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江智红
作品数:
18
被引量:36
H指数:3
供职机构:
中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
生物学
农业科学
医药卫生
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合作作者
李伯良
中国科学院上海生命科学研究院生...
杨宇虹
中国科学院上海生命科学研究院生...
杨新颖
中国科学院上海生命科学研究院生...
王德宝
中国科学院上海生命科学研究院生...
夏其昌
中国科学院上海生命科学研究院生...
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2篇
2001
1篇
2000
2篇
1999
4篇
1998
4篇
1997
1篇
1994
共
18
条 记 录,以下是 1-10
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被引量排序
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PAM信号肽引导的昆虫细胞表达外泌系统
江智红
李伯良
关键词:
巨噬细胞集落刺激因子
大肠杆菌
克隆
生物学活性
人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶N端片段在大肠杆菌中的表达
1999年
目的:重组表达人ACAT的N端片段。方法:将编码ACAT氨基末端包含第一个跨膜区(1~196aa)的cDNA片段克隆至不同的大肠杆菌表达载体中,构建了多种大肠杆菌表达质粒,再转化至大肠杆菌中进行表达研究。结果和结论:在详细摸索表达条件的基础上,经温敏诱导,成功地在大肠杆菌AR68中表达了N端融合proteinABCdomain的人ACAT氨基末端包含第一个跨膜区的片段,表达量约20mg/L菌液。为进一步表达完整的ACAT蛋白。
叶治家
程天民
江智红
李伯良
关键词:
基因表达
大肠杆菌
ACAT
大鼠甘氨肽酰化单氧酶基因的克隆、表达和基因工程表达酰胺化修饰体系的研究
江智红
关键词:
活性表达
基因工程表达
酰胺化酶基因及其表达活性产物对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的酰胺化酶基因及其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的活性表达产物。通过原位杂交及PCR方法,从大鼠脑cDNA库中,筛选到3个大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)基因片段,经点突变、PCR重组技术,拼接出rP...
李伯良
江智红
夏其昌
杨新颖
屠红
杨宇虹
文献传递
大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶在昆虫细胞中的活性表达
被引量:2
1998年
将编码大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶(PHM)cDNA基因,插入昆虫杆状病毒转移表达载体pBacPAK8,构建成表达质粒pBacPHM2,与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组,得到在核多角体蛋白基因启动子控制下的PHM基因的重组病毒BacPHM。用BacPHM感染Sf21细胞,无血清培养上清在72小时后检测到酰胺化酶最高活力;用细胞免疫组化法和免疫印迹法检测表达产物,胞内及胞外培养上清液中均显示有约41kD的PHM表达产物,胞内、胞外产量分别约为5μg/105细胞数、1μg/ml培养基/105细胞数,且分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。
江智红
黄荣
杨宇虹
吴祥甫
李伯良
王德宝
关键词:
酰胺化
核多角体病毒
活性表达
PHM
易于基因产物加工和快速纯化的融合表达载体
被引量:5
1994年
从Protein A基因酶切分离出编码完整的结合IgG的B、C区域(PABC)的相应DNA片段,克隆进噬菌体M13。通过人工合成寡聚核苷酸引物,突变修饰B、C区域内分别含有的羟胺裂解位点,变Asn-Gly为Asn-Ala。利用突变修饰后的PBACm编码基因片段,构建了一组含有不同阅读框架的融合蛋白表达载体。进一步分别重组克隆了含人工合成的人胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、人和牛生长激素释放因子(GRF)等基因的表达质粒,在大肠杆菌中高效表达出PABC-IGF-Ⅰ、PABC-hGRF、PABC-bGRF及其衍生型融合蛋白。经SDS-PAGE测定分析,每立升摇瓶的融合蛋白产量可达100mg以上。上述高效表达的PABC融合蛋白,通过固相亲和层析柱一步分离,获得SDS-PAGE鉴定为近均一分子量纯化的PABC融合表达产物。
李伯良
杨新颖
江智红
胡明
梁镇和
关键词:
蛋白A
点突变
人隆钙素的融合表达、快速纯化和体外酰胺化加工
杨宇虹
陈虎
江智红
俞超
崔大数
关键词:
快速纯化
文献传递
肽的α-酰胺化研究进展
被引量:1
1998年
α酰胺化是神经和内分泌系统中许多生物活性肽重要的翻译后加工过程,由酰胺化酶PAM催化完成.PAM是一个双功能酶,含有两个催化结构域:PHM和PAL,顺序催化酰胺化两步反应.PAM的mRNA和蛋白质具有多样性.作为活性肽生物合成途径中的限速酶,PAM的表达及活力水平具组织特异性,受激素及发育中的相关因素的调节.
江智红
李伯良
关键词:
双功能酶
大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用
被引量:7
1998年
将大鼠脑cDNA库来源的PAM基因片段,经克隆重组,构建成真核表达质粒pSVPAM,并转染CHO细胞,获得在CHO中稳定表达活性型α酰胺化酶的细胞株DGAE。表达产物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明,以αNacetylTyrValGly为底物,该酶催化反应的Km为125μmol/L,Vmax为180μmol/mg/h,而且催化反应中表现有最适铜离子浓度和pH值范围。表达的双功能酶可直接用于合成的多肽和基因工程表达产物的酰胺化加工修饰。
江智红
杨宇虹
徐来根
杨新颖
夏其昌
李伯良
王德宝
关键词:
酰胺化
CHO细胞
多肽合成
一种活性重组酰胺化酶及其对多肽的酰胺化修饰应用
本发明涉及一种大鼠来源的C端酰胺化酶基因在昆虫细胞中的活性表达。将编码大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)的氧化酶结构域(PHM)cDNA插入昆虫杆状病毒转移表达载体,并通过同源重组得到在昆虫细胞中表达活性PHM的重组病毒。...
李伯良
江智红
吴祥甫
杨宇虹
杨新颖
黄荣
陈虎
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