张晓磊
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：长春市朝阳区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 吉林省首次分离的流行性腮腺炎野病毒及基因型鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的对吉林省2008年一起流行性腮腺炎(腮腺炎)爆发疫情进行病原学监测,观察是否出现典型的致细胞病变效应(Cytopathic Effect,CPE),并进行病毒核酸和基因型鉴定。方法采集病人的咽拭液,接种于生长良好的Vero/SLAM细胞(淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞),观察是否出现CPE,对三代病毒分离液采用逆转录-聚合酶链反应进行核酸鉴定,采用序列分析进行基因型鉴定。结果在采集到的15份标本中,有3份标本在Vero/SLAM细胞上可见到三种不同的典型CPE,6份标本核酸扩增为阳性,序列分析结果显示均为F基因型。结论在同一起爆发中,由同一株腮腺炎病毒引起的不同腮腺炎病例,虽然核苷酸序列完全一致,但所分离出的病毒在Vero/SLAM细胞上可表现为非常明显的不同类型的CPE。
- 王爽常新周剑惠陈超刘桂艳张晓磊许文波
- 关键词：流行性腮腺炎病毒基因型
- 吉林省急性弛缓性麻痹病例中人肠道病毒71型VP_1编码区基因特征分析
- 2012年
- 目的了解吉林省急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例中,人肠道病毒71型(Human Enterovirus Type71,HEV71)VP1编码区的基因特征。方法 原始粪便标本来自吉林省2006～2007年<15岁儿童AFP病例,采用人横纹肌肉瘤(Human Rhabdom yosarcoma,RD)细胞进行病毒分离,阳性标本用肠道病毒(Enterovirus,EV)组合血清和HEV71特异性血清进行血清型鉴定,鉴定结果为HEV71的毒株,利用VP1编码区特异性引物,通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polym erase Chain Reaction,RT-PCR)扩增全长VP1编码区片段,并进行核苷酸序列测定,序列结果利用Bioedit软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,用MEGA软件建立基因进化树并进行基因亲缘关系分析。结果 176例AFP病人中共分离到4株HEV71,血清型由HEV71特异性血清中和试验确定,并通过分子生物学方法 进一步证实。4株HEV71的VP1编码区核苷酸同源性为96.6%～100%,氨基酸同源性为98.3%～100%;与2009～2010年吉林省手足口病(Hand,Footand Mouth Disease,HFMD)患者中分离到的HEV71毒株核苷酸同源性为96.2%～98.8%,氨基酸同源性为98.3%～99.3%;与2008年分离于安徽省阜阳HFMD患者中的C4a进化分支代表株EU703813-Fuyang-08/2-C4的核苷酸同源性为96.5%～98.8%,氨基酸同源性为98.3%～99.3%;与1998年广东省深圳HFMD患者中分离到的C4b进化分支代表株AF302996-SHZH98(Shenzhen,深圳)-C4的核苷酸同源性为92.1%～93.1%,氨基酸同源性为96.2%～97.3%。构建的基因进化树显示,4株病毒均位于C4a进化分支。结论吉林省2006年和2007年AFP病例中分离到的HEV71属于C4基因亚型的C4a进化分支;通过与近年来吉林省HFMD患者中分离到的HEV71毒株以及基因数据库(GenBank)中的HEV71相比较,未见AFP病例中分离到的HEV71与HFMD病例中分离到的HEV71在VP1编码区核苷酸水平上有明显差别。
- 候祥刘桂艳周剑惠陈超常新王爽魏雷雷林琳张勇张晓磊
- 关键词：急性弛缓性麻痹病例人肠道病毒71型基因特征
- 吉林省急性弛缓性麻痹病例和健康人群中柯萨奇病毒A组4型的基因特征分析被引量：4
- 2012年
- 目的了解吉林省2006年和2008年急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例和健康人群中分离到的柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus Group A Type4,CVA4)的基因特征,探索特定血清型肠道病毒(Enterovirus,EV)与AFP病例之间的关系。方法 从75例AFP病例和60例边境地区健康人群中采集原始粪便标本,使用人横纹肌肉瘤(Human Rhabdom yosarcom a,RD)细胞和人喉癌(Human Laryngeal Carcinoma,Hep-2)上皮细胞进行病毒分离,阳性标本用EV组合血清进行中和试验鉴定血清型,未能定型的标本用EVVP4-VP2蛋白编码区引物通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)进行扩增,扩增阳性标本通过基因序列分析鉴定血清型。从中挑选CVA4扩增全长VP1编码区片段并进行核苷酸序列测定和分析,测序结果利用Bioedit软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,用Mega软件建立基因进化树,进行基因亲缘关系分析。结果使用RD细胞从AFP病例粪便标本中分离到5株CVA4,从健康人群粪便标本中分离到4株CVA4。这9株病毒用EV组合血清均无法定型,经过VP4-VP2测序的方法 鉴定为CVA4。9株病毒VP1编码区的核苷酸和氨基酸同源性分别为88.3%～100%和98%～100%,与CVA4原型株CVA4/HighPoint(海波因特)/USA(美国)/1950的核苷酸和氨基酸同源性分别为83.3%～85.6%和97.7%～98.6%。其中4株来自AFP病例的病毒具有高度的基因同源性(99.6%～100%),这4株病毒与来自健康人群的病毒比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为88.3%～88.9%和98.0%～98.6%。在基因进化树上显示,这4株来自AFP病例的CVA4构成一个独立的分支。结论基因进化分析表明,4株来自AFP病例的毒株VP1编码区的基因特征,与来自健康人群的毒株的基因特征显著不同。
- 刘桂艳周剑惠陈超杜占森常新王爽魏雷雷林琳王晶张勇张晓磊
- 关键词：急性弛缓性麻痹病例基因特征
- 流行性腮腺炎病毒疏水蛋白基因一步法逆转录-聚合酶链反应检测方法的建立
- 2010年
- 目的建立一种简便、快速的鉴定流行性腮腺炎病毒(Mumps Virus,MuV)基因的方法,即一步法逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)。方法在MuV小疏水蛋白(Small-hydrophobin Protein,SH)基因两端设计引物,同时对所建立的一步法RT-PCR方法进行敏感性和特异性实验。结果一步法RT-PCR方法至少能检测出MuV100.7TCID50(Median Tissue Culture Infective Dose,50%组织培养感染剂量),5株MuV均呈阳性,而4株非MuV呼吸道病毒RT-PCR结果均未见阳性条带。结论一步法RT-PCR是一种快速、简便的鉴定MuV SH基因的方法。
- 常新周剑惠王爽刘桂艳陈超张晓磊崔爱丽许文波
- 关键词：流行性腮腺炎病毒敏感性特异性
- 麻疹病毒H_1和H_2基因型快速鉴定方法的改进被引量：5
- 2009年
- 目的简化麻疹病毒H1和H2基因型快速鉴定方法的步骤,使之操作更加简单快速。方法将逆转录-套式聚合酶链反应(Reverse Transcription-Nested Polymerase Chain Reaction,RT-nPCR)改进为一步法RT-PCR,使用原方法中的一对内引物,将扩增后的PCR产物用限制性片段长度多态性分析进行基因型鉴定,同时电泳检测也用较安全的荧光染料GeneFinder代替了有致癌性的溴化乙锭染色。结果该研究中使用的已知为H1基因型的3株麻疹病毒,其核酸全部能被改进的一步法RT-PCR有效扩增,并且PCR产物被内切酶SalⅠ有效切开,而且保持了原方法较好的敏感性和特异性。结论改进的麻疹病毒H1和H2基因型快速鉴定方法是一种更加快速、简便又实用的基因定型方法。
- 周剑惠杜占森王爽陈超常新刘桂艳张晓磊许松涛姬奕昕许文波
- 关键词：麻疹病毒逆转录-聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析基因型
- 麻疹野病毒的分离鉴定及病毒分离的影响因素被引量：1
- 2009年
- 目的确定吉林省近年流行的麻疹病毒基因型,分析麻疹野病毒分离的影响因素,为防控措施的制定及做好麻疹病原学检测提供参考依据。方法利用Vero/Slam细胞对114份麻疹咽喉拭子标本进行麻疹病毒分离,用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法扩增麻疹病毒核酸并进行基因型鉴定;统计分析不同采样时间、不同咽试子保存液对麻疹病毒分离的影响。结果114份麻疹咽喉拭子标本中分离到麻疹病毒31株,经鉴定均为H1基因型,出疹2 d内的标本分离率较高,为38.09%。2%DMEM维持液作为咽拭子保存液的病毒分离成功率为30.69%。0.9%生理盐水作为保存液的病毒分离率为0。结论H1基因型麻疹病毒为吉林省近年流行的主要优势基因型,麻疹病毒的成功分离取决于采样时间、好的标本质量以及正确标本保存液。
- 常新王爽周剑惠刘桂艳陈超张晓磊程涛田鑫
- 关键词：麻疹病毒影响因素
