细胞
- PcG蛋白EZH2在全反式维甲酸诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在小鼠iPS细胞系IP14D-1向生殖细胞分化过程中的作用。方法将小鼠iPS细胞系IP14D-1通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,1μmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7 d,采用实时RT-PCR、荧光定量RT-PCR、免疫荧光检测atRA处理前后EZH2和生殖细胞分化标志性基因Stra8在iEBs中的表达。结果在atRA诱导IP14D-1来源的iEBs中,EZH2表达在诱导后2 d达到高峰,伴随atRA诱导,EZH2表达减弱;而生殖细胞分化标志性基因Stra8其变化特点与EZH2相反,无atRA诱导时EBs表达Stra8较弱,伴随atRA诱导,Stra8表达增强。EZH2和Stra8阳性信号分别定位于胞膜和胞质,其变化特点与PT-PCP结果相一致。结论 atRA诱导使EZH2低水平表达时期提前出现,伴随Stra8增强表达,启动了小鼠iPS细胞向生殖细胞的分化进程。
- 张艳敏漆正宇郭新崔光辉秦洁
- 关键词：EZH2全反式视黄酸
- 5-Aza-dC在mES细胞向生殖细胞分化中的DNA甲基化调控机制被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)向生殖细胞(Embryonic germcells,EG)分化过程中5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)对DNA甲基化转移酶Dnmt1和Dnmt3a及生殖细胞特征基因Mvh表达变化的DNA甲基化调控机制。方法:将mES细胞分化形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,采用不同浓度(0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,3μmol/L)处理EBs,RT-PCR实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测检测在5-Aza-dC处理前后Dnmt1和Dnmt3a在ES细胞和EBs中的表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测原始生殖细胞分化特征基因Mvh启动子甲基化状态。结果:5-Aza-dC的浓度在0.05μmol/L～1μmol/L之间时,EBs保持较高的存活率而EBs的形态明显发生了变化;5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a在EBs中mRNA表达量明显降低,其变化特点与WB结果相一致。MSP和测序结果显示,Mvh启动子区表现为部分甲基化,5-Aza-dC处理后的4d EBs中Mvh CpG岛有4个CG位点发生突变,而mES细胞中未见突变。结论:EBs经5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a的表达明显下调;同时,Mvh启动子发生部分甲基化,有可能启动了向生殖细胞的分化进程。
- 秦洁漆正宇张艳敏郭新崔光辉桂耀庭
- 关键词：DNA甲基化拟胚体
- Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立
- 2011年
- 目的建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达（Pstra8-EGFP）的逆转录病毒包装细胞株，以方便地将Pstra8-EGFP转导到目的细胞，为生殖细胞鉴定分选提供基础。方法PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段，构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒。将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞，G418抗性筛选后，梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株。以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度，确定高滴度病毒包装细胞株。通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞（mouse bone marrow mesenchymal stemcells，MSCs）验证该细胞株的Pstras8-EGFP转导效果。结果所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1．3×10^6 cfu／ml。MSC经包装细胞培养上清液感染后，在（retinoicacid，RA）诱导下能表达EGFP蛋白。结论成功构建了将Pstras．EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株。
- 漆正宇崔光辉郭新秦洁张艳敏桂耀庭蔡志明
- 关键词：视黄酸间充质干细胞生殖细胞
