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基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立: gp41是HIV-1表面的包膜糖蛋白(Env)成分，介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合，在HIV-1的侵染过程中起关键作用。gp41中的N末端重复序列（NHR）和C末端重复序列（CHR）通过相互作用形成关键的核心三聚体发夹...; 水小溪刘晨郑智慧路新华张华贺建功; 关键词：哺乳动物高通量筛选模型; 文献传递

泥河湾藉箕滩遗址土壤微生物的分离与系统发育分析被引量：2: 2017年; 采用平板稀释涂布法从泥河湾藉箕滩遗址土壤中分离微生物,结合菌株形态特征、生理生化特征及分子鉴定方法对分离到的微生物进行鉴定,以确定泥河湾藉箕滩遗址不同深度土层中微生物物种分布,为详细了解遗址土壤微生物物种多样性提供依据.结果表明:共分离鉴定到96株细菌、34株放线菌、15株真菌.根据同源性比对及构建系统发育进化树,确定细菌归属于芽孢杆菌属和短波单胞菌属;放线菌归属链霉菌属;真菌归属青霉属、曲霉属、被孢霉属和盐单胞菌藻.NHWB 1047,NHWA 1017,NHWF 1002等菌株与已知菌种相似度低于97%,可能为潜在新种.本研究首次从泥河湾藉箕滩遗址不同深度土层中分离鉴定微生物,是泥河湾考古研究的重要组成部分,为进一步了解史前时代生态环境提供了科学依据.; 吕春爽崔艳美梁思源水小溪赵亚超李忠达李越赵宝华刘东; 关键词：微生物扫描电镜观察

ELISA技术在食品安全检测中的应用被引量：21: 2008年; 本文综述了ELISA技术的基本原理、分类及在食品安全检测中的应用,对ELISA技术的优缺点进行了分析,并阐述了该技术的发展趋势。; 水小溪蔡乐赵宝华; 关键词：ELISA 食品安全

鸡致病性E.coli O_(24)基因工程包涵体疫苗的制备及免疫原性被引量：2: 2010年; 利用已构建的基因工程菌株BL21/pET-28a-pilA和BL21/pET-28a-ompC,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析分别可见表达的20ku和40.9ku的特异条带,确定蛋白以包涵体的形式存在.Western blot结果表明,表达的Ⅰ型菌毛蛋白(pilA基因编码)和外膜蛋白(ompC基因编码)可与抗体发生特异性结合,说明其具有良好的反应原性.将表达特异蛋白的重组菌株BL21/pET-28a-pilA和BL21/pET-28a-ompC分别制成基因工程包涵体疫苗,免疫小鼠后,具有很好的保护能力.ELISA结果显示,免疫的小鼠体内已产生相应的抗体,效价为1∶400,说明这2种疫苗有很好的免疫原性.表明这2株基因工程菌株有望作为鸡致病性大肠杆菌基因工程疫苗的候选生产菌株.; 水小溪李寒鸣蔡乐赵宝华张天兵; 关键词：OMPC 免疫原性

基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1 gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立: gp41是HIV-1表面的包膜糖蛋白（Env）成分,介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合,在HIV-1的侵染过程中起关键作用。gp41中的N末端重复序列（NHR）和C末端重复序列（CHR）通过相互作用形成关键的核心三聚体发夹...; 水小溪刘晨郑智慧路新华张华贺建功; 关键词：GP41 高通量筛选; 文献传递

基于哺乳动物单杂交技术ERα调节剂高通量筛选模型的建立及应用被引量：1: 2009年; 雌激素受体α(Estrogen receptor α,ERα)是一种类固醇核受体,在机体的多种生理功能中起关键作用。为了筛选新的ERα调节剂,本研究建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因技术的高通量ERα调节剂筛选模型。利用RT-PCR技术从脂肪组织总RNA中扩增ERα配体结合区(Ligand binding domain,ERαLBD)基因序列,并插入含GAL4DNA结合域的pBIND-GAL4表达质粒构建pBIND-GAL4-ERα(LBD)的嵌合表达质粒。该质粒与本室已构建好的含GAL4响应元件和荧光素酶的报告质粒pGL3-GAL4共转染,通过测定荧光素酶的活性评价ER调节剂的转录调剂的活性。经过多种条件优化,激动剂阳性药对照雌二醇可以剂量依赖地诱导荧光素酶的表达,最大上调倍增数可达28.1倍,EC50为0.17μmol/L。拮抗剂阳性对照它莫昔芬可以有效地拮抗雌二醇的活性,最大下调倍数为6.3倍,EC50为0.1μmol/L。该筛选模型可微量化于384孔板,且Z'因子均大于0.5。利用该模型从2000多个微生物和植物来源的天然产物以及合成化合物中筛选得到4个ERα激动剂。该模型灵敏、稳定,可以快速进行多种来源的ERα调节剂的筛选和活性评价。; 张倩水小溪范玉玲郝伟丽郑智慧路新华赵宝华张华贺建功; 关键词：ERΑ 激动剂拮抗剂共转染高通量筛选

致病性鸡大肠杆菌pilA和外膜蛋白C原核诱导表达条件的优化被引量：1: 2009年; 分别从温度、接菌量、诱导时机、IPTG浓度、诱导时间等条件对2种重组菌株BL21/pET-28a-pilA和BL21/pET-28a-ompC进行优化.得到最佳诱导条件:BL21/pET-28a-pilA菌株为40℃摇培,80μL的接菌量,160 r/min摇培2 h后加入终浓度为0.96 mmol/L的IPTG,再诱导表达4 h,得到最高特异蛋白表达量;BL21/pET-28a-ompC菌株为37℃培养,80μL的接菌量,160 r/min摇培2.5 h后加入终浓度为0.64 mmol/L的IPTG,再诱导表达6 h,得到最高特异蛋白表达量.; 水小溪蔡乐赵宝华; 关键词：OMPC 原核表达

人源温和气单胞菌溶血素基因的克隆与表达被引量：4: 2008年; 根据GenBank报道的人源温和气单胞菌溶血素(hly)基因序列设计引物,经PCR扩增,得到大小约为1470 bp的阳性产物.利用BamHⅠ,HindⅢ位点将hly基因片段克隆到pMD19-T载体,构建得到重组质粒pWT-hly,并比较所克隆基因序列的同源性.然后将该基因克隆到原核表达载体pET-28a,构建原核重组表达质粒pWET-hly,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE分析.结果表明:克隆的hly基因与GenBank报道的溶血素基因同源性为96.19%;重组菌株经IPTG诱导后,hly基因得到了高效表达.; 武斌于宙亮于珊水小溪宋杰赵宝华; 关键词：温和气单胞菌溶血素基因克隆

致病性鸡大肠杆菌pilA基因和外膜蛋白C基因的克隆、表达及其免疫原性被引量：7: 2008年; 根据GenBank公布的致病性鸡大肠杆菌的Ⅰ型菌毛pilA基因和外膜蛋白C基因序列,分别设计了两对引物,并以分离的致病性鸡大肠杆菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出pilA基因和ompC基因,基因产物大小为别为549bp和1104bp,与GenBank报道的参考菌株的两个基因序列的同源性为高达98.18%和97.28%。将扩增得到的两个基因分别定向克隆到原核表达载体pET-28a中,得到两个重组质粒pETpilA和pETompC,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21(pETpilA)和BL21(pETompC),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析分别可见表达的20kD和40.9kD的特异条带;Westernblotting结果表明,两种蛋白可与抗体发生特异性结合,说明其具有良好的免疫原性。将表达的菌毛蛋白和外膜蛋白的菌株分别制成基因工程疫苗,免疫小鼠后,具有很好的保护能力,表明这两株基因工程菌株有望作为鸡致病性大肠杆菌基因工程疫苗的候选生产菌株。; 于珊张倩水小溪于宙亮赵宝华; 关键词：鸡致病性大肠杆菌 I型菌毛外膜蛋白免疫原性

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水小溪