张春燕
- 作品数：15 被引量：37H指数：3
- 供职机构：北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
- 2010年
- 背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
- 汪惠赖百塘李伟英杨学惠张春燕韦攀健李金照
- 关键词：野生型P53重组腺病毒
- 银染mRNA差异显示方法的建立和二次扩增参数优化
- 2000年
- 目的 优化银染差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）条件和二次ＰＣＲ扩增参数，建立非放射性ＤＤ－ＰＣＲ方法。方法 采用单碱基锚定引物与１０碱基随机引物组合，对大细胞肺癌细胞系８０１－Ｄ总ＲＮＡ模板进行ＤＤＲＴ－ＰＣＲ，行小体积测序胶电泳，银染呈现扩增产物，在胶上直接切取差异条带后，进行再扩增。结果 银染ＤＤ－ＰＣＲ条件经最适化后，可显著足够数量的条带。随机引物５’末端出现ＧＣ扩增效果明显优于３’末端ＧＣ的出现，银染ＤＤ－ＰＣＲ中ｄＮＴＰｓ需要高浓度。差异条带再扩增时，低浓度上下游引物可防止非特异性扩增。结论 银染差异显示方法简便有效，完全适用于一般的科研应用。
- 张洪涛张春燕
- 关键词：MRNA差异显示银染色法基因扩增大细胞肺癌
- 制备两种P53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
- 2010年
- 目的P53作为转录因子在细胞应激时呈活化型，调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长，通常，通过各种机制P53呈非活化状态，其中包括P53C-末端负调控序列的作用。该研究目的是制备携带垒长和缺失这些负调控序列P53两种重组腺病毒和用流式细胞仪散点图（Flow cytometry scatter plot，FCM）检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）表达。材料和方法利用pAdEasy-Track载体系统，构建两种P53重组质粒并在细菌中产生重组体，转染L293细胞产生三种重组腺病毒。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞，FCM分析GFP表达。结果测序证明重组腺病毒：Ad—P53（del）缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区，Ad—P53（wtp）没有P53碱基缺失。Ad（empty carrier）无P53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端P53和全长p53两种重组腺病毒，Ad—p53（del），Ad-p53（wtp）及空载体Ad-（empty）。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠，可定量外源GFP表达，为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
- 汪惠赖百塘李伟英杨学惠张春燕韦攀健李金照
- 关键词：野生型P53重组腺病毒
- 抗人肺癌噬菌体展示可溶性ScFv的筛选与鉴定及其序列测定
- 2010年
- 目的制备抗人肺癌单链抗体（single chain Fv ferment antibody，ScFv），并对抗体生物学特性进行初步研究。方法以人肺腺癌细胞系A：为抗原，对5F一11杂交瘤细胞噬菌体抗体库进行富集和筛选。以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原，进行酶联免疫吸附试验，从富集后的噬菌体抗体库中筛选出只与A2细胞结合的阳性克隆。筛选的噬菌体克隆转染大肠埃希菌HB2151，得到可溶性单链抗体分泌克隆。可溶性抗体分泌克隆测序。应用ELISA、竞争性ELISA、SDS．PAGE及蛋白质印迹法对其中的2A7．1克隆进行初步鉴定。结果以肺腺癌细胞A2为抗原进行了4轮富集。进一步筛选得到18个仅识别A：细胞而与人淋巴细胞无反应的融合抗体分泌克隆。转染大肠埃希菌HB2151后筛选到能与Az细胞特异结合的可溶性抗体分泌克隆2A7．1。竞争性ELISA结果显示，5F-11能强烈抑制2A7-1与A2细胞的结合。SDS-PAGE蛋白质印迹法显示得到大小约为30X10。的单链抗体。结论通过噬菌体抗体技术成功分离到了鼠单抗5F-11的可溶性ScFv分泌克隆，为进一步的抗体应用研究奠定了基础。
- 岳文涛赖百塘张春燕湛秀萍
- 关键词：细菌噬菌体单克隆肺肿瘤腺癌
- 抗肺腺癌单链抗体的克隆、表达及应用的初步研究
- 目的:制备抗人肺癌单链抗体(Single Chain Fv ferment antibody,ScFv),并对生物学特性进行初步研究。探讨应用该抗体进行免疫导向治疗的可能性。方法:利用RT-PCR方法从5F-11杂交瘤细...
- 岳文涛赖百塘张春燕湛秀萍
- 文献传递
- 脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响被引量：1
- 2005年
- 目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。
- 张立群汪蕙赖百塘岳文涛湛秀萍杨学惠张春燕张同梅
- 关键词：细胞恶性表型FHIT基因流式细胞仪分析免疫组化方法细胞生长曲线细胞体外增殖
- 银染mRNA差异显示方法的建立和二次扩增参数优化被引量：11
- 2001年
- 张洪涛张春燕杨秋格杨学惠
- 关键词：MRNA银染基因扩增参数优化DDRT-PCR
- FHIT转染人肺癌单克隆细胞的建立及对生长的抑制被引量：3
- 2004年
- 目的建立外源FHIT基因转染人肺腺癌细胞A549单克隆细胞系并初步探讨FHIT基因对转染细胞生长的抑制作用。方法构建PEGFP-FHIT真核表达载体，Lipofectamine介导转染A5d9细胞，G418筛选后，有限稀释法建立单克隆细胞系FHIT-A549和PEGFP-A549。通过RT-PCR、免疫组化和荧光显微镜下观察GFP表达来鉴定转染细胞系。细胞集落形成实验研究外源FHIT基因对A549细胞体外生长的抑制作用。结果经PCR、酶切和DNA测序证实PEGFP-FHIT真核表达载体连接正确。RT-PCR表明转染细胞FHIT-A549中有FHITmRNA表达，免疫细胞化学染色FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性，而母系A548细胞和转空载体的PEGFP-A549细胞FHIT基因和蛋白表达阴性。荧光显微镜观察PEGFP-A549细胞可见满视野绿色荧光。FHIT-A549的集落形成率(2．6％)比母系A549细胞(50．1％)和转染空载体PEGFP-A549细胞(53．6％)明显降低(P<0．01)。结论外源FHIT基因在转染的人肺腺癌单克隆细胞系内稳定表达并对细胞的恶性生长有抑制作用。
- 张立群汪蕙赖百塘岳文涛杨学惠张春燕
- 关键词：FHIT基因单克隆转染细胞集落形成人肺癌
- 外源p53对人肺癌细胞生长的抑制被引量：2
- 1998年
- 目的 观察外源性野生型p53对有p53基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用PCR SSCP及DNA测序 ,选择p53突变的人肺巨细胞癌系 80 1 D。构建野生型p53表达质粒PZiP p53。用基因枪介导外源基因。经G41 8筛选得到转染细胞系 80 1 D p53。用PCR检测外源基因 ,观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞系 80 1 D p53体外长期传代有外源性p53基因存在 ,转染细胞生长明显受到抑制 ,集落形成抑制率达 96% ,裸鼠异种移植致瘤性降低 ,肿瘤生长明显缓慢。结论 外源性野生型p53经基因枪导入有p53基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中 ,且明显抑制所转染的癌细胞的恶性生长。
- 汪蕙赖百塘李金照蔡国平杨学惠张春燕刘桂芝韩岩湛秀萍刘晖
- 关键词：细胞系P53基因基因疗法
- 地高辛核酸探针在分支杆菌菌种鉴定中的应用被引量：1
- 1992年
- 地高辛标记的结核分支杆菌全染色体核酸探针膜呈色杂交法的建立,表明该探针显示良好的灵敏度和特异性。此种探针具有效期长、操作方便、反应快速等特性,优于同位素标记探针。其全染色体核酸细胞杂交法可适用于结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌的临床分离株的菌种鉴定。
- 潘毓宣李勍张春燕张健源
- 关键词：探针分支杆菌属核酸地高辛
