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杨宇虹
作品数:
10
被引量:20
H指数:3
供职机构:
中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
上海市科学技术委员会资助项目
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相关领域:
生物学
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合作作者
李伯良
中国科学院上海生命科学研究院生...
江智红
中国科学院上海生命科学研究院生...
吴祥甫
中国科学院上海生命科学研究院生...
杨新颖
中国科学院上海生命科学研究院生...
王德宝
中国科学院上海生命科学研究院生...
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作者
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李伯良
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病毒学报
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年份
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2001
1篇
2000
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1998
1篇
1997
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大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶在昆虫细胞中的活性表达
被引量:2
1998年
将编码大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶(PHM)cDNA基因,插入昆虫杆状病毒转移表达载体pBacPAK8,构建成表达质粒pBacPHM2,与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组,得到在核多角体蛋白基因启动子控制下的PHM基因的重组病毒BacPHM。用BacPHM感染Sf21细胞,无血清培养上清在72小时后检测到酰胺化酶最高活力;用细胞免疫组化法和免疫印迹法检测表达产物,胞内及胞外培养上清液中均显示有约41kD的PHM表达产物,胞内、胞外产量分别约为5μg/105细胞数、1μg/ml培养基/105细胞数,且分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。
江智红
黄荣
杨宇虹
吴祥甫
李伯良
王德宝
关键词:
酰胺化
核多角体病毒
活性表达
PHM
酰胺化酶基因及其表达活性产物对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的酰胺化酶基因及其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的活性表达产物。通过原位杂交及PCR方法,从大鼠脑cDNA库中,筛选到3个大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)基因片段,经点突变、PCR重组技术,拼接出rP...
李伯良
江智红
夏其昌
杨新颖
屠红
杨宇虹
文献传递
大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用
被引量:7
1998年
将大鼠脑cDNA库来源的PAM基因片段,经克隆重组,构建成真核表达质粒pSVPAM,并转染CHO细胞,获得在CHO中稳定表达活性型α酰胺化酶的细胞株DGAE。表达产物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明,以αNacetylTyrValGly为底物,该酶催化反应的Km为125μmol/L,Vmax为180μmol/mg/h,而且催化反应中表现有最适铜离子浓度和pH值范围。表达的双功能酶可直接用于合成的多肽和基因工程表达产物的酰胺化加工修饰。
江智红
杨宇虹
徐来根
杨新颖
夏其昌
李伯良
王德宝
关键词:
酰胺化
CHO细胞
多肽合成
一种活性重组酰胺化酶及其对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的C端酰胺化酶基因在昆虫细胞中的活性表达。将编码大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)的氧化酶结构域(PHM)cDNA插入昆虫杆状病毒转移表达载体,并通过同源重组得到在昆虫细胞中表达活性PHM的重组病毒。...
李伯良
江智红
吴祥甫
杨宇虹
杨新颖
黄荣
陈虎
文献传递
一种活性重组酰胺化酶及其对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的C端酰胺化酶基因在昆虫细胞中的活性表达。将编码大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)的氧化酶结构域(PHM)cDNA插入昆虫杆状病毒转移表达载体,并通过同源重组得到在昆虫细胞中表达活性PHM的重组病毒。...
李伯良
江智红
吴祥甫
杨宇虹
杨新颖
黄荣
陈虎
文献传递
酰胺化酶基因及其表达活性产物对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的酰胺化酶基因及其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的活性表达产物。通过原位杂交及PCR方法,从大鼠脑cDNA库中,筛选到3个大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)基因片段,经点突变、PCR重组技术,拼接出rP...
李伯良
江智红
夏其昌
杨新颖
屠红
杨宇虹
文献传递
一种活性重组酰胺化酶及其对多肽的酰胺化修饰应用
李伯良
江智红
杨宇虹
杨新颖
吴祥甫
黄荣
陈疡
本发明涉及一种大鼠来源的C端酰胺化酶基因在昆虫细胞中的活性表达。将编码大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)的氧化酶结构域(PHM)CDNA插入昆虫杆状病毒转移表达载体,并通过同源重组得到在昆虫细胞中表达活性PHM的重组病毒。...
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基因重组
多肽
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