李军亮
- 作品数：21 被引量：82H指数：5
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人参皂甙Rb1对脑缺血再灌注损伤半影区葡萄糖转运体1表达的影响被引量：14
- 2005年
- 目的 观察大鼠局灶性脑缺血 /再灌注后脑梗死体积的变化和葡萄糖转运体 1(GLUT1)在缺血半影区的表达情况以及人参皂甙Rb1对其的影响。方法 雄性成年SD大鼠 42只 ,随机分成 3组 :假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组。用线栓法复制大脑中动脉阻塞 (MA CO)模型 ,在脑缺血 1h再灌注 5h时取材 ,用氯化三苯基四唑氮 (TTC)染色后 ,全自动图像分析系统进行图像分析脑梗死体积比 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定GLUT1mRNA水平的变化 ;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果 假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组的梗死体积百分比分别为 0、(0 .0 4± 0 .0 1) %和 (0 .0 2± 0 .0 1) % ;3组半影区的GLUT1mR NA水平分别是 (0 .2 3± 0 .14 )、(0 .5 5± 0 .0 4)和 (0 .79± 0 .19) ;蛋白表达的PU值分别为 (5 .1±1.2 )、(13 .1± 1.7)和 (19.0± 1.9)。结论 人参皂甙Rb1明显缩小缺血再灌注损伤后脑梗死的体积 ,Rb1通过上调半影区GLUT1表达以维持脑组织的能量供给可能是其发挥脑保护作用的机制之一。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：人参皂甙RB1GLUT1葡萄糖转运体脑缺血再灌注损伤逆转录一聚合酶链反应
- 葡萄糖转运体3在大鼠脑缺血/再灌注后海马中的表达被引量：1
- 2005年
- 【目的】研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、海马区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。【方法】健康雄性 SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成3组:①缺血1h 再灌注组(MCAO1h/R)28只;②缺血3h 再灌注组(MCAO3h/R)24只;③假手术组(pseudo operation)4只。用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用 Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取海马区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定 GLUT3 mRNA 水平的变化;用免疫组织化学半定量测定 GLUT3蛋白水平的变化。【结果】脑缺血1h 后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h 再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小。MCAO1h/R 组:GLUT3 mRNA 在6h 有1次升高,但以后各时相均低于正常对照组。MCAO3h/R 组:各时间点 GLUT3 mRNA 的表达均低于正常对照组,在72h、1周不能测到GLUT3 mRNA 的表达。GLUT3蛋白水平的表达与 mRNA 相符合。MCAO3h/R 组与 MCAO1h/R 组在相应的各时间点比较,GLUT3 mRNA 降低幅度差异有统计学意义。【结论】GLUT3在缺血海马区的表达下降,可能与脑缺血再灌注损伤后神经元退变或死亡有关。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血-再灌注RT-PCR
- 大鼠GLUT1真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:构建大鼠葡萄糖转运体1(GLUT1)的真核表达载体。方法:以RT-PCR方法从大鼠脑组织中 获取GLUT1全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)- Glutl,随后用lipofectamineTM2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫 组化的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果:以构建的重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glutl转染293细 胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体1的表达。结论:成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体1的真 核表达载体pcDNA3．1(+)-Glutl,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因,为进一步研究外源性GLUT1表达对 缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定了基础。
- 李方成李军亮刘然义吴中华张培峰刘安民
- 关键词：葡萄糖转运体1真核表达脑缺血293细胞免疫组织化学
- 胶质瘤细胞的生长速度与葡萄糖摄取的关系被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨胶质瘤细胞的生长速度与葡萄糖转运系统的关系。方法 用C6细胞克隆培养得到不同细胞形态、不同生长速率的细胞株。Northernblot和Westernblot检测生长最慢的C61细胞和最快的C64 细胞葡萄糖转运体 1(GLUT1)mRNA表达及其蛋白水平 ;同时检测其葡萄糖摄取率。结果 C6胶质瘤细胞克隆培养产生C61、C62 、C63 、C64 4种细胞 ,4种细胞的生长速度不同 ,C64 细胞的生长速度约为C61细胞的 8倍。C6胶质瘤细胞的克隆细胞株主要表达GLUT1,C64 细胞比C61细胞的GLUT1mRNA水平明显增加 ,条带的吸光度分析显示C64 细胞的GLUT1蛋白水平约为C61细胞的 3倍 [(3 10± 2 1) % ,P <0 .0 0 1]。葡萄糖摄取率以每分钟液闪次数计 :C64 细胞 (7680± 180 ) /min·10 4cells ;C61细胞 (3 0 0 0± 12 5 ) /min·10 4cells ,C64 细胞约为C61细胞的2 .5倍。结论 葡萄糖转运系统与葡萄糖摄取相匹配 ,与胶质瘤细胞的生长密切相关。
- 李方成余进陶宗玉李军亮林吉惠
- 关键词：胶质瘤细胞葡萄糖脑胶质瘤
- 后颅窝炎性肌纤维母细胞瘤一例
- 2007年
- 患者女,41岁。因头痛,头晕,双下肢乏力3个月于2005年6月入院。体检：一般情况良好,颅神经检查正常,肌力、肌张力正常,无共济失调,病理反射未引出。头颅CT示：第四脑室内一类圆形占位,均匀一致稍高密度影,大小4．5cm×3．5cm×3cm,无钙化,边界清楚;MRI平扫加增强（图1）：小脑蚓部占位性病变,考虑为室管膜细胞瘤或胶质瘤,中度脑积水。行后颅窝正中入路肿瘤切除术,术中见肿瘤位于小脑蚓部,类圆形,大小约4．5cm×3．5cm×3cm,表面淡红色。基底部与枕大孔区硬脑膜粘连,血供主要来自硬脑膜。肿瘤质韧,予分块切除。术后1周复查CT（图2）：枕部颅骨缺损,局部可见脑膜膨出,未见肿瘤残余。
- 蔡望青刘安民陈家祥黄碧萍李军亮钟伟健
- 关键词：炎性肌纤维母细胞瘤后颅窝肿瘤切除术占位性病变头颅CT小脑蚓部
- Box-siRNA预先给药对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨B细胞淋巴瘤相关X蛋白基因-双链RNA(Bax-siRNA)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法SD大鼠66只,体重290～310 g,随机分成3组：假手术组(S组,n=6)、局灶性脑缺血再灌注组(C组,n=30)、局灶性脑缺血再灌注+Bax-siRNA组(B组,n=30)。C组、B组行大脑中动脉阻断,阻断1h再开放,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,B组在缺血前即刻、16、24 h水压法尾静脉注射Bax-siRNA 2．5 mg／kg(用PBS稀释至10ml),C组给予等量PBS,S组只作切口,不作缺血再灌注。B组、C组分别于再灌注1、5、11、23、47 h各处死6只大鼠,S组实验后23 h处死大鼠,断头取脑,计算脑梗塞体积比,用RT-PCR法测定脑缺血半影区Bax mRNA表达水平。结果B组、C组再灌注11 h时脑梗塞体积比达到高峰,再灌注23 h时B组、C组脑梗塞体积比均高于S组(P＜0．01)；与C组比较,B组脑梗塞体积比缩小(P＜0．05)。S组和B组Bax mRNA无表达,C组再灌注23 h时Bax mRNA表达强于S组。结论Bax-siRNA预先给药可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。
- 叶西就赖东明李方成李军亮曹铭辉彭书崚
- 关键词：B细胞双链再灌注损伤
- 异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用被引量：8
- 2005年
- 目的研究异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法SD大鼠90 只,体重290-310 g,随机分成3组,异丙酚组(P组,n=42);生理盐水组(NS组,n=42);假手术组(S 组,n=6)。NS、P组采用线栓法(尼龙线栓插入颈外动脉)制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,P组在缺血前10min腹腔注射异丙酚10mg/100 g,NS组给予等量生理盐水;S组只作切口,不作颈总动脉插线。P和NS组分别在再灌注即刻、2 h、5 h、11 h、23 h、71 h、1周,处死6只大鼠,断头取脑,S组于再灌注11 h断头取脑,制作脑片,计算脑梗塞体积比;测定缺血半影区GLUT1 mRNA及蛋白表达水平。结果与S组相比,P、NS组再灌注各时点脑梗塞体积比增大;P组再灌注各时点梗塞体积小于NS组(P<0.05或0.01)。P、NS组缺血半影区GLUT1 mRNA及蛋白表达从再灌注即刻开始升高,23 h达高峰;P组再灌注各时点缺血半影区均高于NS组,P、NS组GLUT1 mRNA及蛋白表达再灌注各时点均高于S组(P<0.05或0.01)。结论异丙酚对大鼠缺血再灌注损伤有一定保护作用,上调缺血半影区GLUT1的表达是其机制之一。
- 叶西就李方成陶宗玉刘安民曹明辉李军亮
- 关键词：再灌注损伤单糖转运蛋白质类脑缺血再灌注损伤模型异丙酚蛋白表达水平GLUT1
- 血卟啉单甲醚光动力治疗对人胶质瘤细胞U87-MG抗原加工相关转运体1的影响被引量：5
- 2010年
- 目的 观察光动力学疗法（PDT）对人胶质瘤细胞株U87-MG抗原加工相关转运体1（TAP1）表达的影响.方法 CCK-8法确立光敏剂最适浓度.实验随机分为5组：A、B、C、D组细胞与光敏剂避光孵育2h后,接受激光照射,能量密度分别0、1.2,2.4A.2J/cm2；E组未予处理（无光敏剂、无激光）.PDT后2、12 h分别收集细胞,实时定量聚合酶链反应（realtime-PCR）检测；12、24 h提取蛋白,进行Western blot分析.结果 处理后TAP1基因转录水平明显升高：2h时,1.2、2.4A.2 J/cm2组分别上调11.070、5.925、4.175倍；12h时,分别上调10.400、4.560、4.023倍.TAP1蛋白在PDT后12 h,0、1.2、2.4、4.2 J/cm2组分别上调1.17、2.65、1.92、1.37倍；24 h,分别上调1.13、2.43、2.38、2.09倍,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 PDT上调TAP1基因的转录和表达,并呈剂量依赖性和时间依赖性,从而增强肿瘤细胞抗原处理及提呈能力.
- 张善义李军亮许新科郑眉光温铖彩李方成
- 关键词：胶质瘤光动力治疗血卟啉单甲醚
- 大鼠葡萄糖转运体3真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)的真核表达载体,为进一步研究葡萄糖转运体3对缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定基础。方法以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从大鼠脑组织中获取GLUT3全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glut3,随后用LipofectarnineTM 2000介导转染HEK293细胞,以 RT-PCR的方法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫组织化学的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果克隆的大鼠GLUT3全长cDNA大小约1．5 kb且无碱基突变,以构建的重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glut3转染293细胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体3的表达。结论成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体3的真核表达载体pcDNA3．1(+)-Glut3, 且证实其可在293细胞中成功表达目的基因。
- 李方成李军亮刘然义吴中华张培峰
- 关键词：葡萄糖转运体真核表达脑缺血
- 大鼠脑缺血/再灌注过程中脑型葡萄糖转运体在缺血半影区的表达被引量：9
- 2005年
- 【目的】研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区脑型葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。【方法】用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1、GLUT3mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1、GLUT3蛋白水平的变化。【结果】脑缺血1h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小。MCAO1h/R组GLUT1、GLUT3mRNA缺血后升高,24h到达高峰,但GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大。MCAO3h/R组GLUT1在3h开始升高,24h到高峰;GLUT3在缺血3h有一下降点,然后升高,24h到高峰,一周恢复正常,同样GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大。MCAO3h/R组较MCAO1h/R组的GLUT1、GLUT3峰值低。GLUT1、3蛋白水平的表达与mRNA相符合。【结论】GLUT1、GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注损伤的保护性反应。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血-再灌注葡萄糖转运体1
