杨立桃
- 作品数：63 被引量：272H指数：10
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程一般工业技术更多>>
- 可用于转基因产品检测中的核酸体外等温扩增技术分析被引量：4
- 2010年
- 随着生物技术的快速发展,越来越多的核酸体外扩增技术应用于分子生物学研究领域。根据是否依赖于温度循环,核酸体外扩增技术可分为非等温和等温扩增两大类。核酸体外等温扩增技术由于其有快速、灵敏、不需要特殊仪器等优点,逐渐显示出其广泛应用的潜力。重点介绍了现有的几种核酸体外等温扩增技术的原理、特点及应用,并特别关注这些方法在转基因产品检测中的应用。
- 张建中官小燕张海波杨立桃
- 关键词：环介导等温扩增滚环扩增
- 转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法
- 本发明公开了一种转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，包括以下步骤：合成引物及与引物配合使用的荧光探针，上游引物的核苷酸序列如SEQID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO...
- 张大兵杨立桃石建新郭金超饶军
- 文献传递
- 普通牛及其近缘种特异性序列筛选及环介导等温扩增检测方法
- 2020年
- 近年来,肉制品掺假事件频频发生,亟需建立快速、可靠的肉制品动物源性成分检测方法,保障肉类食品安全。与常规PCR等检测方法相比,环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法具有高特异性、高灵敏度、反应快、易操作等优势。基于此,利用生物信息算法筛选普通牛及其近缘种(牦牛、水牛、美洲野牛)的全基因组序列,以获得种间相似性序列,进而建立并优化可用于检测普通牛及其近缘种成分的特异性LAMP方法。最终优化后的LAMP反应体系为:10μmol·L-1外引物F3和B3各0.25μL,10μmol·L-1内引物FIP和BIP各2μL,2 mmol·L-1 dNTP 2.5μL,25 mmol·L-1 MgSO4 4μL,5 mol·L-1甜菜碱3.5μL,8.0 U·μL-1 Bst DNA聚合酶1μL,10×ThermoPol Buffer 2.5μL,DNA模板2μL,加双蒸水至25μL;LAMP反应条件为:65℃恒温扩增1 h,80℃10 min。在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ荧光染料后,检测结果可用肉眼直接观察。优化后的LAMP方法在1 h内能特异性地检测出普通牛、牦牛、水牛及美洲野牛成分,检测灵敏度达到0.020 ng·μL-1,且可特异性地检测出市售肉制品中含有牛肉成分的样品。研究所建立的LAMP方法具有高特异性、高灵敏度、反应快速、操作简便和无需精密仪器等特点,可应用于肉制品中普通牛及其近缘种成分的实际检测,为我国肉类食品安全提供了有力保障。
- 瞿展贾犇杨立桃
- 关键词：环介导等温扩增
- 一种牛源性成分的LAMP检测引物组、试剂盒和方法
- 本发明公开了一种牛源性成分的LAMP检测引物组及检测方法。该方法包括以下步骤：1)设计合成引物；所述引物由上游内部引物FIP、下游内部引物BIP、上游外部引物F3和下游外部引物B3组成，所述引物的碱基序列如SEQ ID ...
- 杨立桃瞿展李荣徐文婷张大兵
- 转基因“华番一号”番茄的筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法被引量：13
- 2005年
- 为给转基因植物监测提供技术支持 ,建立了转基因“华番一号”番茄筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。转基因“华番一号”的筛选PCR检测主要以转基因通用元件CaMV35S启动子和NOS终止子为目的基因片段 ,特异性PCR检测以转基因外源重组子的CaMV35S启动子和反义EFE基因的相邻序列为目的片段 ;实验同时设立番茄的LAT5 2基因为转基因番茄定性、定量PCR检测的内对照基因。在所建立的PCR检测体系中 ,定性PCR筛选和特异性检测的检测极限为 6 8个拷贝 ,实时定量PCR方法的检测极限为 3个拷贝 ;筛选定量PCR检测的定量极限为 3个拷贝 ,特异性定量PCR检测的定量极限为 2 5个拷贝。最后通过对 2个已知含量的转基因番茄“华番一号”混合试样的检测 ,证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性、定量PCR检测。
- 杨立桃赵志辉申慧峰潘爱虎张大兵
- 关键词：实时定量PCRMVNOS反义转基因番茄
- H5、H7、H9亚型禽流感病毒的实时荧光定量PCR检测方法
- 一种H5、H7、H9亚型禽流感病毒的实时荧光定量PCR检测方法，属于生物工程技术领域。本发明包括如下步骤：标准分子的构建；病毒特异性定量PCR引物和探针设计；病毒样本RNA的提取；对提取的样本RNA进行反转录聚合酶链式反...
- 张大兵杨立桃熊静静潘爱虎尹长松
- 文献传递
- 转植酸酶基因玉米外源基因插入位点旁侧序列及检测方法
- 本发明公开了一种转植酸酶基因玉米外源基因插入位点旁侧序列及检测方法，所述旁侧序列为3’端旁侧序列，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述检测方法包括以下步骤：提取玉米基因组DNA模板；依据SEQ？ID？No.1中...
- 张大兵杨立桃石建新郭金超饶军
- 文献传递
- 基于毛细管凝胶电泳检测的微滴聚合酶链式反应分析方法
- 一种生物基因检测技术领域的基于毛细管凝胶电泳检测的微滴聚合酶链式反应分析方法，通过多重模板的合成、通用微滴PCR扩增以及毛细管凝胶电泳分析得以实现。本发明可做为生物学研究中高通量DNA分子分析的一种手段，对多个DNA分子...
- 杨立桃张大兵郭金超
- 文献传递
- 利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数被引量：57
- 2005年
- 为分析转基因水稻外源基因拷贝数 ,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因 (GUS和HPT基因 )和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了 14株T0 代的转基因水稻植株 ,得到了外源基因插入分别为 1、2、3和 4的转基因植株 ,同时利用SouthernBlot方法进行验证分析。随机选择 18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株 ,用SouthernBlot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数 ,SouthernBlot分析结果显示有 15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的 ,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于SouthernBlot的分析结果 ,主要原因是SouthernBlot方法在同一个插入位点有多拷贝的T -DNA片段插入时 ,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段 ,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生 ,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。
- 杨立桃赵志辉丁嘉羽张承妹贾军伟张大兵
- 关键词：拷贝数实时荧光定量PCR外源基因DNA片段转基因水稻转基因植株
- 主要转基因植物及其产品的PCR检测方法研究
- 为保障我国农业转基因生物标识制度的实施，本文从2个方面开展相关研究：我国主要商业化种植和生产的转基因植物及其产品的定性、定量PCR检测方法、新型核酸定量检测方法(AUDP—PCR)建立及其在转基因检测中的应用。
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- 杨立桃
- 关键词：转基因植物转基因产品PCR检测核酸定量检测RNA序列
